一种生物传感结合制造技术

本发明专利技术提供了一种生物传感结合

【技术实现步骤摘要】
一种生物传感结合UPLC
‑
MS技术在中药性味关键质量属性辨识中的应用


[0001]本专利技术属于中药领域，具体涉及一种生物传感结合
UPLC
‑
MS
技术在中药性味关键质量属性辨识中的应用
。

技术介绍

[0002]《
人用药物注册技术要求国际协调委员会药物研发指导原则
》(ICH)Q8
中明确提出药品关键质量属性
(critical quality attributes
，
CQAs)
的定义，即：药品的关键质量属性是应该在适当的限度
、
范围或分布之内的物理
、
化学
、
生物或微生物性质或特征，用以确保所需的产品质量
。
因此，药品关键质量属性是目前国际药品质量评价中的关键要素
。
中药质量是保证其功效稳定及临床使用安全性
、
有效性的基础，其规范化
、
标准化
、
现代化是推动中药走向国际化的重要前提
。
关键质量属性辨识是中药制剂质量控制的重要内容
。
然而，目前在中药现代化研究进程中，依然存在着中药关键质量属性与临床安全性和有效性关联不清等问题，缺乏性味关键质量属性研究，质量控制研究较薄弱
。
[0003]中药药性理论不仅是中医药学理论的核心组成部分，更是指导中医临床配伍的重要依据
。
其中，五味药性理论是其核心组成部分之一，不仅反映中药自身的功效属性，更在临床配伍应用中发挥其药效作用
。
五味最初是指药物的真实滋味，后来逐渐将药物的滋味与作用相联系，并通过味来解释和归纳药物的作用，其中辛味的主要功效为能散
、
能行，甘味的主要功效为能补
、
能和
、
能缓，其中，“补”主要体现在补气
、
补血及补虚方面
。
味觉是一种感官模式，它引导生物体识别和消耗营养物质，同时可以避免毒素等物质
。
多数辛味中药可通过
TRPs
离子通道发挥作用，辛味受体
TRPV1
分布广泛
。
哺乳动物主要通过口腔中的舌味蕾组织感受味道，其中，与甘味有关的受体为
T1R2、T1R3
，在口腔
、
大脑
、
内脏
(
如心脏
、
肝脏
、
胰腺
、
肾脏
)
等系统组织中分布广泛
。
[0004]近年来，心血管疾病所致死亡在我国居民总死亡中占据首位，据统计，我国城乡居民心血管疾病发病率均居首位，高达
40
％以上，我国中老年群体中的心血管疾病患病率相对较高
。
冠心病作为最常见的心血管疾病之一，其患病率高
、
致死率高，不容忽视
。
黄芪生脉饮可用于治疗气阴两虚，心悸气短的冠心病患者，由黄芪
、
党参
、
麦冬
、
五味子及南五味子五味药配伍组合而成，药味以甘味为主
。
因此，以甘味味觉受体为视角，辨识黄芪生脉饮防治冠心病的关键质量属性具有重要的科学价值
。
[0005]据统计，根据罗马
III
标准，我国功能性消化不良的患病率处于
10.0
‑
14.9
％范围，患病率相对较高
。
健胃消食片由健脾丸加减演变而来，由陈皮
、
太子参
、
炒麦芽
、
山楂及山药配伍组成，所含药味以甘味为主，佐以陈皮行气，共同发挥健脾消食的功效
。
因此，以甘味
、
辛味味觉受体为视角，辨识健胃消食片治疗消化不良相关疾病的关键质量属性具有重要的科学价值
。
[0006]中药是具有多成分
、
多靶点的复杂体系，高效液相色谱法被广泛用于中药化学成分的检测，但存在检测限较高
、
分析时间长
、
无法将成分与功效指标相关联等缺点，难以实
现中药关键质量属性的辨识
。
生物传感器技术以其高灵敏度
、
高准确性等优势可用于中药关键质量属性的检测
。
本专利技术以甘味
、
辛味味觉受体为视角，拟将
T1R2/T1R3/TRPV1
‑
HEMT
生物传感器集成
UPLC
‑
MS
技术，建立一种中药复方关键质量属性辨识方法，克服现有技术的不足
。

