一种盔甲化益生菌的单细胞封装方法及其应用技术

本发明专利技术涉及益生菌技术领域，具体涉及一种盔甲化益生菌的单细胞封装方法及其应用，包括：将益生菌悬浮于

【技术实现步骤摘要】
一种盔甲化益生菌的单细胞封装方法及其应用


[0001]本专利技术涉及益生菌
，具体涉及一种盔甲化益生菌的单细胞封装方法及其应用
。

技术介绍

[0002]人体的健康与肠道内菌群结构息息相关，当肠道菌群处于平衡状态时，可为人体提供稳定的免疫屏障，但当菌群失调时会诱发一系列疾病
。
益生菌可以调节肠道菌群，抑制有害菌的生长，促进有益菌在肠道定植
。
然而，益生菌不能抵抗极酸的胃部环境，致使肠道定植的益生菌活菌数不足影响其健康功效的发挥
。
[0003]CN115350161A
提出了基于工程化益生菌外膜囊泡包被纳米酶递送系统及其制备方法和应用
。
该专利利用益生菌外膜囊泡包裹二氧化锰用于
IBD
肠炎治疗
。
该专利技术不能保护益生菌抵抗胃酸的损伤，也未进行外界环境的益生菌活性测评，不能满足活菌递送的需求
。
因此，如何积极开发生物友好型活菌递送技术，是肠炎有效治疗领域的重点与难点
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于，提供一种益生菌封装策略，通过在副干酪乳杆菌表面包覆一层二氧化锰纳米酶来抵抗外界过氧化氢
、
紫外等环境，进一步包覆一层粘附层来抵抗抗生素和极酸环境带来的伤害，实现益生菌在肠道中缓释
。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种盔甲化益生菌的单细胞封装方法，包括：将益生菌悬浮于
MnCl2·
4H2O
溶液中，孵育后滴加
NaOH
溶液，混合均匀并反应后，获得盔甲化益生菌
。
[0007]本专利技术涉及一种高活性和酶催化单细胞纳米盔甲化益生菌，制备的盔甲化益生菌形成的纳米涂层，不仅能够保持细胞的生存能力，还能保护益生菌免受外界伤害，提高了益生菌对胃肠道内环境的耐受性，使其可以在肠道中持续释放
。
[0008]优选的，所述益生菌处于对数生长期
。
[0009]优选的，所述益生菌包括副干酪乳杆菌
、
双歧杆菌
、
大肠杆菌及其他益生菌的一种或多种，如副干酪乳杆菌
Lactobacillus Paracasei(L.paracasei)、
双歧杆菌
Bifidobacterium bifidum CGMCC 1.5091(B.bifidum)
和大肠杆菌
Escherichia coli Nissle 1917GDMCC 1.3181(EcN)
等
。
[0010]优选的，所述碱溶液包括
NaOH
溶液
、KOH
溶液中的一种或多种
。
[0011]优选的，所述
MnCl2·
4H2O
溶液的浓度为2～
10mg/mL
；所述
NaOH
等碱溶液的浓度为
10mM。
[0012]优选的，所述
MnCl2·
4H2O
溶液与所述
NaOH
溶液总用量的体积比为：
10mL
：
250
μ
L。
[0013]优选的，所述孵育的时间为
30min
；所述混合均匀包括摇床摇混，时间为1～
3h。
[0014]优选的，还包括所述益生菌的前处理：将冷冻储藏的所述益生菌接种于益生菌培养基中进行复苏，静态培养，之后传代孵育，获得处于对数生长期的所述益生菌
。
[0015]优选的，所述冷冻储藏的温度为
‑
80℃
；所述益生菌培养基包括
MRS
培养基或其他细菌培养基；所述静态培养的条件包括
37℃
有氧条件下静置培养
18
～
24h。
[0016]一种上述盔甲化益生菌的单细胞封装方法获得的盔甲化益生菌
。
[0017]与现有技术相比较，实施本专利技术，具有如下有益效果：
[0018]本专利技术方法可以快速实现益生菌的单细胞封装，该封装盔甲外壳可保护益生菌免受氧化应激损伤
、
顽强抵抗胃肠道消化环境
。
此外，该盔甲外壳可以在2～
4h
自行解开，解壳后益生菌能立即恢复生长，并保持益生菌原有的生物功能
。
附图说明
[0019]图1左边白色为未包埋的益生菌，右边黑色为已成功包埋后的益生菌
。
[0020]图2为纳米涂层前后
L.paracasei
的生长曲线图
。
[0021]图3为
L.paracasei
的
CCK
‑8法测细胞活力图
。
[0022]图4为包埋前后的
L.paracasei
的
TEM
图，其中，
A
：未包埋
L.paracasei
细胞；
B
：被二氧化锰纳米颗粒包埋后的
L.paracasei
细胞
。
[0023]图5为包埋前后的
L.paracasei
的
SEM
图，其中，
A
：未包埋
L.paracasei
细胞；
B
：被二氧化锰纳米颗粒包埋后的
L.paracasei
细胞
。
[0024]图6为包埋前后的
L.paracasei
的
CLSM
图，其中，
A
：红色表示
BSA
‑
cy5.5
染色的
L.paracasei
细胞外壳；
B
：绿色表示
CFDA
染色的
L.paracasei
细胞；
C
：黄色表示
AB
图合并后的图
。
[0025]图7为包埋前后的
L.paracasei
的
Zeta
电位变化图
。
[0026]图8为
EcN(A)
和双歧杆菌
(B)
的生长曲线
。
[0027]图9为
EcN(A)
和双歧杆菌
(B)
的电位变化图
。
[0028]图
10
为包埋前后的益生菌
SEM
图像
。A
：未包埋
EcN
细胞；
B
：被二氧化锰纳米颗粒包埋后的
EcN
细胞；
C
：未包埋双歧杆菌细胞；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种盔甲化益生菌的单细胞封装方法，其特征在于，包括：将益生菌悬浮于
MnCl2·
4H2O
溶液中，孵育后滴加碱溶液，混合均匀并反应后，获得盔甲化益生菌
。2.
如权利要求1所述盔甲化益生菌的单细胞封装方法，其特征在于，所述益生菌处于对数生长期
。3.
如权利要求1所述盔甲化益生菌的单细胞封装方法，其特征在于，所述益生菌包括副干酪乳杆菌
、
双歧杆菌
、
大肠杆菌中的一种或多种
。4.
如权利要求1所述盔甲化益生菌的单细胞封装方法，其特征在于，所述碱溶液包括
NaOH
溶液
、KOH
溶液中的一种或多种
。5.
如权利要求1所述盔甲化益生菌的单细胞封装方法，其特征在于，所述
MnCl2·
4H2O
溶液的浓度为2～
10mg/mL
；所述碱溶液包括
NaOH
溶液，浓度为
10mM。6.
如权利要求1所述盔甲化益生菌的单细胞封装方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨琼琼，施结燕，黄梓杰，张薄博，陈文婷，刘宣伶，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：