识别并结合制造技术

本发明专利技术公开了识别并结合

【技术实现步骤摘要】
识别并结合c
‑
MET蛋白的核酸适体及其应用


[0001]本专利技术属于生物领域，具体涉及一种识别并结合
c
‑
MET
蛋白的核酸适体及其应用
。

技术介绍

[0002]细胞间充质
‑
上皮转化因子
(cellular
‑
mesenchymal epithelial transition factor,c
‑
MET)
是一种由原癌基因
MET
编码
、
具有高度结合性的受体酪氨酸激酶，是目前已知唯一肝细胞生长因子
(hepatocyte growth factor,HGF)
的受体，因此又称肝细胞生长因子受体
(hepatocyte growth factor receptor,HGFR)。c
‑
MET
蛋白可促进细胞生长
、
增殖
、
迁移和分化等，在形态建成
、
伤口愈合和器官动态平衡等多个正常生命活动中扮演重要角色
。c
‑
MET
蛋白的异常表达可激活肿瘤细胞增殖
、
转移
、
侵袭和血管新生相关的信号通路；因此，在胃癌
、
肺癌
、
肝癌
、
乳腺癌
、
卵巢癌
、
肠癌
、
皮肤癌和前列腺癌等许多类型恶性肿瘤中都可检测到该蛋白的异常表达
。
据统计，在肺腺癌和肺肉瘤样癌中分别有3‑5％和
20
‑
30
％的
MET
基因突变，在胃癌中有
19
％的
c
‑
MET
蛋白表达异常，在肝癌中有高达
30
‑
100
％的
c
‑
MET
蛋白异常表达
。
鉴于
c
‑
MET
蛋白在癌症发生
、
发展过程中的关键作用以及其异常表达在癌症中的高发生率，对
c
‑
MET
蛋白的识别和干预已成为目前癌症治疗的重要策略之一
。
[0003]核酸适体
(aptamer)
是一段由
10
～
150
个碱基组成的单链寡聚核苷酸，其利用基于指数富集配基的系统进化技术
(Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment
，
SELEX)
筛选得到的
、
能与靶标物质高特异性
、
强亲和力结合
。
核酸适体识别机制与蛋白抗体相似，可体外化学合成，被称为“化学抗体”。
利用
SELEX
技术能筛选出针对活细胞和组织等复杂靶标的核酸适体与单克隆抗体具有相似的识别功能，但与单克隆抗体相比，核酸适体具有多方面的特点和优势：核酸适体具有较低毒性和免疫源性，水溶性好；对靶标物质具有高亲和力，其结合解离常数
(Kd)
通常可达到
nmol/L
；一般由
10
‑
100
个核苷酸组成，分子量
(
在3‑
50kD
之间
)
远小于抗体
(
约
150kD)
，分子量和空间结构小，结构研究更简单；易于修饰和改造，可根据需要进行任何荧光基团
、
连接臂等结构的修饰与标记，可对整个核酸适体进行改造
。
[0004]基于上述优点，核酸适体作为新型的仿生识别元素，已在疾病诊断与治疗
、
药物筛选
、
分子识别和分析检测等众多领域得到了广泛的应用
。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是如何识别和
/
或结合
c
‑
MET
蛋白
。
[0006]为了解决以上技术问题，本专利技术提供了识别并结合人
c
‑
MET
蛋白的核酸适体
。
[0007]本专利技术提供的核酸适体为如下
A)
或
B)
：
[0008]A)
所述核酸适体的结构式为式1：5’‑
X1GGAGGAX2TCCGACCGTGTTCGTTTGTTATAX3‑3’
，
[0009]式1中，
X1和
X3均由5至
10
个脱氧核苷酸构成，
X1和
X3在核苷酸序列上反向互补，
X2由2‑
21
个脱氧核苷酸构成，脱氧核苷酸为脱氧腺苷酸
、
脱氧鸟苷酸
、
脱氧胞苷酸或脱氧胸苷酸；式1所包含序列不包括
SEQ ID No.1
和
SEQ ID No.15
的单链
DNA
分子；
[0010]B)
上述核酸适体中，
B
所示的核酸适体为如下
1)
‑
13)
中任一种：
[0011]1)
核苷酸序列是
SEQ ID No.2
的单链
DNA
分子，
[0012]2)
核苷酸序列是
SEQ ID No.3
的单链
DNA
分子，
[0013]3)
核苷酸序列是
SEQ ID No.4
的单链
DNA
分子，
[0014]4)
核苷酸序列是
SEQ ID No.5
的单链
DNA
分子，
[0015]5)
核苷酸序列是
SEQ ID No.6
的单链
DNA
分子，
[0016]6)
核苷酸序列是
SEQ ID No.7
的单链
DNA
分子，
[0017]7)
核苷酸序列是
SEQ ID No.8
的单链
DNA
分子，
[0018]8)
核苷酸序列是
SEQ ID No.9
的单链
DNA
分子，
[0019]9)
核苷酸序列是
SEQ ID No.10
的单链
DNA
分子，
[0020]10)
核苷酸序列是
SEQ ID No.11
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
核酸适体，其特征在于：所述核酸适体的结构式为式1：5’‑
X1GGAGGAX2TCCGACCGTGTTCGTTTGTTATAX3‑3’
式1，式1中，
X1和
X3均由5至
10
个脱氧核苷酸构成，
X1和
X3在核苷酸序列上反向互补，
X2由2‑
21
个脱氧核苷酸构成，脱氧核苷酸为脱氧腺苷酸
、
脱氧鸟苷酸
、
脱氧胞苷酸或脱氧胸苷酸，式1不包含序列
SEQIDNo.1
单链
DNA
分子和
SEQIDNo.15
的单链
DNA
分子
。2.
根据权利要求1所述的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体为如下任一单链
DNA
分子：
1)
核苷酸序列是
SEQIDNo.2
的单链
DNA
分子，
2)
核苷酸序列是
SEQIDNo.3
的单链
DNA
分子，
3)
核苷酸序列是
SEQIDNo.4
的单链
DNA
分子，
4)
核苷酸序列是
SEQIDNo.5
的单链
DNA
分子，
5)
核苷酸序列是
SEQIDNo.6
的单链
DNA
分子，
6)
核苷酸序列是
SEQIDNo.7
的单链
DNA
分子，
7)
核苷酸序列是
SEQIDNo.8
的单链
DNA
分子，
8)
核苷酸序列是
SEQIDNo.9
的单链
DNA
分子，
9)
核苷酸序列是
SEQIDNo.10
的单链
DNA
分子，
10)
核苷酸序列是
SEQIDNo.11
的单链
DNA
分子，
11)
核苷酸序列是
SEQIDNo.12
的单链
DNA
分子，
12)
核苷酸序列是
SEQIDNo.13
的单链
DNA
分子，
13)
核苷酸序列是
SEQIDNo.14
的单链
DNA
分子
。3.
权利要求1或2所述核酸适体的衍生物，为如下任一种：
(1)
将所述核酸适体经过核苷酸的取代和
/
或缺失和
/
或添加得到的具有识别并结合人
c
‑
MET
蛋白的功能的核酸适体；
(2)
将所述核酸适体进行修饰得到的具有识别并结合人
c
‑
MET
蛋白的功能的化合物；
(3)
将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸脂骨架得到的具有识别并结合人
c
‑
MET
蛋白的功能的化合物；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：上官棣华，张楠，隆振豪，刘祥军，
申请(专利权)人：中国科学院化学研究所，
类型：发明
国别省市：