一种检测主动脉瘤壁制造技术

本发明专利技术公开了一种检测主动脉瘤壁

【技术实现步骤摘要】
一种检测主动脉瘤壁FAP含量的试剂盒、系统及应用


[0001]本专利技术属于医疗
，具体涉及一种检测主动脉瘤壁
FAP
含量的试剂盒
、
系统及应用
。

技术介绍

[0002]主动脉瘤是因血管中层病变引起的主动脉直径的扩张，其一旦进展成为主动脉夹层或破裂时，危险系数大增，
24
小时自然病死率达
50
％
。
根据
2022ACC/AHA
指南，目前对于主动脉瘤的手术指征的评估，主要依靠
CT
和超声测量主动脉瘤的直径和扩张速度，并不能很好的评估可能发生夹层和
/
或破裂的风险
。
[0003]在主动脉病变进程中，主动脉血管平滑肌细胞功能的失调是主动脉瘤发生发展中重要的病理过程
。
主动脉平滑肌细胞在经历过动脉瘤早期的凋亡后，逐渐由收缩表型转化为合成表型，进一步分化为不同的细胞亚群，其中肌成纤维细胞的比例逐渐增加
(
该细胞具有成纤维细胞的活性又兼有平滑肌细胞的收缩功能
)。
但是肌成纤维细胞不能完全代偿平滑肌细胞的收缩功能，导致管壁进一步扩张
。
[0004]成纤维激活蛋白
(fibroblast activation protein,FAP)
是一种Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白水解酶，在多种内源性多肽及多肽类药物的代谢中起着至关重要的作用
。FAP
一般不在正常组织中表达，在与炎症和细胞纤维化相关的疾病中表达明显，包括伤口愈合
、
类风湿性关节炎
、
骨关节炎
、
肝硬化和肺纤维化，反映活化的成纤维细胞的程度
。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述问题，提供了一种检测主动脉瘤壁
FAP
含量的试剂盒
、
系统及应用，通过检测主动脉瘤壁
FAP
含量作为检测对象，能够在较低检测成本的基础上对主动脉瘤壁的成纤维活性及纤维化程度进行预测
。
[0006]本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种检测主动脉瘤壁
FAP
含量的试剂盒，其特征在于，包括检测
FAP
表达量的试剂，
[0008]优选地，还包括检测方法的说明书，所述说明书记载如下方法：
[0009](1)
血浆提取：利用
EDTA
或肝素作为抗凝剂，标本采集后
30
分钟内于2‑
8℃3000
转
/
分离心
15min
，取上清做待检样品立即检测
。
[0010](2)ELISA
实验方法：
[0011]A.
包被封闭，用碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释，每孔加入
200ul
封闭液，
37℃
孵育1‑
2h
；孵育后洗涤封板膜；
[0012]B.
加样温育，将稀释的待检样品
100
μ
l
加入步骤
A
中已包被的反应孔中
(
同时做空白孔，倍比稀释的标准品孔，有条件可加做阴性对照孔及阳性对照孔作为质控点
)
，用封板膜封板后置
37℃
孵育1‑
2h
；孵育后洗涤封板膜；
[0013]C.
加抗体温育，在各孔中加入稀释好的生物素化抗体工作液
100
μ
l
，用封板膜封板后置
37℃
孵育
1h
；孵育后洗涤封板膜；
[0014]D.
加酶结合物温育，在各孔中加入稀释好的酶结合物工作液
100
μ
l
，用封板膜封板后置
37℃
避光孵育
30min
；孵育后洗涤封板膜；
[0015]E.
加显色底物，在各孔中加入
TMB
底物溶液
100
μ
l
；
[0016]F.
终止反应，于各反应孔中加入
2mol/L
硫酸
100
μ
l
，颜色由蓝色变为黄色
。
[0017]进一步地，步骤
A
中，用碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1‑
10
μ
g/ml。
[0018]进一步地，所述洗涤封板膜，具体操作为小心揭掉封板膜，放入洗板机，洗涤3‑5遍
。
[0019]进一步地，步骤
E
中，在各孔中加入
TMB
底物溶液
100
μ
l
，
37℃
避光反应
10
～
30min
，直到倍比稀释的标准品孔出现明显的颜色梯度为止
。
[0020]本专利技术还提供一种评估主动脉瘤壁
FAP
含量的系统，包括检测模块
、
测定
OD
值模块
、
计算模块；
[0021]所述检测模块使用上述所述检测方法；
[0022]所述测定
OD
值模块为：
10min
内，在酶标仪上，于
450nm
处，以空白对照孔调零后测各孔
OD
值；
[0023]所述计算模块为：根据标准品的浓度和
OD
值做标准曲线，然后根据标准曲线方程计算出样本浓度
。
[0024]血浆中
FAP
含量越高，主动脉瘤壁的成纤维活性及纤维化程度越高
。
[0025]本专利技术还提供了前述方案所述试剂盒
、
前述方案所述系统在预测主动脉瘤壁的成纤维活性及纤维化程度的试剂盒中的应用
。
[0026]本专利技术的有益效果是：采用
USCN
成纤维细胞激活蛋白
α
(FAPa)ELISA
检测试剂盒，利用酶联免疫吸附试验法对血浆进行检测
。
目前临床中尚无血浆检测指标物反映主动脉瘤壁的纤维化程度，且影像学
CTA
等检查亦无法判断主动脉瘤壁的病理严重程度
。
因此本研究前期研究结果已证实主动脉瘤壁中肌成纤维细胞高度表达
FAP
，且与主动脉的持续扩张密切相关
。
且部分
FAP
可通过分泌的形式入血，因此通过检测血浆
FAP
可间接反映
/
预测主动脉瘤壁的成纤维活性及纤维化程度
。
附图说明
[0027]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测主动脉瘤壁
FAP
含量的试剂盒，其特征在于，包括检测
FAP
表达量的试剂
。2.
根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括检测方法的说明书，所述说明书记载如下方法：
(1)
血浆提取：利用
EDTA
或肝素作为抗凝剂，标本采集后
30
分钟内于2‑
8℃3000
转
/
分离心
15min
，取上清做待检样品立即检测
。(2)ELISA
实验方法：
A.
包被封闭，用碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释，每孔加入
200ul
封闭液，
37℃
孵育1‑
2h
；孵育后洗涤封板膜；
B.
加样温育，将稀释的待检样品
100
μ
l
加入步骤
A
中已包被的反应孔中
(
同时做空白孔，倍比稀释的标准品孔，有条件可加做阴性对照孔及阳性对照孔作为质控点
)
，用封板膜封板后置
37℃
孵育1‑
2h
；孵育后洗涤封板膜；
C.
加抗体温育，在各孔中加入稀释好的生物素化抗体工作液
100
μ
l
，用封板膜封板后置
37℃
孵育
1h
；孵育后洗涤封板膜；
D.
加酶结合物温育，在各孔中加入稀释好的酶结合物工作液
100
μ
l
，用封板膜封板后置
37℃
避光孵育
30min
；孵育后洗涤封板膜；
E.
加显色底物，在各孔中加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡诚凯，谭辉，王利新，赖颢，程登峰，吴忱烨，张宇翀，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：