血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法。本发明专利技术提供了乙氧基喹啉、二巯基丙醇和/或泊洛沙姆124在制备血小板聚集功能检测试剂盒中的应用。本发明专利技术使用乙氧基喹啉和二巯基丙醇作为联合抗氧化剂，提高了花生四烯酸试剂的稳定性；添加泊洛沙姆124并进行超声处理，促进试剂体系的均匀分散、保持稳定，进而提高了对抗血小板聚集药物，如阿司匹林的灵敏度。如阿司匹林的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]血液中的血小板对于止血和凝血、修补破损血管有着重要的作用，参与血栓形成、动脉粥样硬化、癌肿转移和炎症反应等多种生理或病理过程。这些过程与血小板的粘附、释放和聚集等活性密切相关。对血小板聚集功能的检测可用于评估血栓性和出血性相关疾病的诊断和治疗，获知病人对抗血小板治疗的反应性，预测病人的血栓风险，从而有针对性地采取个体化抗血小板治疗方案，减少血栓事件的并发症的发生。
[0003]血小板表面有多种与聚集功能相关的受体，其中血小板GP IIb/IIIa膜受体是位于血小板表面的一种粘附性糖蛋白，该受体被激活后对可溶性纤维蛋白原的亲和力增加，可使血小板聚集在桥联纤维蛋白上，形成血小板血栓。细胞膜中的磷脂可在磷脂酶A2的作用下催化释放花生四烯酸(arachidonic acid，AA)，AA能在环氧化酶(cyclooxygenase，COX)的作用下生成血栓素A2(TXA2)，该物质能间接激活GP IIb/IIIa受体，导致血小板聚集。上述反应过程称为血小板聚集的AA途径，该途径能被相关抗血小板药物抑制，如阿司匹林，其作用原理是与COX的活性部位发生不可逆的乙酰化，导致COX失活，阻断AA转化为TXA2的途径，从而抑制血小板聚集。
[0004]临床上常使用光学比浊法，作为血小板聚集功能检测的金标准，但该方法存在操作复杂、重复性差等缺点。血栓弹力图检测(thromboelastography，TEG)是一种新的凝血功能检测手段，使用全血作为检测样本，模拟体内环境，可对血液凝固的动态变化过程进行检测，判断血液凝结的速度和强度。利用该方法进行血小板聚集功能检测，具有操作简便、可利用全血检测等优点，具体检测原理为：在过量肝素抗凝的情况下，血液中的凝血酶被完全抑制。纤维蛋白激活剂中含有对肝素不敏感的类凝血酶，可作用于纤维蛋白原，将其转变为纤维蛋白单体，随后在凝血因子的作用下，纤维蛋白单体形成网状结构。在此过程中，血小板未被激活，测得的MA值主要为纤维蛋白的强度(MA
F
)。纤维蛋白激活剂与花生四烯酸试剂联合使用时，能检测纤维蛋白和血小板聚集的总强度(MA
AA
)。若病人服用过抗AA药物，则仅能反映纤维蛋白与未被抑制的血小板凝聚强度。另外，使用高岭土激活剂测试枸橼酸抗凝全血，能测得病人的最大凝血强度，是纤维蛋白与所有血小板聚集的最大强度(MA
T
)。根据下列式I，能计算血小板的抑制率(AA％)，判断服药后病人血小板的功能，从而得出各类抗血小板药物的抑制效果。
[0005][0006]当前国内市场上AA激活途径的血小板聚集功能检测相关产品，配合血栓弹力图仪使用，可简化样本制备方式和检测操作，但存在试剂稳定性较差、重复性不佳等问题，且对
相关血小板抑制药物的灵敏度不足。现有产品中花生四烯酸试剂(AA试剂)易氧化酸败而失去活性，且油状的AA在水相的试剂体系中易聚集分层，进一步影响了试剂的稳定性和重复性，检测结果与抗血小板聚集药物浓度的相关性不好，缺乏灵敏度。针对上述问题，当前技术鲜有系统的解决方案。比如一些现有试剂缺乏抑制AA氧化的相关组分；而另一些试剂则未解决均匀性问题，缺乏对试剂稳定性能的验证。
[0007]因此，提供一种稳定性好、精密度好以及药物灵敏性好的AA激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术提供的组合物及其应用，用于制备稳定性高、精密度好以及药物灵敏性好的AA激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
[0009]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0010]本专利技术提供了组合物，包括乙氧基喹啉和二巯基丙醇。
[0011]本专利技术还提供了上述组合物在如下任意项中的应用：
[0012](1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；
[0013](2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；
[0014](3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；
[0015](4)、制备含花生四烯酸的试剂；
[0016](5)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；
[0017]所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；
[0018]所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
[0019]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物还包括泊洛沙姆124。
[0020]本专利技术还提供了上述组合物在如下任意项中的应用：
[0021](1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；
[0022](2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；
[0023](3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；
[0024](4)、促进含花生四烯酸的试剂体系的均匀分散；
[0025](5)、提高血小板聚集功能检测试剂对抗血小板聚集药物的灵敏度和/或准确性；
[0026](6)、制备含花生四烯酸的试剂；
[0027](7)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；
[0028]所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；
[0029]所述抗血小板聚集药物包括阿司匹林；
[0030]所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
[0031]本专利技术还提供了试剂，包括上述组合物，以及可接受的辅料或助剂。
[0032]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂还包括花生四烯酸、缓冲液、冻干保护剂或防腐剂中的一种或多种；
[0033]所述缓冲液包括Tris缓冲液；
[0034]所述冻干保护剂包括海藻糖；
[0035]所述防腐剂包括庆大霉素。
[0036]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物或试剂中，所述花生四烯酸可由花生四烯酸钠或花生四烯酸钠盐替代。
[0037]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂包括1.0％(v/v)花生四烯酸、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素和20mM pH值为7.5的Tris，以及可接受的辅料或助剂。
[0038]本专利技术所述w/v为质量体积比，单位为g/mL。
[0039]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂的制备方法包括超声混匀的步骤。
[0040]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂的制备方法包括如下步骤：
[0041]步骤(a)：取所述缓冲液与所述防腐剂混合，调pH值至7.5，获得溶液1；
[0042]步骤(b)：取步骤(a)所述的溶液1与如权利要求3所述的组合物、所述冻干保护剂混合，获得溶液2；
[0043]步骤(c)：取花生四烯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.组合物，其特征在于，包括乙氧基喹啉和二巯基丙醇。2.如权利要求1所述的组合物在如下任意项中的应用：(1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；(2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；(3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；(4)、制备含花生四烯酸的试剂；(5)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括泊洛沙姆124。4.如权利要求3所述的组合物在如下任意项中的应用：(1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；(2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；(3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；(4)、促进含花生四烯酸的试剂体系的均匀分散；(5)、提高血小板聚集功能检测试剂对抗血小板聚集药物的灵敏度和/或准确性；(6)、制备含花生四烯酸的试剂；(7)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；所述抗血小板聚集药物包括阿司匹林；所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。5.试剂，其特征在于，包括如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，温雅迪，
申请(专利权)人：上海太阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：