一种用于骨骼肌损伤标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于骨骼肌损伤标志物

【技术实现步骤摘要】
一种用于骨骼肌损伤标志物miRNA
‑
206及IL
‑
6联检的荧光可视化方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医学领域
。
具体涉及一种用于同时检测骨骼肌损伤标志物
miRNA
‑
206
及
IL
‑6荧光探针及试剂盒，并将其用于实际血液样品中
miRNA
‑
206
及
IL
‑6的荧光检测
。

技术介绍

[0002]在运动过程中，肌肉疲劳被视为一种安全机制，但若持续肌肉疲劳（
MF
），则肌肉细胞和支持组织的结构损伤即肌肉劳损（
MS
）就会发生，因此，
MF
程度可作为
MS
的早期检测依据
。
目前临床上对
MS
诊断主要以影像学为主，如超声成像（
Sports health., 2017, 9(4), 352
）和核磁共振成像（
Radiographics,2018, 38(1), 124
），但是这些方法仅能帮助临床医生确定
MS
的严重程度，无法实现早期诊断和预防
。MS
早期诊断方法主要以肌电信号监测（
IEEE T. Neur. Sys. Reh., 2017, 25(9), 1472
）和生化指标（
Am.J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol., 2015, 309(4), R378
）检测为主，但是肌电信号主要是肌纤维膜内外离子紊乱和兴奋
——
收缩耦合作用波动引起，无法更好地体现肌肉当前的代谢活动状态，不能全面反映肌肉的疲劳状态，准确度较低
。
生物指标由于具有稳定且不受昼夜节律影响变化
、
与运动强度相关
、
并存在于生物液体中易被监测等优势，有望成为
MS
早期诊断依据
。
[0003]骨骼肌在持续的运动牵拉和应力作用下，会出现代偿性失调，引起肌组织出现不同程度的形态学改变，这也是目前界定运动损伤的一种方法
。
近年来，已有研究证实有许多
miRNAs
参与了骨骼肌各项生命生理活动的调节，其中
miRNA
‑
206
是骨骼肌特异性
miRNA
，在骨骼肌的发育和再生中起着重要的作用
。
在损伤的肌肉中，研究发现
miR
⁃
206
表达上调，并在肌肉再生中起重要作用
。
肌肉中
Wnt
信号通路的激活在细胞从增殖状态转到分化过程起着非常的重要作用，
miR
⁃
206
在肌肉再生过程中可通过靶向作用于高迁移率蛋白
b3
（
high mobility group box 3
，
Hmgb3
），抑制
Hmgb3
对
Wnt
信号通路激活的抑制作用，从而调节肌肉的再生（
J. Clin. Invest., 2012, 122(6): 2054
⁃
2065.
）
。
[0004]此外，
IL
‑6等促炎因子被认为是介导骨骼肌损伤早期炎症反应主要的炎性因子
。
在骨骼肌再生中，
M1
巨噬细胞通过分泌大量的细胞因子如
IL
‑6等参与肌卫星细胞的募集
、
增殖和分化过程
。
由巨噬细胞
、T
细胞等分泌
IL
‑6调节肌肉再生和维持肌肉稳态起着不可替代的作用
。
在肌卫星细胞中，肌管形成受损，而
IL
‑6的过表达促进了肌肉干细胞的分化，表明
IL
‑6在诱导肌肉干细胞增殖分化和肌管形成中发挥着重要作用（
Febs.J., 2013, 280(17): 4131
‑
4148
）
。
[0005]本申请基于前期流行病学调查和血清学样本分析，获得多个
MS
相关的血清标志物分子的基础上，建立严重跑步功能障碍小鼠模型进行验证和分析，进一步筛选出关键差异分子，如
miRNA
‑
206
和
IL
‑6作为研究的关键生物标志物，开发相应的快速检测试剂盒
。
目前
miRNA
和蛋白基因表达的检测试剂盒多为酶联免疫吸附剂测定（
ELISA
）和逆转录
‑
聚合酶链反应（
RT
‑
PCR
）（
Plos One, 2010, 5(3), e3694.
），但是这些检测方法样本处理复杂，受温
度和时间影响较大，需要高技能人员和合适的实验室环境
。
此外，试剂成本和所需时间等问题不容忽视
。
因此迫切需要开发新的
、
快速和准确的诊断工具来检测目标标志物
