多水平质控品及其制备方法和在血栓弹力图检测上的应用技术

本发明专利技术涉及凝血检验项目质量控制技术领域，具体涉及多水平质控品及其制备方法和在血栓弹力图检测上的应用。本发明专利技术提供的血栓弹力图质控品水平1(正常值)、水平2(高凝)、水平3(低凝)，涵盖临床正常凝血、高凝、低凝、小Angle等多种状态，模拟临床实际检测环境，与血栓弹力图仪、配套试剂和氯化钙溶液联合使用，能对血栓弹力图检测系统进行质量控制或检测系统评估。本方案的血栓弹力图质控品可以应用于设备和配套试剂组成的血栓弹力图检测系统的质控实践操作中，保证临床样本检测结果的可靠性。

【技术实现步骤摘要】
多水平质控品及其制备方法和在血栓弹力图检测上的应用
本专利技术涉及凝血检验项目质量控制
，具体涉及多水平质控品及其制备方法和在血栓弹力图检测上的应用。
技术介绍
血栓弹力图是由血栓弹性描记仪描记的凝血动态过程曲线，是一种能动态分析凝血形成和纤维蛋白溶解全过程的曲线图。血栓弹力图于1948年由Hartert专利技术，20世纪80年代中后期开始应用于临床，现已成为围手术期监测凝血功能的重要指标，并已广泛应用于肝移植、心脏外科、肾移植、创伤外科等诸多领域，指导围手术期的血液输注、溶栓及抗凝治疗等。血栓弹力图能提供16项以上定量参数。其中R值为检测开始到振幅达2mm所用的时间，提示凝血因子活性，R值延长表示低凝，R值缩短表示高凝；K值为振幅2mm至20mm所用的时间；Angle(α)值为图像开口处至最大曲线弧度作切线与水平线的夹角；MA值为最大振幅，对应血块最大强度。K值与Angle值密切相关，都是反映血凝块聚合的速率，当凝血处于重度低凝状态时，血块幅度达不到20mm，此时K值无法确定，因此，Angle值比K值更有价值。血栓弹力图仪及配套试剂的检测结果会直接影响临床诊疗的判断。质控品在相关检测中发挥了重要作用，是临床样本检测结果的质量保证。目前，国内外用于血栓弹力图检测系统的质控品包括美国Haemonetics公司TEG5000双水平质控品，能与血栓弹力图仪、氯化钙溶液联合使用。但该检测系统为仅仅为“仪器+质控品”的模式，因未考虑配套试剂因素，仅用于血栓弹力图仪的质量控制。在临床实际检测环境中，通常要使用到检测试剂(例如，血栓弹力图试验(活化凝血)试剂(凝固法))，检测试剂(即血栓弹力图仪的配套试剂)的加入，使得影响检测准确程度的因素变得复杂，仅仅使用现有的质控品对血栓弹力图仪进行质量控制，是远远不够的。但是，现有技术中，尚无稳定的可适应于临床实际检测环境(包括血栓弹力图仪、配套试剂和氯化钙溶液形成的血栓弹力图检测系统)的质控品可使用，这就极大地影响到了血栓弹力图仪检测的准确程度。
技术实现思路
本专利技术意在提供多水平质控品，以解决现有技术中尚无能够适应临床实际检测环境的血栓弹力图仪质控品的技术问题。为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：多水平质控品，包括血栓弹力图质控品水平1；所述血栓弹力图质控品水平1由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液和血浆基质液配制MA值在60.0～80.0mm范围内的溶液A；然后加入冻干保护剂、终浓度为1.0～2.0ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B1。本方案的原理及优点是：本方案的质控品可以实现对包括血栓弹力图仪、配套试剂和氯化钙溶液形成的血栓弹力图检测系统的质量控制。现有技术中的质控品，只能针对于包括血栓弹力图仪和氯化钙溶液形成的血栓弹力图检测系统进行质量控制。质控品通常是使用在实际样品检测之前，以确定检测系统的稳定性，从而保证实际样品检测结果的准确性。现有技术的质控品只能对血栓弹力图仪本身进行质控。但是，现有的质控品没有考虑配套试剂因素，不能对含有血栓弹力图仪和配套试剂的血栓弹力图检测系统(临床实际检测环境)进行质量控制，所以，现有的质控品并不能有效地进行相关检测的质量控制。专利技术人尝试使用现有的质控品对包括血栓弹力图仪、配套试剂和氯化钙溶液形成的血栓弹力图检测系统进行质量控制，但是获得的检测结果的R值过小，过小的R值无法反应临床可能出现的低凝状态或正常状态。专利技术人经多方尝试，发现额外加入抗凝剂可以有效地克服R值过小的问题，且样品稳定。在本方案中，MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B1可作为血栓弹力图质控品水平1使用，血栓弹力图质控品水平1可模拟正常凝血状态，并对含有血栓弹力图仪和配套试剂的血栓弹力图检测系统进行质控。进一步，多水平质控品，还包括血栓弹力图质控品水平2；所述血栓弹力图质控品水平2由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液和血浆基质液配制MA值在60.0～80.0mm范围内的溶液A；然后加入冻干保护剂、终浓度为0.1～0.8ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B2。在本方案中，MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B2可作为血栓弹力图质控品水平2使用，血栓弹力图质控品水平2可模拟高凝状态，并对含有血栓弹力图仪和配套试剂的血栓弹力图检测系统进行质控。进一步，多水平质控品，还包括血栓弹力图质控品水平3；所述血栓弹力图质控品水平3由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液、血浆基质液和羟乙基淀粉生理盐水溶液配制MA值在30.0～65.0mm范围内的溶液A’；然后加入冻干保护剂、终浓度为0.1～0.8ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B’。采用上述技术方案，制备获得的血栓弹力图质控品水平3可以模拟低凝和小angle值(血凝块聚合速率较小)的样品情况，可实现血栓弹力图检测系统针对于低凝样品的检测效力的质控。现有技术的质控品只有两种水平，只能模拟高凝和正常凝血水平的样品，而尚未出现模拟低凝状态的样品的质控品。这是因为，制备小Angle值的质控品难度较大，Angle值的大小受质控品基质、抗凝剂比例等多种因素影响，单纯调整纤维蛋白原基质液、血浆基质液、保护剂、抗凝剂等的比例，无法调至需要的小Angle值。专利技术人通过大量尝试，意外发现使用了羟乙基淀粉130/0.4溶液代替部分血浆基质液，克服了现有技术的质控品angle值较大且难以调小的技术问题，成功制备反应实际样品的低凝、小Angle(血凝块聚合速率较小)的状态的质控品(详见对比例1和实施例3中的实验数据)。进一步，所述抗凝剂为依诺肝素钠。采用上述技术方案，经过专利技术人的大量实验筛选，发现依诺肝素钠相对其他类型的抗凝剂具有更好的提升质控品质量的作用。抗凝剂的加入虽然能够克服R值过短的问题，但是，不同抗凝剂的使用给整个检测系统带来的随机误差是不一样，通常来说质控品追求的是更小的系统误差，以保证其质控效力。实验证明，使用依诺肝素钠，相对于使用肝素钠、肝素锂和柠檬酸钠等抗凝剂，可以有效降低检测结果的CV值(不精密度)，提升质控品的质量(详见对比例2中的实验数据)。进一步，所述冻干保护剂包括蛋白质保护剂、pH缓冲剂和防腐剂。采用上述技术方案，蛋白质保护剂起到保护质控品中的蛋白质物质的作用；pH缓冲剂可为质控品中的各种生物分子提供稳定的pH环境以及维持一定的盐离子浓度，维持质控品中的生物分子活性状态；防腐剂的使用可以防止质控品腐败，延长质控品的保质期。进一步，所述蛋白质保护剂包括牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖、甘氨酸、甘露醇和乳糖中的至少一种；所述pH缓冲剂为Hepes缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂和磷酸盐缓冲剂中的一种；所述防腐剂为Proclin300、叠氮化钠和苯甲酸钠中的一种。上述蛋白质保护剂、pH缓冲剂和防腐剂为现有技术中常规的试剂，性质稳定且成本适中。进一步，所述纤维蛋白原基质液和所述血浆基质液由如下方法制备：在新鲜猪血中加入柠檬酸钠，获得抗凝猪血；待抗凝猪血静置分层，取分层的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多水平质控品，其特征在于：包括血栓弹力图质控品水平1；所述血栓弹力图质控品水平1由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液和血浆基质液配制MA值在60.0～80.0mm范围内的溶液A；然后加入冻干保护剂、终浓度为1.0～2.0ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B1。/n

