CAR-DC制造技术

本申请涉及一种

【技术实现步骤摘要】
CAR
‑
DC细胞及其制备方法和应用


[0001]本申请涉及免疫
，尤其涉及一种
CAR
‑
DC
细胞及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤（
Multiple Myeloma
，
MM
）是一种浆细胞的恶性肿瘤，特征是浆细胞恶性地
、
无节制地增生，抑制免疫球蛋白的分泌，从而引起广泛骨质破坏
、
反复感染
、
贫血
、
高钙血症
、
高粘滞综合征
、
肾功能不全等一系列临床表现并导致不良后果
。
多发性骨髓瘤是全球第二大常见的恶性血液肿瘤，且发病率呈升高趋势
。
[0003]因此，如何杀灭多发性骨髓瘤细胞，治疗多发性骨髓瘤，成为本领域技术人员亟待解决的问题
。

技术实现思路

[0004]为了杀灭多发性骨髓瘤细胞，治疗多发性骨髓瘤，本申请提供一种
CAR
‑
DC
细胞及其制备方法和应用
。
[0005]为实现本专利技术目的所提供的一种
CAR
‑
DC
细胞的制备方法，包括以下步骤：制备编码
CAR
结构的第一核酸构建体和编码
TRAIL
的第二核酸构建体，所述
CAR
结构能够特异性识别
BCMA
受体，所述
TRAIL
为凋亡诱导配体，所述
TRAIL
能够与肿瘤细胞的死亡受体结合，其中，所述
CAR
结构的编码序列如
SEQ ID No
：1所示；将第一核酸构建体和第二核酸构建体作为外源性核酸导入
DC
细胞，得到
CAR
‑
DC
细胞
。
[0006]根据本专利技术的另一方面提供一种
CAR
‑
DC
细胞，采用所述
CAR
‑
DC
细胞的制备方法制备得到
。
[0007]根据本专利技术的另一方面提供一种
CAR
‑
DC
细胞的应用，采用所述
CAR
‑
DC
细胞的制备方法制备得到的
CAR
‑
DC
细胞在制备治疗多发性骨髓瘤的药物或制剂方面的应用
。
[0008]本专利技术通过向
DC
细胞导入编码
CAR
结构的第一核酸构建体和编码
TRAIL
的第二核酸构建体，得到的
CAR
‑
DC
细胞膜表达
CAR
结构和
TRAIL
凋亡诱导配体，其中
TRAIL
为凋亡诱导配体，能够与肿瘤细胞的死亡受体结合，促进肿瘤细胞的凋亡，从而使
DC
细胞在抗原呈递的自源性功能之外，额外增加了杀灭肿瘤细胞的功能
。DC
细胞在接触多发性骨髓瘤细胞，进行抗原提取的过程中，同时进行肿瘤细胞的杀灭，并且
DC
细胞依旧保留抗原呈递功能，能够激活
T
细胞，与
T
细胞一起进行肿瘤细胞的杀灭
。
而
CAR
结构能够特异性识别
BCMA
受体，所以
CAR
‑
DC
细胞能够靶向多表达
BCMA
受体的多发性骨髓瘤细胞，特异性抓取靠近多发性骨髓瘤细胞，增强
TRAIL
促进肿瘤细胞凋亡的效果，针对性杀灭多发性骨髓瘤细胞，治疗多发性骨髓瘤
。
附图说明
[0009]图1示出本专利技术实施例的
DC
细胞负载第二核酸构建体并表达
TRAIL
的流式分析结
果；图2示出本专利技术实施例的
CAR
‑
DC
细胞表达
CAR
结构的蛋白免疫印迹检测结果；图3示出本专利技术实施例的
KAS6L
‑
BCMA
细胞表达
BCMA
的流式分析结果；图4示出本专利技术实施例的
HelaL
‑
BCMA
细胞表达
BCMA
的流式分析结果；图5示出本专利技术实施例的导入核酸构建体前，初始
DC
细胞的表达
CD4
的流式分析结果；图6示出本专利技术实施例的
KAS6L
关于
CD4
的流式分析结果；图7示出本专利技术实施例的
CAR
‑
DC
细胞对
KAS6L
‑
BCMA
细胞的杀伤效果；图8示出本专利技术实施例的
CAR
‑
DC
细胞对
HelaL
‑
BCMA
细胞的杀伤效果
。
具体实施方式
[0010]本专利技术中所使用的术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量和先后顺序
。
[0011]另外，为了更好的说明本申请，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节
。
本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本申请同样可以实施
。
在一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法手段未作详细描述，以便于凸显本申请的主旨
。
[0012]图1示出本专利技术实施例的
DC
细胞负载第二核酸构建体并表达
TRAIL
的流式分析结果，由图1可知
DC101
‑
TRAIL
细胞表达
TRAIL
，则向
DC101
‑
TRAIL
细胞导入第一核酸构建体得到的
CAR
‑
DC
细胞也能够表达
TRAIL
；图2示出本专利技术实施例的
CAR
‑
DC
细胞表达
CAR
结构的蛋白免疫印迹检测结果；图3示出本专利技术实施例的
KAS6L
‑
BCMA
细胞表达
BCMA
的流式分析结果；图4示出本专利技术实施例的
HelaL
‑
BCMA
细胞表达
BCMA
的流式分析结果；图5示出本专利技术实施例的导入核酸构建体前，初始
DC
细胞（即
DC101
）的表达
CD4
的流式分析结果；图6示出本专利技术实施例的...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
CAR
‑
DC
细胞的制备方法，其特征在于，包括：制备编码
CAR
结构的第一核酸构建体和编码
TRAIL
的第二核酸构建体，所述
CAR
结构能够特异性识别
BCMA
受体，所述
TRAIL
为凋亡诱导配体，所述
TRAIL
能够与肿瘤细胞的死亡受体结合，其中，所述
CAR
结构的编码序列如
SEQ ID No
：1所示；将第一核酸构建体和第二核酸构建体作为外源性核酸导入
DC
细胞，得到
CAR
‑
DC
细胞
。2.
根据权利要求1所述的
CAR
‑
DC
细胞的制备方法，其特征在于，所述
TRAIL
的编码序列如
SEQ ID No
：2所示
。3.
根据权利要求1所述的
CAR
‑
DC
细胞的制备方法，其特征在于，利用所述第一核酸构建体和所述第二核酸构建体感染培养
DC
细胞，得到
CAR
‑
DC
细胞
。4.
根据权利要求3所述的
CAR
‑
DC
细胞的制备方法，其特征在于，所述感染培养步骤使用的培养基为
RPMI1640
培养基
。5.
根据权利要求3所述的
CAR
‑
DC
细胞的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕春萍，王建开，杨雅楠，于耀程，
申请(专利权)人：北京翊博生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：