TAT酶标抗体储存液制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及TAT酶标抗体储存液。本发明专利技术提供了蛋白、糖类和芳香族氨基酸在制备凝血酶

【技术实现步骤摘要】
TAT酶标抗体储存液


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及组合物及其应用。

技术介绍

[0002]凝血酶(Thrombin)是一种多功能丝氨酸蛋白水解酶，含A、B两条多肽链，由一个链间二硫键相连。凝血酶直接作用于血液凝固过程的最后一步，促使血浆中的可溶性纤维蛋白原转变成不溶的纤维蛋白，从而达到速效止血的目的。凝血酶原被激活后能快速与抗凝血酶Ⅲ共价结合形成凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)。TAT作为凝血系统激活的分子标志物，提示凝血酶活化，血栓形成，其含量升高与弥散性血管内凝血(DIC)、深静脉血栓(DVT)、肺栓塞(PE)以及心房颤动等疾病密切相关，因此凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物含量的测定对于一些疾病的诊断和治疗具有重要的意义。由于凝血酶半衰期很短，只有几秒钟，很难直接检测，而凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)半衰期较长，可达数十分钟，因此现有方法多检测凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)的含量。目前已有的检测TAT的方法主要是酶联免疫吸附法(ELISA)和管式化学发光方法。酶联免疫吸附法操作繁琐，耗时长、测试结果不稳定、重复性差，不方便随到随测和医院急诊；而管式化学发光方法也存在酶标抗体稳定性较差，结果重现性低等问题。磁微粒化学发光法结合磁分离技术、免疫分析技术和化学发光技术完成对特定抗原的定量测定，现有的TAT磁微粒化学发光测定试剂盒采用链霉亲和素
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生物素或放射性元素标记，检测结果易受过量标记物干扰、具有放射性危害。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术提供的组合物及其应用、试剂盒结合免疫分析技术和化学发光技术，通过碱性磷酸酶水解化学发光底物进行检测，酶标抗体中的组合物能够稳定复合物的立体结构，降低抗体的非特异性结合，提高化学发光测定的重复性。
[0004]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0005]本专利技术提供了糖类在如下任意项中的应用：
[0006](I)、改善化学发光测定试剂盒的重复性；
[0007](II)、用于制备酶标抗体储存缓冲液；
[0008]所述糖类包括海藻糖、葡萄糖、甘露糖、透明质酸或半乳糖中的一种或多种；
[0009]所述化学发光测定试剂盒包括针对凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物的化学发光测定试剂盒。
[0010]本专利技术还提供了芳香族氨基酸在如下任意项中的应用：
[0011](I)、改善化学发光测定试剂盒的校准曲线；
[0012](II)、用于制备酶标抗体储存缓冲液；
[0013]所述芳香族氨基酸包括色氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸中的一种或多种；
[0014]所述化学发光测定试剂盒包括针对凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物的化学发光测定试剂盒。
[0015]本专利技术还提供了组合物，包括蛋白、糖类和芳香族氨基酸；
[0016]所述蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白或兔血清白蛋白中的一种或多种；所述糖类包括海藻糖、葡萄糖、甘露糖、透明质酸或半乳糖中的一种或多种；
[0017]所述芳香族氨基酸包括色氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸中的一种或多种。
[0018]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物中：
[0019]所述蛋白为牛血清白蛋白；
[0020]所述糖类为海藻糖；
[0021]所述芳香族氨基酸为酪氨酸。
[0022]本专利技术还提供了上述组合物在如下任意项中的应用：
[0023](I)、改善化学发光测定试剂盒的校准曲线；
[0024](II)、提高化学发光测定试剂盒的重复性；
[0025](III)、制备酶标抗体储存缓冲液；
[0026]所述化学发光测定包括针对凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物的化学发光测定。
[0027]本专利技术还提供了酶标抗体储存缓冲液，包括上述组合物，以及：
[0028](A)、缓冲液；和/或
[0029](B)、防腐剂；和/或
[0030](C)、可接受的辅料或助剂。
[0031]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述酶标抗体储存缓冲液中所述糖类的浓度为10mg/mL。