【技术特征摘要】
1.多水平质控品，其特征在于：包括血栓弹力图质控品水平1；所述血栓弹力图质控品水平1由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液和血浆基质液配制MA值在60.0～80.0mm范围内的溶液A；然后加入冻干保护剂、终浓度为1.0～2.0ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B1。


2.根据权利要求1所述的多水平质控品，其特征在于：还包括血栓弹力图质控品水平2；所述血栓弹力图质控品水平2由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液和血浆基质液配制MA值在60.0～80.0mm范围内的溶液A；然后加入冻干保护剂、终浓度为0.1～0.8ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B2。


3.根据权利要求2所述的多水平质控品，其特征在于：还包括血栓弹力图质控品水平3；所述血栓弹力图质控品水平3由如下方法制备：使用纤维蛋白原基质液、血浆基质液和羟乙基淀粉生理盐水溶液配制MA值在30.0～65.0mm范围内的溶液A’；然后加入冻干保护剂、终浓度为0.1～0.8ppm的抗凝剂；再配制MA值在50.0～70.0mm范围内的溶液B’。


4.根据权利要求3所述的多水平质控品，其特征在于：所述抗凝剂为依诺肝素钠。


5.根据权利要求4所述的多水平质控品，其特征在于：所述冻干保护剂包括蛋白质保护剂、pH缓冲剂和防腐剂。


6.根据权利要求5所述的多水平质控品，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈树国，张鹏飞，母志芹，邹忠良，
申请(专利权)人：重庆鼎润医疗器械有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50