T制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及

【技术实现步骤摘要】
T淋巴细胞制剂中的CD3抗体残留物的检测方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及
T
淋巴细胞制剂中的
CD3
抗体残留物的检测方法和试剂盒
。

技术介绍

[0002]T
细胞免疫疗法是目前临床试验上最受关注和发展最快的肿瘤治疗方法之一
。
其基本操作是将患者自身的或经基因修饰的肿瘤特异性
T
细胞在体外纯化
、
激活
、
扩增培养制备成
T
淋巴细胞制剂，再回输到患者体内，利用
T
淋巴细胞的特异性杀伤作用实现靶向清除肿瘤细胞的目的
。
[0003]CD3
抗体是
T
细胞体外活化最常用的抗体
。
研究表明，
TCR/CD3
与抗原提呈细胞（
APCs
）表面特异的
MHCⅡ抗原肽复合物结合产生的特异性抗原刺激信号是体内诱导
T
细胞的活化最重要的信号之一；在体外联合使用
CD3
抗体刺激
T
细胞，模拟
T
细胞活化的信号作用，是进行
T
细胞激活与扩增应用最广泛的方法
。T
淋巴细胞制剂中
CD3
抗体残留物的含量是
T
细胞制剂质量评价的重要参数之一，对细胞制剂产品的安全性和质量可控性水平都非常重要
。
目前现有的方法在
CD3
抗体残留物较少的情况下很难被检测到，特别是在
ng/mL
级别上的
CD3
抗体残留物检测准确度较低
。
因此建立一种高效，操作简便且准确度高的
T
淋巴细胞制剂中的
CD3
抗体残留物检测方法非常重要
。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术目的在于建立一种高效，操作简便且准确度高的
T
淋巴细胞制剂中的
CD3
抗体残留物检测方法
。
本专利技术提供了
T
淋巴细胞制剂中的
CD3
抗体残留物的检测方法和试剂盒
。
本专利技术通过实验发现本专利技术测出的
CD3
抗体残留准确度高，能够准确反应测定样品
CD3
抗体的微量残余
。
本专利技术检测范围可达到
12.5~800 pg/mL
，相对回收率（
RE%
）在
80%~120%
之间，为客观评价
T
淋巴细胞制剂的质量提供更准确的数据参考
。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了
T
淋巴细胞制剂中的
CD3
抗体残留物的检测方法，其包括如下步骤：步骤
1、
取抗原包被于载体，清洗，封闭；步骤
2、
清洗；标准品组加入标准品溶液；试验组加入供试品溶液；孵育，清洗；步骤
3、
空白对照组
、
所述标准品组和所述试验组分别加入标记抗体，孵育，清洗，显色，终止，于
450 nm
波长下分别获得所述空白对照组
、
所述标准品组和所述试验组的吸光度数据；步骤
4、
以所述标准品组的吸光度数据减去所述空白对照组吸光度数据为纵坐标，以所述标准品溶液的浓度为横坐标，采用
Logistic
曲线拟合获得标准曲线，根据所述试验
组的吸光度数据，通过所述标准曲线获得所述
CD3
抗体残留物的检测结果；所述抗原为
CD3E&CD3D
异二聚体蛋白；所述标准品为
Anti
‑
Human CD3 mAB
；所述供试品为含
CD3
抗体为原料的
T
淋巴细胞制剂
。
[0006]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述
T
淋巴细胞制剂包括中央记忆型
T
淋巴细胞制剂
。
[0007]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述
CD3E&CD3D
异二聚体蛋白的包被量为
0.1 μ
g/
单位载体；所述抗原包被的条件为
2~8℃
下包被过夜；所述清洗的洗液为磷酸钠盐；所述清洗的次数为3次
。
[0008]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述载体为酶标板；在本专利技术的一些具体实施方案中，所述
CD3E&CD3D
异二聚体蛋白的包被量为
0.1 μ
g/
孔
。
[0009]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述磷酸钠盐为1×
PBST。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述1×
PBST
的制备方法包括：取
PBS
粉末1袋，加
2 L
灭菌注射用水，充分溶解；再加入
1 mL Tween20
，充分混匀，获得所述1×
PBST。
[0011]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述清洗的条件为3次，每次用量为
300 μ
L/
单位载体
。
[0012]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭的时间为1小时；所述封闭所采用的封闭液为含质量体积比为
2%BSA
的
PBST
溶液或含质量体积比为
5%
脱脂奶粉的
PBST
溶液
。
[0013]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭液的用量为
300 μ
L/
单位载体
。
[0014]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭所采用的封闭液为含质量体积比为
2%BSA
的
PBST
溶液
。
[0015]在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤2所述孵育为
25℃
±
5℃
孵育2小时
。
[0016]在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤3所述孵育为
25℃
±
5℃
避光孵育1小时
。
[0017]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述标记抗体溶液的浓度为
0.05
μ
g/
单位载体
。
[0018]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述标记抗体的标记物为辣根过氧化物酶（
HRP
）
、
生物素（
Biotin
）
、
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.T
淋巴细胞制剂中的
CD3
抗体残留物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤
1、
取抗原包被于载体，清洗，封闭；步骤
2、
清洗；标准品组加入标准品溶液；试验组加入供试品溶液；孵育，清洗；步骤
3、
空白对照组
、
所述标准品组和所述试验组分别加入标记抗体，孵育，清洗，显色，终止，于
450 nm
波长下分别获得所述空白对照组
、
所述标准品组和所述试验组的吸光度数据；步骤
4、
以所述标准品组的吸光度数据减去所述空白对照组吸光度数据为纵坐标，以所述标准品溶液的浓度为横坐标，采用
Logistic
曲线拟合获得标准曲线，根据所述试验组的吸光度数据，通过所述标准曲线获得所述
CD3
抗体残留物的检测结果；所述抗原为
CD3E&CD3D
异二聚体蛋白；所述标准品为
Anti
‑
Human CD3 mAB
；所述供试品为含
CD3
抗体为原料的
T
淋巴细胞制剂
。2.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述
T
淋巴细胞制剂包括中央记忆型
T
淋巴细胞制剂
。3.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述
CD3E&CD3D
异二聚体蛋白的包被量为
0.1 μ
g/
单位载体；所述抗原包被的条件为
2~8℃
下包被过夜；所述清洗的洗液为磷酸钠盐；所述清洗的次数为3次...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婷怡，薛庆磊，左慧晶，张墨轩，
申请(专利权)人：赛德特北京生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：