一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法技术

本申请涉及动物模型技术领域，尤其涉及一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法；所述建立方法包括：麻醉动物模型，并进行脱毛和消毒，后分别在动物模型的咬肌和胫骨前肌的浅面皮肤处制备预设尺寸的切口，并进行术区暴露，得到咬肌暴露损伤区域和胫骨前肌暴露损伤区域；分别采用干冰对咬肌暴露损伤区域和胫骨前肌暴露损伤区域进行冰冻至暴露损伤区域内肌肉发白为止，后等待肌肉回复至初始状态，得到咬肌创伤区域和胫骨前肌创伤区域；分别对咬肌创伤区域和胫骨前肌创伤区域进行取样并制备冰冻切片，后将两种冰冻切片进行组织形态的对比，得到口颌肌纤维化模型；该方法可以在成本较低的前提下准确模拟口颌肌创伤修复纤维化的模型

【技术实现步骤摘要】
一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法


[0001]本申请涉及动物模型
，尤其涉及一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法
。

技术介绍

[0002]咬肌
、
口轮匝肌
、
腭帆提肌等口颌肌是骨骼肌系统的重要组成部分，而口颌肌发育不足造成的颌面发育畸形可致患者面型异常
、
咬合紊乱
、
发音障碍，甚至引发呼吸道并发症，严重影响患者的生活质量
。
口颌肌在胚胎发育过程
、
成肌调控机制
、
肌肉疾病的易感性和再生能力等多方面特异性使其具有特殊的研究意义和临床价值；同时肢体肌肉如胫骨前肌
、
股四头肌等受到急性损伤后通常展现出高效的再生能力，原始肌纤维结构在损伤后两周就得以重建，而口颌肌需要经历漫长的再生过程，并在修复早期出现广泛纤维化
。
目前针对肢体肌肉损伤后修复再生机制的研究，已有丰富而成熟的动物模型，包括物理
、
化学
、
缺血
/
再灌注损伤等，但其在口颌肌表型中未被证实，因此有必要建立合适的口颌肌损伤模型，并利用该损伤模型为机制探究提供实验支持
。
[0003]在既往肢体肌肉损伤修复再生模型的构建过程中，主要包括心脏毒素注射
、
低浓度氯化钡注射和肌内高渗甘油注射等，但是上述方法所构建的模型存在各种缺点，并且药物成本较高；虽然目前常采用极限缺损模型观察骨骼肌损伤之后功能的恢复，更贴近临床中肌肉体积的丢失，但该模型造成的缺损较为严重，难以准确模拟口颌肌损伤
。
因此如何提供一种可准确模拟
、
稳定重复且成本较低的建立口颌肌纤维化模型的方法，是目前亟需解决的技术问题
。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法，以解决现有技术中口颌肌纤维化模型的建立方法存在成本高且难以准确模拟口颌肌损伤的技术问题
。
[0005]第一方面，本申请提供了一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法，所述建立方法包括：
[0006]麻醉动物模型，并进行脱毛和消毒，后分别在所述动物模型的咬肌和胫骨前肌的浅面皮肤处制备预设尺寸的切口，并进行术区暴露，得到咬肌暴露损伤区域和胫骨前肌暴露损伤区域；
[0007]分别采用干冰对所述咬肌暴露损伤区域和所述胫骨前肌暴露损伤区域进行冰冻至暴露损伤区域内肌肉发白为止，后等待所述肌肉回复至原始状态，得到咬肌创伤区域和胫骨前肌创伤区域；
[0008]分别对所述咬肌创伤区域和所述胫骨前肌创伤区域进行取样并制备冰冻切片，后将两种冰冻切片进行组织形态的对比，得到口颌肌纤维化模型
。
[0009]可选的，所述预设尺寸包括
5mm
±
1mm。
[0010]可选的，所述干冰为圆柱形干冰，所述干冰的直径为
3.5mm
±
0.5mm
，所述干冰的长
度为
4mm
±
1mm。
[0011]可选的，所述冰冻的时间为
5s。
[0012]可选的，所述等待的时间为
20s
～
25s。
[0013]可选的，所述取样的时刻为所述咬肌创伤区域或所述胫骨前肌创伤区域形成的
14d
后
。
[0014]可选的，所述制备冰冻切片包括组织固定，所述组织固定的温度
≤
‑
20℃。
[0015]可选的，所述固定组织的时间为
10min
～
20min。
[0016]可选的，所述制备冰冻切片包括口颌肌收集阶段，所述口颌肌收集阶段包括采用相邻阶段间隔
