【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于评估血液参数的方法
[0001]本专利技术的目的是用于评估与血液凝固过程相关的血栓性和出血性疾病,例如血友病或血栓形成的风险以及用于监测药物治疗的方法
。
技术介绍
[0002]血液凝固是一个复杂的
、
多因素的生理过程,其允许身体对血栓形成刺激
(
例如,血管损伤
)
做出反应
。
凝血过程是一种生理机制,其导致受损血管的修复,并且对于在任何性质的血管损伤的情况下避免出血是必不可少的
。
[0003]凝血包括血管和血小板阶段
(
初级止血
)
和凝血阶段
(
次级止血
)。
[0004]在血管损伤处形成止血凝块是一个生理过程
。
在健康个体中,它通过血小板的粘附和聚集能力
(
初级止血
)
发生,其激活导致聚集体的形成,该聚集体由于纤维蛋白的形成
(
次级止血
)
,然后形成止血塞,该止血塞能够阻止血液从损伤本身流出
。
[0005]如果血液凝固是“过度”意义上的异常,则出现血栓性疾病,如果是“不足”的,则出现出血性疾病
。
[0006]血栓形成是一种病理过程,包括一种或多种称为血栓的血凝块的非生理性形成,血栓由纤维蛋白
、
血小板
、
红细胞和白细胞组成
。
当由于凝血过程的异常或由于外部因素
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种用于分析受试者血液样品的凝血功能的离体方法,包括以下步骤:
a)
提供取自受试者并添加了抗凝血物质的全血样品;
b)
用溶液处理步骤
a)
的血液样品,所述溶液由用于标记血小板和用于标记纤维蛋白的荧光探针和血液样品的再钙化溶液组成,所述荧光探针能够或多或少地特异性结合血小板和纤维蛋白并以两种不同的发射频率发射荧光,其中上述两种溶液是单独的或在单一试剂中组合;
c)
将所述再钙化的血液样品引入具有至少一个灌注室的分析装置,其中至少一个壁由包含细胞粘附物质的透明材料组成,使所述血液样品在已知和可测量的流动条件下流入灌注室;
d)
在血液在灌注室中流动期间,交替采集至少两个系列的荧光图像,使得至少一个系列的荧光图像在血小板的荧光探针的发射波长特征下采集,并且至少一个其他系列的荧光图像在纤维蛋白的荧光探针的另一发射波长特征下采集;
e)
对血小板和纤维蛋白的采集图像的像素进行二值化,从而产生用于血小板聚集体形成的被照亮像素覆盖的面积对时间
(t)
的第一曲线和用于纤维蛋白形成的被照亮像素覆盖的面积对时间的第二曲线;所述方法包括选自以下的至少一个步骤:
f)
生成血小板聚集体形成的平均荧光强度对时间的第一曲线和纤维蛋白形成的平均荧光强度对时间的第二曲线;
g)
生成定义为血小板聚集形成的面积和荧光强度的乘积相对于时间的第一积分密度曲线和定义为纤维蛋白形成的面积和荧光强度的乘积相对于时间的第二积分密度曲线;
h)
生成粒子数对时间的曲线,其中所述粒子数通过由多于2个被照亮像素组成的血小板聚集体的数量给出;
i)
生成粒子尺寸对时间的曲线,其中所述粒子尺寸通过由多于2个被照亮像素组成的血小板聚集体的平均尺寸给出;
j)
生成最大斜率的值,该值被定义为针对在步骤
e)、f)、g)、h)
和
i)
的一个或多个步骤中获得的参数的曲线计算的一阶导数函数的相对最大点;
k)
生成最大加速度的值,该值被定义为针对在步骤
e)、f)、g)、h)
和
i)
的一个或多个步骤中获得的参数的曲线计算的二阶导数函数的相对最大点;
l)
生成
F/P
比值,其被定义为在一个或多个步骤
e)、f)
和
g)
中获得的参数的纤维蛋白
AUC
与血小板
AUC
的比值;其中所述方法进一步包括以下步骤
:m)
生成代表纤维蛋白形成时间的滞后时间值,其被定义为对应于第一次出现五幅连续图像的时间,其中与纤维蛋白相关的测量面积值
>
曲线最大峰值的1%;
n)
生成由在步骤
e)、f)、g)、h)
和
i)
的一个或多个步骤中获得的参数的曲线下面积给出的
AUC(
曲线下面积
)
值
。2.
根据权利要求1所述的方法,其中,所述分析装置包括参考标记,所述参考标记被配置为识别其上将发生血小板和纤维蛋白的粘附现象的表面所处的高度
。3.
根据权利要求1或2所述的方法,其中所述抗凝血物质是肝素或柠檬酸盐
。4.
根据权利要求
1、2
或3所述的方法,其中步骤
b)
中使用的荧光探针是:
‑
用于标记血小板,具有约
488 nm
的激发波长和约
510 nm
的发射波长的奎纳克林探针,或抗血小板抗体或其衍生物
(
例如
Fab
,抗原结合片段
)
,其与具有约
495 nm
的激发波长和约
519 nm
的发射波长的荧光分子缀合,例如
ALEXA488
;
‑
用于标记纤维蛋白,抗纤维蛋白抗体,其与具有约
556 nm
的激发波长和约
573 nm
的发射波长的荧光分子缀合,例如
ALEXA546。5.
根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中所述血液样品的再钙化通过添加一定量的钙盐,优选氯化钙来进行
。6.
根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述灌注室包括至少一个微通道部分,所述微通道部分被配置为获得
150
秒
‑1至
500
秒
‑1、
优选约
300
秒
‑1的剪切速率以模拟静脉血管中的生理条件,以及至少一个微通道部分,所述微通道部分被配置为获得
1000
秒
‑1至
2000
秒
‑1、
优选约
1500
秒
‑1的剪切速率以模拟动脉血管中的生理条件
。7.
根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述灌注室在其表面或其部分上包括至少一种细胞粘附物质,所述至少一种细胞粘附物质选自
I
型纤维状胶原蛋白
、I/III
型胶原蛋白
、VI
型胶原蛋白
、PG
‑
M/
多能蛋白聚糖
(
血管
)、
基膜蛋白多糖纤连蛋白
、
层粘连蛋白
‑
1、
玻连蛋白
、
核心蛋白聚糖
、
双糖链蛋白聚糖
、Fibulin
‑
1、
肌腱蛋白
‑
C、
光蛋白聚糖
、
血小板反应蛋白
‑
...
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