一种抗凝药物活性检测系统及其检测方法技术方案

本发明专利技术涉及分子快速检测技术领域，具体涉及一种抗凝药物活性检测系统及其检测方法。抗凝药物活性检测系统，其包括VPACT活化剂和VPACT启动剂；VPACT活化剂中含有磷脂、V因子活化剂、活化因子X、HEPES和甘露醇，VPACT启动剂中含有钙离子。本方案解决了抗凝药物活性检测系统受到凝血级联反应的初始步骤影响的技术问题，可以稳定而可靠地进行直接或间接靶向FXa和/或FIIa的抗凝血药的疗效监测，显示出广泛的适用范围。泛的适用范围。泛的适用范围。

【技术实现步骤摘要】
一种抗凝药物活性检测系统及其检测方法


[0001]本专利技术涉及药物活性检测
，具体涉及一种抗凝药物活性检测系统及其检测方法。

技术介绍

[0002]抗凝药物被用于治疗特定血栓栓塞，普通肝素(又称肝素，UFH)是使用得较为广泛的抗凝药物之一。普通肝素作用机制为：其与抗凝血酶III结合后，更容易与活化的凝血因子IIa、IXa、Xa、XIa、XIIa、Ka等同时结合并抑制这些活化的凝血因子的活性，从而发挥抗凝作用。另外，低分子量肝素(LMWH)由于其安全、方便、有效和副作用小等特点正逐渐取代普通肝素。肝素等抗凝药物同时作用于众多凝血因子，而不同个体间的这些凝血因子存在高可变性，维持适当的抗凝药物水平具有一定难度。因此，在利用肝素等抗凝药物进行治疗和预防时，药物的抗凝活性监测是非常重要的。
[0003]活化部分凝血活酶时间(APTT)是临床上最常用的反映内源性凝血系统凝血活性的敏感筛选试验，也是检测肝素等抗凝药物的抗凝活性的最常用的检测方法。但是，传统的凝血级联反应的初始步骤较长，对活化部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶原时间(PT)的检测产生了较大干扰，影响了APTT的检测准确程度和应用范围。亟需开发出一种能够绕开凝血级联反应的初始步骤的药物抗凝活性的检测方法，以及一种针对于抗凝血药疗效的稳定而可靠的检测系统。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供一种抗凝药物活性检测系统，以解决抗凝药物活性检测系统受到凝血级联反应的初始步骤影响的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种抗凝药物活性检测系统，其包括VPACT活化剂和VPACT启动剂；VPACT活化剂中含有磷脂、V因子活化剂、活化因子X、HEPES和甘露醇，VPACT启动剂中含有钙离子。
[0007]本方案的原理及优点是：在本方案中，使用VPACT试剂(包括VPACT活化剂和VPACT启动剂两个部分)针对于肝素等抗凝药物在血浆中的抗凝活性进行检测。VPACT试剂中的V因子活化剂(RVV
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V，来源于鲁氏蝰蛇毒素)可激活血浆中的凝血因子V(FV)，随后活化的凝血因子V(FVa)与磷脂(PL)、活化因子X(FXa)和钙离子一起形成凝血酶原酶复合物。由于RVV
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V对FV进行预激活，故凝血酶和纤维蛋白的形成仅取决于FXa和凝血酶(FIIa)的活性，绕过了传统的凝血级联反应的初始步骤，从而消除了无论内源性还是外源性凝血因子活化过程的众多因素干扰，可实现对肝素等直接或间接靶向FXa和/或FIIa抗凝血药物的抗凝活性监测。
[0008]本方案的抗凝药物活性检测系统(VPACT)对活化因子X(FXa)或凝血酶抑制药物的抗凝作用非常敏感。通过本系统可以获得V因子活化凝血时间(VPACT)指标，通过该指标反应抗凝药物的凝血活性。据研究数据表明，在各种肝素疗效监测中，本方案的抗凝药物活性
检测系统可以稳定而可靠地进行抗凝血药疗效监测，显示出广泛的适用范围。
[0009]进一步，磷脂、HEPES和甘露醇在VPACT活化剂中的质量百分数分别为0.001～0.2％、0.1～3％、0.5～6％；V因子活化剂和活化因子X在VPACT活化剂中的含量分别为1～10U/mL、0.01～0.3U/mL。采用上述组成以及比例的VPACT活化剂可有效对样品进行活化，为后续的凝血过程做好准备。
[0010]进一步，所述钙离子由氯化钙提供，氯化钙在VPACT启动剂中的质量百分数为0.05～0.6％。采用上述组成的VPACT启动剂可以有效启动凝血过程。
[0011]进一步，磷脂、HEPES和甘露醇在VPACT活化剂中的质量百分数分别为0.005％、0.6％、2％；V因子活化剂和活化因子X在VPACT活化剂中的含量分别为4U/mL、0.024U/mL；氯化钙在VPACT启动剂中的质量百分数为0.278％。上述组成以及用量是实现检测目的的最优化情形，可以获得较高的检测准确率。