500
μ
m
的方式收集口颌肌组织样品
。
[0017]可选的，所述动物模型为5～6周龄，所述动物模型的体重重量为
18g
～
20g。
[0018]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0019]本申请实施例提供的一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法，由于冰冻法可以通过标准化损伤温度和损伤时间来获得一致性的建模操作，因此具有高度的可重复性，因此利用冰冻法对咬肌损伤区域的口颌肌肌肉进行冰冻损伤，相较于化学药品注射和极限缺损模型法，由于仅需要采用冰冻介质，可以有效的降低动物模型建立的成本，该法暴露创面较小，同时再引入肢体肌肉
(
如胫骨前肌
)
作为对照，可以更为直观的观察到口颌肌纤维化的特异性，因此该方法可以在成本较低的前提下准确模拟口颌肌创伤修复纤维化的模型
。
附图说明
[0020]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理
。
[0021]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图
。
[0022]图1为本申请实施例提供的冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法的流程示意图；
[0023]图2为本申请实施例提供的冰冻损伤操作台面示意图，其中，图
2A
为小鼠摆放体位及损伤所需计时器示意图，图
2B
为直径
3.5mm
圆柱状干冰示意图；
[0024]图3为本申请实施例提供的小鼠咬肌
、
胫骨前肌冰冻损伤操作步骤示意图，其中，图
3A
为小鼠咬肌浅面皮肤的脱毛示意图，图
3B
为小鼠咬肌浅面皮肤的切口示意图，图
3C
为小鼠咬肌浅面皮肤的干冰放置位置示意图，图
3D
为小鼠咬肌浅面皮肤的冰冻后肌肉发白示意图，图
3E
为小鼠咬肌的肌肉表面恢复原始形态的示意图，图
3F
为小鼠咬肌的皮肤缝合示意图，图
3G
为小鼠胫骨前肌浅面皮肤脱毛示意图，图
3H
为小鼠胫骨前肌浅面皮肤的切口示意图，图
3I
为小鼠胫骨前肌浅面皮肤的干冰放置位置示意图，图
3J
为小鼠胫骨前肌浅面皮肤的冰冻后肌肉发白示意图，图
3K
为小鼠胫骨前肌的肌肉表面恢复原始形态的示意图，图
3L
为小鼠胫骨前肌皮肤缝合示意图；
[0025]图4为本申请实施例提供的制备小鼠咬肌
、
胫骨前肌冰冻切片前取材和包埋操作步骤的示意图，其中，图
4A
为小鼠咬肌冰冻切片前取材的操作示意图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种冰冻损伤诱导的口颌肌纤维化模型的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括：麻醉动物模型，并进行脱毛和消毒，后分别在所述动物模型的咬肌和胫骨前肌的浅面皮肤处制备预设尺寸的切口，并进行术区暴露，得到咬肌暴露损伤区域和胫骨前肌暴露损伤区域；分别采用干冰对所述咬肌暴露损伤区域和所述胫骨前肌暴露损伤区域进行冰冻至暴露损伤区域内肌肉发白为止，后等待所述肌肉回复至初始状态，得到咬肌创伤区域和胫骨前肌创伤区域；分别对所述咬肌创伤区域和所述胫骨前肌创伤区域进行取样并制备冰冻切片，后将两种冰冻切片进行组织形态的对比，得到口颌肌纤维化模型
。2.
根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述预设尺寸包括
5mm
±
1mm。3.
根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述干冰为圆柱形干冰，所述干冰的直径为
3.5mm
±
0.5mm
，所述干冰的长度为
4mm
±
1mm。4.
根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述冰冻的时间为
5s...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄艺璇，程旭，李精韬，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：