具有增强的迁移能力的修饰的细胞制造技术

本发明专利技术实施方案涉及包含抗原结合分子的修饰的

【技术实现步骤摘要】
具有增强的迁移能力的修饰的细胞
[0001]本申请是针对申请号为
201911203998.4
专利技术专利申请的分案申请，原申请的申请日为：
2019
年
11
月
29
日，优先权号为
CN201811440257.3
，优先权日为
2018
年
11
月
29
日，专利技术创造名称为：具有增强的迁移能力的修饰的细胞，原申请的全部内容以引用的方式并入本申请
。


[0002]本公开涉及与嵌合抗原受体细胞有关的组合物和方法及其在治疗包括癌症在内的疾病中的用途
。

技术介绍

[0003]癌症被称为恶性肿瘤，涉及异常细胞生长，并有可能侵袭或扩散到身体的其他部位
。
在人类中，有一百多种癌症
。
通常，一旦癌细胞脱落，它们就会通过血液和
/
或淋巴系统扩散到整个身体，从而危及生命
。
当前，
CAR
‑
T
疗法似乎对治疗实体癌无效
。
挑战之一是
CAR
‑
T
细胞似乎无法有效地向扩散到体内的这些癌细胞迁移
。

技术实现思路

[0004]实施方案涉及包含抗原结合分子修饰的
T
细胞，其中
CDC42
在修饰的细胞中的表达和
/
或功能已经增强
。r/>在实施方案中，与不过度表达
CDC42
的相应
T
细胞相比，修饰的细胞响应于抗原结合分子结合的抗原而具有增加的细胞因子释放水平
。
在实施方案中，细胞因子释放包括
IFN
γ
或
GRAM B
的细胞因子释放
。
在实施方案中，与不过度表达
CDC42
的相应
T
细胞相比，修饰的细胞对趋化因子具有增强的迁移能力
。
[0005]本
技术实现思路
不旨在标识所要求保护的主题的关键特征或必要特征，也不旨在用于限制所要求保护的主题的范围
。
附图说明
[0006]参照附图描述具体实施方式
。
在不同附图中使用相同的参考数字表示类似或相同的项目
。
[0007]图1显示了
CAR
构建体的实例和
CAR T
细胞的实例；
[0008]图2显示了细胞计数测定结果，表明
CDC42
序列不影响
CAR
在
T
细胞上的表达；
[0009]图3显示了细胞计数测定结果，表明
CDC42
序列不影响
CAR T
细胞的活化；
[0010]图4显示了
CDC42
表达增强了
CAR
活化后
GRAM B
和
IFN
‑
γ
的释放；
[0011]图5显示
CDC42
在
CAR T
细胞中成功表达；
[0012]图6显示表达
CDC42
的
GUCY2C CAR T
细胞的迁移能力明显强于对照组；
[0013]图7显示了指示
ShRNA1
序列不影响
CAR
在
T
细胞上的表达的细胞计数分析结果，并且还显示了指示
ShRNA1
序列不影响
CAR T
细胞的活化的细胞计数分析结果；
[0014]图8显示
ShRNA1
表达增强了
Gram B
和
IFN
‑
γ
的释放
。
具体实施方式
[0015]除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义
。
尽管可以在本公开的实践或测试中使用与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料，但是还是描述了优选的方法和材料
。
为了本公开的目的，以下术语定义如下
。
[0016]本文使用冠词“一个
/
种
(a/an)”指的是一个或多于一个
(
即，指的是至少一个
)
该冠词的语法对象
。
举例来说，“一个元件
/
要素”表示一个元件
/
要素或多于一个元件
/
要素
。
[0017]“约”是指数量，水平，数值，数目，频率，百分比，尺寸，大小，量，重量或长度相对于参考数量，水平，数值，数目，频率，百分比，尺寸，大小，量，重量或长度变化多达
20
％
,15
％
,10
％
,9
％
,8
％
,7
％
,6
％
,5
％
,4
％
,3
％
,2
％或1％
。
[0018]如本文所用，术语“活化”或“激活”是指已经被充分刺激以诱导可检测的细胞增殖的细胞状态
。
活化或激活还可以与诱导的细胞因子产生可检测的效应子功能相关联
。
术语“活化
(
或激活的
)
的
T
细胞”特别指正在进行细胞分裂的
T
细胞
。
[0019]术语“抗体”以最广义使用，是指单克隆抗体
(
包括全长单克隆抗体
)
，多克隆抗体，多特异性抗体
(
例如双特异性抗体
)
