一种抗制造技术

本发明专利技术公开了一种抗

【技术实现步骤摘要】
一种抗Xa活性测定试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体地说它是一种抗
Xa
活性测定试剂盒及应用
。
更具体地说它是一种肝素
(
盐
)
或者低分子量肝素
(
盐
)
效价的抗
Xa
活性测定试剂盒及制备方法
。

技术介绍

[0002]普通肝素
(UFH)、
低分子肝素
(LMWH)、
肝素衍生物及其他
Xa
抑制剂药物，主要用于血栓栓塞性疾病的防治
。
这些药物的共同点是抑制
Xa
活性的抗凝作用
,
不同的是不同抗凝药物所含抗
Xa
活性含量或浓度不同
,
其中
,
普通肝素和低分子肝素
,
是目前应用最为广泛的抗凝药物
。
[0003]因子
Xa
是一种丝氨酸蛋白酶
,
其位于血液凝集的级联反应上游
。
因子
Xa
恰好处在内源性凝血途径和外源性凝血途径的中心位置
。
因此
,Xa
因子抑制剂既能阻断内源性凝血
,
也能抑制外源性凝血
。
[0004]由于肝素具有复杂的药代动力学和药效学特性
,
导致治疗浓度范围窄和个体差异极大
,
>需要频繁的实验室监测和剂量调整
。
活化部分凝血活酶时间
(APTT)
测定是传统监测
UFH
的方法，该方法虽然操作简单
、
快速
、
便宜，但准确性差，难以标准化，不同实验室之间的差异会较大
,
并且其相关临床治疗范围尚未达成统一共识
。
目前
,
测量结果稳定
、
结果可标准化
,
治疗范围达成共识的抗
Xa(
凝血因子
)
活性测定试剂盒成为
UFH
监测的更优选择，但抗
Xa
活性测定试剂盒成本高
、
且操作复杂
。
[0005]由于现有技术的缺点
/
不足：
(1)APTT
这种检测方法无法确保检测结果的精准程度，误差大，没有统一的判断标准，根据测定结果判断主观性大
、
准确性差；
(2)
现有进口抗
Xa
活性测定试剂盒
(
发色底物法
)
抗干扰性及稳定性差
、
成本高
。
[0006]因此，开发一种准确度高
、
制备成本低的肝素
(
盐
)
或者低分子量肝素
(
盐
)
效价的抗
Xa
活性测定试剂盒及制备方法很有必要
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的第一目的是为了克服
技术介绍
的不足之处，而提供一种抗
Xa
活性测定试剂盒
(
发色底物法
)
，为一种肝素
(
盐
)
或者低分子量肝素
(
盐
)
效价的抗
Xa
活性测定试剂盒，准确度高
、
线性范围宽
、
重复性和稳定性好，制备成本低，相对于现有的进口抗
Xa
活性测定试剂盒
(
发色底物法
)
的价格，本专利技术能节省
60
％～
70
％的成本
(
即，本专利技术制备的试剂盒的价格仅为现有的进口试剂盒价格的
30
％～
40
％
)。
本专利技术通过血浆中的肝素
(
或其他类似物质
)
与抗凝血酶
(AT)
形成复合物，抑制过量添加的因子
Xa
，剩余的因子
Xa
与其特异的底物作用，在
405nm
波长处测量对硝基苯胺
(pNA)
吸收度，
pNA
生成的量与待测血浆中肝素
(
或其他类似物质
)
的浓度成反比
,
确保检测结果的精准程度及稳定性；以解决目前市面上所使用
APTT
检测准确性差，以及抗
Xa
活性测定试剂盒
(
发色底物法
)
抗干扰性及稳定性差
、
成本高的问题
。
Hepes
试剂加入
900ml
纯化水匀速搅拌充分溶解后，用
5mol/L NaOH
；
[0032]调节
pH
至
7.4
±
0.2
；
[0033](2)
称量吐温
‑
20
：
2.0ml
及亚硝酸盐：
3.0g
，匀速搅拌至充分溶解；
[0034](3)
称取
S
‑
2765
：
1.5mg(
规格：
11.0mg≈15nM)
，由于加入量比较少，可以使用高浓度储存液
(
比如
150mg
溶解
10ml
纯化水中，取
0.1ml
加入
1L
中，即为浓度：
1.5mg/L)
；
[0035](4)
加入
0.2ml Proclin300
防腐剂，充分搅拌；
[0036](5)
用纯化水定容到
1L
，即为
R1
试剂；
[0037]R2
试剂的制备方法如下：
[0038]R2
试剂包括
50mmol/L Hepes
缓冲液
、1g/L
明胶
、8ml/L
甘油
、20ml/L
聚乙二醇
600、5g/L
氯化钠
、330IU Xa
因子
、0.2ml/L Proclin300
；
[0039](1)
配置缓冲液：配制
50mmol/L
缓冲体系
(
按配制
1L R1
试剂进行说明
)
，称取
11.9g Hepes
试剂加入
900ml本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：包括
R1
试剂和
R2
试剂；所述
R1
试剂，包括：发色底物
、
缓冲体系
、
抗干扰成分和防腐剂；所述
R2
试剂，包括：兔
Xa
因子
、
缓冲体系
、
蛋白保护剂和防腐剂
。2.
根据权利要求1所述的抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：
R1
试剂和
R2
试剂中缓冲体系选自
HEPES、Tris
或磷酸缓冲盐溶液中的至少一种；
R1
试剂和
R2
试剂中缓冲体系的浓度为
10mM
‑
100mM
，
pH
为
7.2
‑
7.6
；
R1
试剂和
R2
试剂中防腐剂选自叠氮化钠
、Proclin300、Prionex
中的至少一种
。3.
根据权利要求2所述的抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：
R1
试剂和
R2
试剂中防腐剂选用浓度为
0.1
～
0.5g/L
的
ProClin300。4.
根据权利要求3所述的抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：
R1
试剂和
R2
试剂中缓冲体系的浓度为
50nM
；
R1
试剂和
R2
试剂中防腐剂
ProClin300
的浓度为
0.2ml/L。5.
根据权利要求4所述的抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：
R1
试剂抗干扰成分包括亚硝酸盐
、
非离子型表面活性剂吐温
‑
20
，其中亚硝酸盐浓度为：
1.0
‑
5.0g/L,
吐温
‑
20
浓度为：
1.0
‑
4.0ml/L
；
R1
试剂中的发色底物为
S
‑
2765
，浓度为：1‑
3nM。6.
根据权利要求5所述的抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：亚硝酸盐的浓度为：
3.0g/L
；吐温
‑
20
的浓度为：
2.0ml/L
；
R1
试剂中的发色底物
S
‑
2765
的浓度为：
2nM。7.
根据权利要求6所述的抗
Xa
活性测定试剂盒，其特征在于：
R2
试剂蛋白保护剂包括明胶
、
甘油
、
聚乙二醇
600、
氯化钠，其中明胶浓度为：
0.5
‑
1.5g/L
，甘油浓度为：
4.0
‑
12.0ml/L、
聚乙二醇
600
浓度为：
10.0
...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁翌，刘介，
申请(专利权)人：武汉塞力斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：