[0032]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述酶标抗体储存缓冲液中所述糖类为海藻糖；所述芳香族氨基酸为酪氨酸。
[0033]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述酶标抗体储存缓冲液包括50mM Tris、5mg/mL BSA、10mg/mL海藻糖、2.5mg/mL酪氨酸和1mg/mL NaN3。
[0034]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述酶标抗体储存缓冲液的pH值为8.0。
[0035]本专利技术还提供了试剂盒，包括可接受的辅料或助剂，以及：
[0036](a)、上述组合物；或
[0037](b)、上述酶标抗体储存缓冲液。
[0038]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括酶标抗体；
[0039]所述酶标抗体的制备方法包括：将活化后的酶与巯基化后的抗体以质量比2:1混合，获得所述酶标抗体；
[0040]所述酶包括碱性磷酸酶；
[0041]所述抗体包括抗凝血酶Ⅲ抗体。
[0042]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括免疫磁珠；
[0043]所述免疫磁珠的制备方法包括：使用活化剂活化羧基磁珠，活化后加入抗体进行偶联，获得所述免疫磁珠；
[0044]所述抗体包括凝血酶抗体；
[0045]所述羧基磁珠与所述抗体的投料比为50:1(w/w)；
[0046]所述羧基磁珠与所述活化剂的投料比为20:1(w/w)；
[0047]所述活化剂为EDC和Sulfo
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NHS。
[0048]本专利技术的组合物及其应用、试剂盒有如下效果：
[0049]本专利技术中所述免疫磁珠通过化学偶联法，将一定量的凝血酶抗体结合到活化后的磁珠表面，所使用的磁珠具有超顺磁性，可以产生快速磁响应且无磁滞效应；酶标抗体采用异双功能试剂交联法，将Sulfo
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SMCC活化后的碱性磷酸酶与Traut
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s巯基化后的抗凝血酶Ⅲ抗体进行偶联。专利技术中储存缓冲液含有蛋白、糖类、芳香族氨基酸，能够有效降低抗体的非特异性结合，减少样本中其他物质对检测结果的干扰，提高检测结果的重复性。本专利技术所使用的凝血酶抗体和抗凝血酶Ⅲ抗体与凝血酶、抗凝血酶Ⅲ抗原的结合具有高特异性、高亲和力，可快速准确捕获样本中的凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物，通过与含有AMPPD或APS
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5等发色底物的全自动免疫检验系统用底物液搭配使用完成定量检测。本专利技术的试剂盒校准曲线和测试重复性好。
附图说明
[0050]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.糖类在如下任意项中的应用：(I)、改善化学发光测定试剂盒的重复性；(II)、用于制备酶标抗体储存缓冲液；所述糖类包括海藻糖、葡萄糖、甘露糖、透明质酸或半乳糖中的一种或多种；所述化学发光测定试剂盒包括针对凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物的化学发光测定试剂盒。2.芳香族氨基酸在如下任意项中的应用：(I)、改善化学发光测定试剂盒的校准曲线；(II)、用于制备酶标抗体储存缓冲液；所述芳香族氨基酸包括色氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸中的一种或多种；所述化学发光测定试剂盒包括针对凝血酶
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抗凝血酶Ⅲ复合物的化学发光测定试剂盒。3.组合物，其特征在于，包括蛋白、糖类和芳香族氨基酸；所述蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白或兔血清白蛋白中的一种或多种；所述糖类包括海藻糖、葡萄糖、甘露糖、透明质酸或半乳糖中的一种或多种；所述芳香族氨基酸包括色氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸中的一种或多种。4.如权利要求3所述的组合物在如下任意项中的应用：(I)、改善化学发光测定试剂盒的校准曲线；(II)、提高化学发光测定试剂盒的重复性；(III)、制备酶标抗体储存缓冲液；所述化学发光测定包括针对凝血酶
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【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，王肖楠，
申请(专利权)人：上海太阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：