[0012]进一步，VPACT活化剂和VPACT启动剂的体积比为1:1。上述用量比可有效促进凝血过程，绕开了凝血级联反应的初始步骤，减少了内源性和外源性凝血因子活化过程的干扰。
[0013]进一步，其还包括校准品和质控品；校准品包括无UFH的血浆和含1.72U/mL UFH的血浆；质控品包括含0.35U/mL UFH的血浆和含1.1U/mL UFH的血浆。
[0014]进一步，其还包括全自动凝血分析仪；所述全自动凝血分析仪为DRC3200全自动凝血分析仪或者DRC3600全自动凝血分析仪。
[0015]现有的凝血仪对凝血功能的检测，大多局限于常规术前检测(如凝血四项)。本方案将常规的凝血仪和VPACT试剂结合使用，可扩展常规凝血仪的功能到评估多种抗凝血药疗效监测、术后凝血状态、常见病、多发病、中老年病检测项目，实现一台检测设备与多项检测指标的整合，为快速、精准的临床需要提供便利。
[0016]DRC3200全自动凝血分析仪或者DRC3600全自动凝血分析仪(即重庆鼎润医疗器械有限责任公司的全自动凝血分析仪：DRC3200、DRC3600)，不但能够检测常规凝血四项，还可以对抗凝药物的凝血活性进行检测。抗凝药物包括凝血因子直接抑制剂(凝血酶直接抑制剂和Xa因子直接抑制剂等)、凝血因子间接抑制剂(抗凝血酶介导的各种肝素和Xa因子选择性抑制剂等)。DRC3200和DRC3600等凝血仪操作简单，普通医护人员均可熟练掌握；且为各大医院必备的常规凝血四项检测仪器，不必购置专门针对于抗凝活性的设备，节约成本。
[0017]进一步，其用于监测凝血因子直接和/或间接抑制剂的活性。
[0018]抗凝药物在常规药物监测中并不需要对FXa抑制活性等进行检测，而在出血和紧急手术前快速获得检测结果又十分必要，遗憾的是对上述效果的监测，目前全球尚无统一的测定方法。将V因子活化凝血时间(VPACT)指标应用于抗凝药物活性检测中，则更加有利于了解直接或者间接作用于FXa和FIIa的抗凝药物的活性情况，以及有利于对肝素及类似物的疗效进行监测，为快速、精准的凝血功能状态床旁检测提供便利。
[0019]进一步，所述抗凝药物为肝素、低分子量肝素、磺达肝葵钠、阿加曲班或阿哌沙班。普上述药物为较为常用的抗凝药物，本方案的活性检测系统可对这些药物的抗凝活性进行有效检测。
[0020]进一步，一种抗凝药物活性检测系统的抗凝药物活性的检测方法，包括如下依次进行的步骤：
[0021]S1：使用校准品混合物绘制标准曲线；
[0022]S2：使用质控品混合物对全自动凝血分析仪进行定标；
[0023]S3：检测样品混合物的凝血时间，并根据S1获得的标准曲线计算样品中的抗凝药物的浓度；
[0024]其中，校准品混合物的配制方法为：将校准品和VPACT活化剂混合，经孵育后，再加入VPACT启动剂，获得校准品混合物；质控品混合物的配制方法为：将质控品和VPACT活化剂混合，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗凝药物活性检测系统，其特征在于，其包括VPACT活化剂和VPACT启动剂；VPACT活化剂中含有磷脂、V因子活化剂、活化因子X、HEPES和甘露醇，VPACT启动剂中含有钙离子。2.根据权利要求1所述的一种抗凝药物活性检测系统，其特征在于，磷脂、HEPES和甘露醇在VPACT活化剂中的质量百分数分别为0.001～0.2％、0.1～3％、0.5～6％；V因子活化剂和活化因子X在VPACT活化剂中的含量分别为1～10U/mL、0.01～0.3U/mL。3.根据权利要求2所述的一种抗凝药物活性检测系统，其特征在于，所述钙离子由氯化钙提供，氯化钙在VPACT启动剂中的质量百分数为0.05～0.6％。4.根据权利要求3所述的一种抗凝药物活性检测系统，其特征在于，磷脂、HEPES和甘露醇在VPACT活化剂中的质量百分数分别为0.005％、0.6％、2％；V因子活化剂和活化因子X在VPACT活化剂中的含量分别为4U/mL、0.024U/mL；氯化钙在VPACT启动剂中的质量百分数为0.278％。5.根据权利要求4所述的一种抗凝药物活性检测系统，其特征在于，VPACT活化剂和VPACT启动剂的体积比为1:1。6.根据权利要求5所述的一种抗凝药物活性检测系统，其特征在于，其还包括校准品和质控品；校准品包括无UFH的血浆和含1.72...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨蕙铭，邹忠良，贾力扬，宋阳阳，冉杨，
申请(专利权)人：重庆鼎润医疗器械有限责任公司，
类型：发明
国别省市：