技术实现思路

[0007]为克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种生物传感结合
UPLC
‑
MS
技术在在中药性味关键质量属性辨识中的应用
。
[0008]根据本专利技术的一些具体实施方案，一种生物传感结合
UPLC
‑
MS
技术在在中药性味关键质量属性辨识中的应用，具体步骤如下：
[0009]步骤1：采用三步法，以味觉受体蛋白为研究载体，构建分子感官人工智能生物传感器；
[0010]步骤2：基于此生物传感器，采用电化学工作站测定待测样品与味觉受体蛋白的相互作用强度；
[0011]步骤3：采用两步洗脱法，将结合于味觉受体上的关键质量属性进行洗脱；
[0012]步骤4：富集步骤3中的洗脱液，基于
UPLC
‑
MS
技术分析鉴定洗脱液中的化学成分，与待测样品的全成分进行对比，筛选其性味关键质量属性
。
[0013]根据本专利技术的一些具体实施方案，一种生物传感结合
UPLC
‑
MS
技术在在中药性味关键质量属性辨识中的应用涉及黄芪生脉饮和健胃消食片两种中药复方制剂，涉及到药味最多的甘味及相对较多的辛味，由于甘味
、
辛味物质与甘味辛味味觉受体结合是其发挥作用的前提，因此，本专利技术选择的关键蛋白为甘味味觉受体蛋白
T1R2
和
T1R3
及辛味受体蛋白
TRPV1
，提供了功能化修饰的生物传感器为
T1R2/T1R3/TRPV1
‑
HEMT
生物传感器，构建的具体步骤如下：
[0014](1)
将干净的石英玻璃管粘在
HEMT
生物传感芯片上，作为样品池，向其中加入
60
μ
L3
‑
巯基丙酸溶液，于室温下浸泡
17
‑
24h
，在
HEMT
生物传感芯片表面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种生物传感结合
UPLC
‑
MS
技术在中药性味关键质量属性辨识中的应用，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：采用三步法，以味觉受体蛋白为研究载体，构建分子感官人工智能生物传感器；步骤2：基于此生物传感器，采用电化学工作站测定待测样品与味觉受体蛋白的相互作用强度；步骤3：采用两步洗脱法，将结合于味觉受体上的关键质量属性进行洗脱；步骤4：富集步骤3中的洗脱液，基于
UPLC
‑
MS
技术分析鉴定洗脱液中的化学成分，与待测样品的全成分进行对比，筛选其性味关键质量属性
。2.
根据权利要求1所述的一种生物传感结合
UPLC
‑
MS
技术在中药性味关键质量属性辨识中的应用，其特征在于，步骤1中生物传感器的功能化修饰的蛋白为甘味
、
辛味味觉受体蛋白，生物传感器包括但不限于表面等离子体共振生物传感器
、
高电子迁移率场效应晶体管生物传感器
、
微流控芯片生物传感器
。3.
黄芪生脉饮与甘味蛋白
T1R2、T1R3
相结合的成分，包括但不限于蔗糖
、
奎宁酸
、
咖啡酸
、5
‑
羟甲基糠醛
、
苯丙氨酸
、
甜菜碱
、
毛蕊异黄酮
、
莽草酸
、
阿魏酸
、
毛蕊异黄酮
‑7‑
O
‑
β
‑
D
‑
葡萄糖苷
、
对羟基苯甲酸
、
大黄素
、
黄芩素
、
柚木苷
、(6
α
R
‑
11
α
R)
‑
10
‑
羟基
‑
3,9
‑
二甲氧基紫檀烷
、
芒柄花苷
、7,2
’‑
羟基
‑3’
,4
’‑
二甲氧基异黄烷
‑7‑
O
‑
β
‑
D
‑
葡萄糖苷
、
苍术内酯
I、
戈米辛
E、
五味子乙素
、
鲁斯可皂苷元
、
巴豆酰戈米辛
P、
五味子酯甲
、...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴志生，韩燕雨，赵小军，王晓萌，戚武振，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：