一种基于北柴胡叶绿体基因组多态性基因片段制备的条形码及其应用制造技术

本发明专利技术提供一组叶绿体基因组多态性基因片段以及利用该多态性基因片段制备的

【技术实现步骤摘要】
一种基于北柴胡叶绿体基因组多态性基因片段制备的条形码及其应用


[0001]本专利技术涉及北柴胡的鉴定方法，具体涉及利用北柴胡叶绿体基因组多态性基因片段对北柴胡的真伪
、
批次
、
产地的鉴别方法
。

技术介绍

[0002]北柴胡
(Bupleurum chinense DC.)
是我国常用药材，已有
2000
多年的应用历史，是大宗中药材之一
。
柴胡始载于
《
神农本草经
》
，书中描述柴胡“味苦平
。
治心腹，去肠胃中结气，饮食积聚，寒热邪气，推陈致新
。
久服，轻身明目益精
。”《
中国植物志
》
中记载我国有柴胡属植物
42
种，
17
变种，7变形
。《
中华人民共和国药典
》(2020
版
)
收载柴胡为伞形科植物柴胡
(Bupleurum chinense DC.)
或狭叶柴胡
(Bupleurum scorzonerifolium Willd.)
的干燥根
,
并按照二者的性状区分二者为“北柴胡”和“南柴胡”，具有升阳疏肝退热的作用，临床上常用于感冒发热，胸胁胀痛等病症
。
此外，柴胡还具有免疫调节
、
抗抑郁
、
保肝
、
抗炎<br/>、
退热
、
抗肿瘤的作用
。
[0003]柴胡市场混乱，混淆品和伪品如瞿麦
(Dianthus superbusL.)、
大叶柴胡
(Bupleurum Longiradiatum)、
银柴胡
(Radix Stellariae)
大量流入市场
。
柴胡药材因为物种多以及销售过程中品名和品种交叉导致鉴定困难较大
。
虽然已有相关文献报道过北柴胡及其伪品或混淆品的性状及其理化鉴别，但对于如何追溯北柴胡药材的产地来源
、
区分不同生产批次
、
筛选优质品种以及鉴定生长年限却尚无相关研究
。
[0004]在药材使用中，由于形态
、
结构极近似，显微等传统鉴定技术不能保证准确无误的鉴定药材
。
与传统中药鉴定方法相比，基于
DNA
序列标记的中药材分子鉴定技术具有重复性好
、
准确度高等优点
。
近年来在中药鉴定领域得到了广泛的应用
。
叶绿体是植物细胞特有的细胞器，叶绿体细胞器中存在双链环状
DNA
，相较于核基因组，叶绿体基因组序列较小
、
相对简单
、
在
80
％被子植物中是母系遗传，具有相对稳定的基因组结构
、
基因含量
、
基因顺序和较低的突变率，序列保守性高，常作为物种的系统发育和鉴定的有效工具之一
。
近些年已有学者利用叶绿体基因间区序列，如
matK、rbcL
序列
。
曾伟萍利用
matK
和
rbcL
研究柴胡属药用植物在种内和种间的变异程度，
matK
的种内变异较大，
matK
和
rbcL
的种间变异较大
。
这些基因多态性片段可为植物物种水平上的鉴定提供分子标记，而且还可以为物种提供准确的遗传多样性和群体结构，进一步为物种的品种选择育种提供有价值的信息
。
然而目前国内外较少有能够用于北柴胡种质鉴别的基因多态性区域的报道
。

技术实现思路

[0005]为了弥补现有技术的空白，本专利技术提供了一种北柴胡叶绿体基因组多态性基因片段及其应用，所述基因片段为
ndhD
和
psbB
等多态性基因片段
。
[0006]本专利技术的第一方面，提供一种
ndhD
和
psbB
多态性基因片段作为北柴胡鉴别
DNA
条形码的应用
。
在一种实施方案中，所述鉴别
DNA
条形码可用于北柴胡种质鉴别，更为具体的，
所述种质鉴别包括对样品基原
、
产地
、
质量和真伪的鉴别
。
[0007]本专利技术的第二方面，提供一种利用
ndhD
和
psbB
多态性基因片段对北柴胡种子进行批次防伪的方法，所述方法包括：
[0008](1)
北柴胡单倍型选择和种植
[0009]将收集单倍型种子，将携带不同的
ndhD
和
psbB
多态性基因片段的单倍型进行组合，然后分批次进行种植，
[0010](2)
北柴胡批次样品的鉴定
[0011]将上述的北柴胡样品进行收集，提取
DNA
，对北柴胡的叶绿体多态性基因片段
ndhD
和
psbB
基因片段进行扩增并测序，并将测序结果分析，根据单倍型的序列和组合方式判断种植的北柴胡的批次样品
。
[0012]本专利技术相对于现有技术至少获得了如下有益的技术效果：
[0013]1.
本专利技术所提供的北柴胡基因多态性片段可以用于对北柴胡药材种质进行鉴别，方法操作简单，准确度高，可实现对不同产地不同种质的北柴胡的区分；
[0014]2.
本专利技术所提供的北柴胡基因多态性片段可以作为识别北柴胡药材真伪的
DNA
条形码，能够快速有效的对不同批次的北柴胡药材进行真伪识别，保障北柴胡药材市场秩序稳定；
[0015]3.
本专利技术所提供的北柴胡基因多态性片段可以为北柴胡物种提供准确的遗传多样性和群体结构分析提供有价值的信息
。
附图说明
[0016]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制
。
在附图中：
[0017]图
1ndhD
基因片段不同单倍型序列；
[0018]图
2ndhD
单倍型序列构建的进化树；
[0019]图
3ndhD
单倍型序列构建的遗传距离；
[0020]图
4psbB
基因片段不同单倍型序列；
[0021]图
5psbB
单倍型序列构建的进化树；
[0022]图
6psbB
单倍型序列构建的遗传距离；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种北柴胡叶绿体基因组多态性基因片段作为北柴胡鉴别用
DNA
条形码的应用，其特征在于，所述多态性基因片段为
ndhD
和
psbB
等多态性基因片段
。2.
如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鉴别为针对北柴胡种质的鉴别
。3.
如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述种质包括对样品真伪
、
产地
、
批次的鉴别
。4.
一种利用北柴胡
ndhD
和
psbB
多态性基因片段对北柴胡种子进行批次防伪的方法，所述方法包括：
(1)
北柴胡单倍型选择和种植收集不同单倍型北柴胡种子，将携带不同的
ndhD
和
psbB
的单倍型进行组合，然后分批次进行种植；
(2)

【专利技术属性】
技术研发人员：魏胜利，王晓晖，王馨，尹光耀，陈颖，刘珊瑚，刘凤波，
申请(专利权)人：立恒张家口中药材种植有限公司，
类型：发明
国别省市：