一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法技术

本发明专利技术公开了一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法，包括如下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法


[0001]本专利技术涉及生物细胞学
，具体涉及一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法
。

技术介绍

[0002]急性胰腺炎
(acute pancreatitis
，
AP)
是临床常见的以急性腹痛为主要表现的胰腺急性化学性炎症性疾病，发病急，疾病进展快，尤其是重症急性胰腺炎，病死率高
。
目前胆源性
、
酒精性及高甘油三酯性是
AP
发生发展的三大主要原因，这些因素均可不同程度地导致胰液分泌异常或胰腺结构破坏，进而使胰酶在胰腺腺泡细胞内过早激活，最终诱发并加重
AP。
由此可见，胰腺结构完整，胰液分泌及排出通畅，是预防
AP
发生的关键
。
[0003]正常生理状况下，胰液主要由外分泌部中的腺泡细胞分泌
。
腺泡细胞内存在许多酶原颗粒，当食物进入胃肠道后，腺泡细胞将胞内的大量酶原颗粒排出形成胰液，胰液通过延伸到腺泡腔内的扁平或立方形的泡心细胞之间的间隙汇合至细长的闰管中，再沿延闰管进入小叶内导管
、
小叶间导管流入主胰管，最后经十二指肠乳头分泌入肠道，发挥消化的作用
。
当机体受到外界刺激，出现腺泡细胞功能受损，胰液形成障碍，或胰管结构破坏，胰液排出不畅时，胰酶在胰腺腺泡细胞内的异常激活，导致
AP
的发生
。
目前研究已证实，胰腺腺泡细胞内钙超载
、
溶酶体与酶原颗粒过早融合，细胞器损伤等均可导致胰液分泌异常，此外，胰腺导管上皮细胞屏障功能的受损也是加重
AP
的重要因素之一
。
[0004]专利技术人前期的研究中，通过
HE
染色及透射电镜技术观察到大鼠胰腺泡心细胞位于腺泡腔内，为扁平或立方形单层细胞，与腺泡细胞密切相连，可见紧密连接；而在雨蛙肽
(Caerulelin
，
CAE)
诱导的大鼠
AP
动物模型中，
HE
染色显示
AP
时大鼠胰腺腺泡细胞排列紊乱，核浓染，胞浆减少，胞浆染色变浅；泡心细胞变形，核浓染
。
透射电镜观察则发现，
AP
时大鼠胰腺腺泡细胞内核皱缩，粗面内质网扩张，酶原颗粒增多增大，线粒体肿胀；泡心细胞变形，核皱缩，胞质淡染，线粒体肿胀，部分空泡化，甚至可见凋亡的泡心细胞；腺泡细胞与泡心细胞间紧密连接位点减少
。
可见
AP
时，腺泡细胞与泡心细胞的细胞形态都发生改变，且腺泡细胞与泡心细胞间紧密连接位点减少，腺泡细胞与泡心细胞可能会相互影响，或者存在某种相互关系！然而，目前对于延伸入胰腺腺泡腔内且与腺泡细胞紧密相连的闰管起始部的上皮细胞
——
泡心细胞的研究尚缺乏
。
现有技术仅有专利公布号为
CN 110656081 B
，专利技术名称为“一种模拟体内微环境的胰腺导管上皮细胞和胰腺腺泡细胞共培养体系的构建方法”公开把胰腺导管上皮细胞损伤与胰腺腺泡细胞结合起来，采用非接触式共培养方式搭建胰腺导管上皮细胞和胰腺腺泡细胞共培养体系
。
通过调整共培养所用的培养基，既适于胰腺腺泡细胞生长，又适于胰腺导管上皮细胞生长
。
共培养体系中上述两种细胞可以通过
Transwell
跨膜交换胞外分泌物质
。
其主要用于模拟胆汁淤积诱导的胰腺炎，提供了一种更真实反映胆汁淤积诱导胰腺炎的体外细胞模型
。
该体外细胞模型只研究胰管与腺泡细胞在同一个内环境下的变化，主要依赖两种细胞的胞外分泌物质的跨膜交换，两种细胞并非直
接接触共生长，不能研究说明泡心细胞与腺泡细胞相接处后的变化，不能对两种细胞的直接相互作用关系做更多的研究，因此，构建胰腺腺泡细胞与胰管上皮细胞直接共培养体系尤为必要
。

技术实现思路

[0005]本专利技术克服了现有技术中，胰腺腺泡细胞与胰管上皮细胞培养条件差异大，难以实现共培养的技术问题，提供一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法
。
[0006]一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法，所述体外共培养体系采用人胰腺导管上皮细胞株
HPDE6
‑
C7
和大鼠胰腺腺泡细胞株
AR42J
构建
。
[0007]其中，所述大鼠胰腺腺泡细胞株
AR42J
为永生系细胞株
。
[0008]进一步的，所述构建方法包括如下步骤：
[0009]S1
：向
Ham
’
s F
‑
12K
培养基中加入
20wt
％胎牛血清
、1wt
％青链霉素和
0.2wt
％柠檬酸铁后，接种大鼠胰腺腺泡细胞株
AR42J
培养；每两天换液一次，每次细胞换液或细胞传代时将当前胎牛血清浓度降低2％，如此逐次递减胎牛血清浓度，直至细胞培养基中胎牛血清浓度为
10wt
％；
[0010]S2
：采用
S1
得到的培养基和细胞继续培养，继续每两天换液一次，每次换液时，将
Ham
’
sF
‑
12K
培养基与
DMEM
培养基依次按
9:1
，
8:2
，
7:3
，
6:4
，
5:5
，
4:6
，
3:7
，
2:8
，
1:9
的比例逐级过渡培养，当过渡至
Ham
’
s F
‑
12K
培养基与
DMEM
培养基的比例低于
4:6
时，每次换液均向培养基中添加
0.5wt
％血清白蛋白，观察细胞生长状态良好后，将
Ham
’
s F
‑
12K
培养基完全过渡至
DMEM
培养基；
[0011]S3
：将人胰腺导管上皮细胞株
HPDE6
‑
C7
和大鼠胰腺腺泡细胞株
AR42J
按比例共培养于
S2
的培养中即得泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系
。
[0012]进一步的，所述
S1、
所述
S2
和所述
S3
中，细胞培养的条件为于
37℃、5
％ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法，其特征在于，所述体外共培养体系采用人胰腺导管上皮细胞株
HPDE6
‑
C7
和大鼠胰腺腺泡细胞株
AR42J
构建
。2.
根据权利要求1所述的一种模拟体内泡心细胞和腺泡细胞共生长的体外共培养体系构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
S1
：向
Ham
’
s F
‑
12K
培养基中加入
20wt
％胎牛血清
、1wt
％青链霉素和
0.2wt
％柠檬酸铁后，接种大鼠胰腺腺泡细胞株
AR42J
培养；每两天换液一次，每次细胞换液或细胞传代时将当前胎牛血清浓度降低2％，如此逐次递减胎牛血清浓度，直至细胞培养基中胎牛血清浓度为
10wt
％；
S2
：采用
S1
得到的培养基和细胞继续培养，继续每两天换液一次，每次换液时，将
Ham
’
sF
‑
12K
培养基与
DMEM
培养基依次按
9:1
，
8:2
，
7:3
，
6:4
，
5:5
，
4:6
，
3:7
，
2:8
，
1:9
的比例逐级过渡培养，当过...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨慧莹，唐国都，梁志海，雷宇，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：