。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术公开了一种用于骨骼肌损伤标志物
miRNA
‑
206
及
IL
‑6双联检的荧光可视化方法及试剂盒
。
所述试剂盒可在
10
分钟左右对
miRNA
‑
206
及
IL
‑6进行特异性荧光检测
。
与传统的
PCR
检测技术相比较，本专利技术具有快速灵敏
、
简便价廉
、
荧光可视化等优势
。
可以实现对
miRNA
‑
206
及
IL
‑6的实时
、
快速
、
准确
、
双联检，为骨骼肌损伤的监控及防治创造条件，应用前景广阔
。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案
。
[0008]本专利技术提供了一种用于骨骼肌损伤标志物
miRNA
‑
206
及
IL
‑6双联检的荧光可视化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒主要由
PVC
底板
、
样品垫
、
结合垫
、
吸水垫
、
硝酸纤维素膜
、
检测线和质控线构成；所述结合垫包括
Materials
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于骨骼肌损伤标志物
miRNA
‑
206
及
IL
‑6双联检的荧光可视化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒主要由
PVC
底板
、
样品垫
、
结合垫
、
吸水垫
、
硝酸纤维素膜
、
检测线和质控线构成；所述结合垫包括
Materials
‑
DNA1
‑
DNA
‑
Dye
偶联物
、Materials
‑
DNA2
‑
Apt
‑
Dye
偶联物和
DNA6
‑
Dye
；所述
Materials
‑
DNA1
‑
DNA
‑
Dye
偶联物中
DNA1
和
DNA
‑
Dye
部分互补形成
DNA
‑
DNA
杂交双链体，
DNA
‑
Dye
能与
miRNA
‑
206
互补配对，
DNA1
的5´
端或3´
端有巯基修饰，
Materials
和
DNA
‑
DNA
杂交双链体通过共价键偶联；所述
Materials
‑
DNA2
‑
Apt
‑
Dye
偶联物中
DNA2
和
Apt
‑
Dye
部分互补形成
DNA
‑
Apt
杂交双链体，
Apt
‑
Dye
能与
IL
‑6特异结合，
DNA2
的5´
端或3´
端有巯基修饰，
Materials
和
DNA
‑
Apt
杂交双链体通过共价键偶联；所述的
Materials
包括表面含有
COOH、NH2、OH、SH、Biotin
等任一种官能团的氧化石墨烯（
GO
）
、
还原石墨烯（
RGO
）
、
二氧化锰（
MnO2）或金纳米粒子（
AuNPs
）；所述检测区包括
T1、T2
线和
C
线，其中
T1
线含
Materials
‑
DNA3
，
T2
线含
Materials
‑
DNA4
，
C
线含
Materials
‑
DNA5
；其中，
DNA3
与
DNA
‑
Dye
部分互补，
DNA4
与
Apt
‑
Dye
部分互补，
DNA5
与
DNA6
完全互补
。2.
根据权利要求1所述的骨骼肌损伤标志物
miRNA
‑
206
及
IL
‑6双联检的荧光可视化试剂盒，其特征在于，所述的
DNA1
包含5´
或3´
端带有
COOH、NH2、OH、SH、Biotin
等任一官能团修饰以及
5~15
个连续的
A
或
T
碱基，和
8~16
个碱基的单链
DNA
序列；所述
8~16
个碱基的单链
DNA
序列可随意更换碱基种类及顺序
。3.
根据权利要求1所述的骨骼肌损伤标志物
miRNA
‑
206
及
IL
‑6双联检的荧光可视化试剂盒，其特征在于，所述的
DNA2
包含5´
或3´
端带有
COOH、NH2、OH、SH、Biotin
等任一官能团修饰以及
5~15
个连续的
A
或
T
碱基，和
8~16
个碱基的单链
DNA
序列；所述
8~16
个碱基的单链
DNA
序列可随意更换碱基种类及顺...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩雅玲，宋海旭，闫承慧，刘丹，孙世国，刘国欣，
申请(专利权)人：中国人民解放军北部战区总医院，
类型：发明
国别省市：