一种箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物及其应用，可有效解决目前没有关于箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物，没有关于箭叶淫羊藿炭疽病的快速检测方法的问题，其解决的技术方案是，快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物，是由引物

【技术实现步骤摘要】
一种箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物及其应用
一、

[0001]本专利技术涉及病原菌检测
，特别是一种箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物及其应用
。
二、
技术介绍

[0002]箭叶淫羊藿
Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.
是小檗科淫羊藿属多年生草本植物，为我国传统中药材淫羊藿的基原之一，以叶入药，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的药用功效
。
现代药理研究表明，淫羊藿具有抗肿瘤
、
抗炎
、
抗骨质疏松
、
有益于神经系统
、
保护心血管等多种功能
。
淫羊藿中的黄酮醇类化合物淫羊藿苷的衍生物淫羊藿素具有显著的抗癌活性，目前淫羊藿素
(
阿可拉定，
Icaritin)
软胶囊已于
2022
年1月份被国家药品监督管理局
(NMPA)
批准上市用于晚期肝癌治疗，而中药材淫羊藿是淫羊藿苷的唯一来源
。
同时淫羊藿作为临床常用中药，在医药
、
保健等领域应用广泛，是多种药物及保健产品的主要原料，是最具开发潜力和市场潜力的中药之一
。
[0003]近几年淫羊藿需求量激增
、
价格不断上涨，导致对野生淫羊藿的掠夺性采挖从而引起野生资源枯竭
。
目前箭叶淫羊藿的人工栽培已成功实现，并成为药用淫羊藿属植物中栽培面积最大的物种，也成为国内外药用淫羊藿的主要来源
。
目前，在河南省驻马店地区建立了全亚洲最大的箭叶淫羊藿种植基地，也成为全国人工栽培淫羊藿药材的主要供应地
。
但随着箭叶淫羊藿引种驯化和长期无性繁殖，出现了多种病害问题，而其中较为严重的病害是箭叶淫羊藿叶部病害，而淫羊藿的药用部位是叶子，叶部病害的发生会严重影响淫羊藿的产量和质量
。
对药用植物发病前的快速诊断和提前防治是降低病害发生率和严重度的有效手段之一，能最大限度地减少经济损失
。
因此植物病原菌早期检测技术是防治病害大面积爆发的有效手段
。
经过病害调查及鉴定发现箭叶淫羊藿叶部病害包含多种不同的真菌病害，其中炭疽病
(Colletotrichum fructicola)
是河南产区主要叶部病害之一，发病率可达
30
‑
40
％，对箭叶淫羊藿的产量和质量造成了严重影响，其早期症状容易与其他叶部病害混淆
。
同时病原菌的常规分离鉴定方法，存在周期长
、
流程繁琐
、
耗时耗力等缺点
。
因此建立快速
、
灵敏
、
准确
、
实用的箭叶淫羊藿炭疽病检测方法至关重要
。
实时荧光定量技术
(Real
‑
time quantitative PCR
，
qPCR)
通过探测
PCR
扩增产物的荧光信号，对扩增进程进行实时检测，根据扩增指数期的循环阈值
(Ct)
定量
DNA。
具有特异性强
、
灵敏度高等优势，已经用于多种炭疽菌在不同寄主上的检测
。
[0004]目前未见有关于箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌
(Colletotrichum fructicola)
的
qPCR
检测方法和特异性引物报道，也无早期检测或快速检测相关的报道
。
三、
技术实现思路

[0005]针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物及其应用，可有效解决目前没有关于箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌
(Colletotrichum fructicola)
的特异性引物，没有关于箭叶淫羊藿炭疽病
的快速检测方法的问题
。
[0006]本专利技术解决的技术方案是，快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌
(Colletotrichum fru cticola)
的特异性引物，是由引物
B7
‑
F
和引物
B7
‑
R
组成的引物对，引物
B7
‑
F
核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，引物
B7
‑
R
核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示
。
[0007]本专利技术箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物在快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌中的应用
。
[0008]本专利技术快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌
(Colletotrichum fructicola)
的方法为：对感染果生刺盘孢菌
(Colletotrichum fructicola)
的箭叶淫羊藿叶片进行基因组
DNA
提取，作为模板，以上游引物
B7
‑
F
：5’‑
GAAGGTCAGTACTCGTCAATATG
‑3’
，下游引物
B7
‑
R
：5’
[0009]‑
TGTATGTCATGCCCCTTATCTGGC
‑3’
进行
qPCR
扩增，
qPCR
扩增反应体系中含有1μ
L
的待测样品
DNA
，
10
μ
L
的
Taq SYBR
，1μ
L
的上
、
下游引物，
ddH2O
补齐至
20
μ
L
；
qPCR
扩增程序为：
50℃、2min
，
95℃
预变性
2min
，
95℃
变性
15s
，
66℃
退火
15s
，
72℃
延伸
1min
，
40
个循环；
95℃、15s
，
60℃、1min
，
95℃、1s
，绘制熔解曲线，3次重复，读取
Ct
值以均值带入标准曲线计算菌量浓度
。
[0010]本专利技术通过对同属及不同属多种真菌物种的
TUB2
基因进行序列比对分析，设计了一对箭叶淫羊藿炭疽菌果生刺盘孢菌
(Colletotrichum fructicola本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物，其特征在于，是由引物
B7
‑
F
和引物
B7
‑
R
组成的引物对，引物
B7
‑
F
核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，引物
B7
‑
R
核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示
。2.
权利要求1所述的箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物在快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌中的应用
。3. 根据权利要求2所述的箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的特异性引物在快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌中的应用，其特征在于，快速检测箭叶淫羊藿炭疽病果生刺盘孢菌的方法为：对感染果生刺盘孢菌的箭叶淫羊藿叶片进行基因组
DNA
提取，作为模板，以上游引物
B7
‑
F
：5’‑
GAAGGTCAGTACTCGTCAATATG
‑3’
，下游引物
B7
‑
R
：5’‑
TGTATGTCATGCCCCTTATCTGGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯文川，董诚明，杨林林，董宁，王涵嫣，初雷霞，淡志伟，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：