和抗体片段，只要它们表现出所需的生物学活性或功能即可
。
本公开内容中的抗体可以以多种形式存在，包括例如多克隆抗体
、
单克隆抗体
、Fv、Fab、Fab'
和
F(ab)2及其片段；以及单链抗体和人源化抗体
(Harlow
等人
,1999,In:Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY
；
Harlow
等人
,1989,In:Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York
；
Houston
等人
,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种包含抗原结合分子的修饰的
T
细胞，其中所述修饰的
T
细胞包含抗原结合分子，并且所述抗原结合分子是嵌合抗原受体
(CAR)
；其中所述修饰的
T
细胞中
CDC42
的表达和
/
或功能被增强；所述修饰的
T
细胞包含编码
SEQ ID NO:38
的多核苷酸，所述修饰的
T
细胞含有表达
CAR
分子的载体，其结构为
5F9
‑
CD8hinge
‑
41BB
‑
CD3
ζ
，所述
5F9
所示的
scFV
的核苷酸序列为
SEQ ID NO.39。2.
根据权利要求1所述的修饰的
T
细胞，其中与不过度表达
CDC42
的相应
T
细胞相比，所述修饰的
T
细胞抗原结合分子响应于其结合的抗原而具有增加的细胞因子释放水平和
/
或蛋白酶释放水平
。3.
权利要求2所述的修饰的
T
细胞，其中所述细胞因子释放包括
IFN
γ
细胞因子的释放，其中所述蛋白酶释放包括
GRAM B
蛋白酶的释放
。4.
权利要求1所述的修饰的
T
细胞，其中与不过度表达
CDC42
的相应
T
细胞相比，所述修饰的细胞对趋化因子具有增强的迁移能力
。5.
权利要求4所述的修饰的
T
细胞，其中所述趋化因子是
CCL5。6.
权利要求1所述的修饰的
T
细胞，所述嵌合抗原受体包含抗原结合结构域，跨膜结构域和细胞内信号传导结构域
。7.
权利要求6的修饰的
T
细胞，其中与肿瘤抗原结合的抗原结合结构域选自：
TSHR
，
CD19
，
CD123
，
CD22
，
CD30
，
CD171
，
CS
‑1，
CLL
‑1，
CD33
，
EGFRvIII
，
GD2
，
GD3
，
BCMA
，
Tn Ag
，
PSMA
，
ROR1
，
FLT3
，
FAP
，
TAG72
，
CD38
，
CD44v6
，
CEA
，
EPCAM
，
B7H3
，
KIT
，
IL
‑
13Ra2
，间皮素，
IL
‑
11Ra
，
PSCA
，
PRSS21
，
VEGFR2
，
LewisY
，
CD24
，
PDGFR
‑
beta
，
SSEA
‑4，
CD20
，叶酸受体
α
，
ERBB2(Her2/neu)
，
MUC1
，
EGFR
，
NCAM
，蛋白酶，
PAP
，
ELF2M
，
Ephrin B2
，
IGF
‑1受体，
CAIX
，
LMP2
，
gp100
，
bcr
‑
abl
，酪氨酸酶，
EphA2
，岩藻糖基
GM1
，
sLe
，
GM3
，
TGS5
，
HMWMAA
，
o
‑
乙酰基
GD2
，叶酸受体
β
，
TEM1/CD248
，
TEM7R
，
CLDN6
，
GPRC5D
，
CXORF61
，
CD97
，
CD179a
，
ALK
，多唾液酸，
PLAC1
，
GloboH
，
NY
‑
BR
‑1，
UPK2
，
HAVCR1
，
ADRB3
，
PANX3
，
GPR20
，
LY6K
，
OR51E2
，
TARP
，
WT1
，
NY
‑
ESO
‑1，
LAGE
‑
1a
，
MAGE
‑
A1
，
legumain
，
HPV E6
，
E7
，
MAGE A1
，
ETV6
‑
AML
，精子蛋白
17
，
XAGE1
，
Tie 2
，
MAD
‑
CT
‑1，
MAD
‑
CT
‑2，
Fos
相关抗原1，
p53
，
p53
突变体，
prostein
，存活素和端粒酶，
PCTA
‑
1/Galectin 8
，
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒲程飞，曹志远，肖磊，孙赫，
申请(专利权)人：浙江煦顼技术有限公司，
类型：发明
国别省市：