本发明专利技术提供了一种苯甲酸标准溶液制备方法、一种根据该方法确定苯甲酸标准溶液标准曲线的方法和一种检测奶酪中苯甲酸含量的方法。上述方法将奶酪中加入海砂和乙酸锌研磨，然后加入２０ｍＬ蒸馏水，用旋涡混合器混匀后离心，过滤后取５ｍＬ滤液用１ｍＬ?６ｍｏｌ／Ｌ盐酸调节ｐＨ值，用二氯甲烷提取，用气相色谱－质谱／质谱仪（ＧＣ－ＭＳ／ＭＳ）测定苯甲酸的含量，用毛细管色谱柱利用程序升温即可满足检测要求。该气相色谱－质谱／质谱法检测奶酪中苯甲酸含量的方法，提取时间短、操作简单方便、检测准确率高、抗干扰能力强，可以满足实验室中检测量大的需要。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学成份的检测的
，具体来说，它涉及一种苯甲酸标准溶液 的制备方法，一种用具有不同苯甲酸含量的一系列苯甲酸标准溶液确定苯甲酸标准溶液 标准曲线的方法，和一种根据确定的苯甲酸标准溶液标准曲线检测奶酪中苯甲酸含量的方 法。
技术介绍
苯甲酸(又称安息香酸)是一种常用的食品防腐剂，与其钠盐的防腐效果相同，它 对多种微生物细胞的呼吸酶系的活性有抑制作用，并对微生物的细胞膜生长有阻碍作用， 从而达到抑制微生物的繁殖。由于它既能抑制多种微生物的繁殖，又具有很好的杀菌作用， 被广泛用于罐头、果酱、酱油、食醋、汽水以及各类肉食品中。苯甲酸是各国允许使用，而且 历史比较悠久的食品防腐剂。当苯甲酸进入人体后，会与人体内氨基乙酸(甘氨酸)和葡萄糖酸分别反应生成 马尿酸和葡萄糖苷酸，后者会随尿排出体外，所以每日摄取少量苯甲酸不会对人体形成危 害。但是摄入过量的苯甲酸时，却会对人体肝脏造成危害。因为苯甲酸的戒毒反应是在肝 脏中进行的，对肝功能衰弱的人即使摄取少量苯甲酸也会使病情加重，苯甲酸对皮肤、眼睛 和粘膜也有一定的刺激性，苯甲酸钠可引起肠道不适。联合国粮农组织(FAO)和世界卫生 组织(WHO)试验研究后规定人体对苯甲酸的每日摄入量为5-10mg/kg，我国也对各类食品 中苯甲酸的最大使用量作了规定。国家标准《GB/T 21703-2008乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定》中用液相色谱 法来测定苯甲酸的含量。该方法的前处理为先在150ml锥形瓶中称取液体乳20g，或者在 150ml锥形瓶中称取固体样品3g，加IOml水全部溶解。然后加入25ml 0. lmol/L氢氧化钠 溶液，在70°C水浴中处理15分钟。冷却后，加适量甲醇转移至IOOml容量瓶中。用0. 5moll 硫酸溶液将PH调节到8，然后加人2ml 92g/L亚铁氰化钾溶液和2ml 183g/l乙酸锌溶液。 剧烈振摇，静置15分钟，混合后冷却到室温，再用甲醇定容，静置15分钟，上清液经过滤膜 过滤。收集滤液作为试样溶液，用于高效液相色谱仪测定。该方法需要使用用甲醇45ml_65ml，会对环境造成一定污染，同时处理样品时间 长，操作较为复杂。该方法通常是先对具有确定苯甲酸含量的工作液进行标定，然后再用同样的方法 处理和测试被测样品，根据这两次测量的结果来推算被测样品中的苯甲酸含量。但这方法 测量精度不高，由于一次测量的数值可能会受到一些不确定因素的干扰，因此根据该工作 液的数值确定的样品苯甲酸含量可能并不准确。另外，在《气相色谱-质谱联用法测定奶粉中苯甲酸(钠)含量》(《化学测定方 法》，2008年第18卷第1期，第75-76，甘平胜，黄聪，于鸿，候建荣)中公开了一种用气相色 谱-质谱法检测苯甲酸含量的方法，但该方法只检测奶粉样品，没有提及实验时所用定性罔子、定量罔子°
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种苯甲酸标准溶液的制备方法，该方法操作简便且具有较尚精度。本专利技术还提供了一种苯甲酸标准溶液标准曲线的确定方法，它可以用上述苯甲酸标准溶液的制备方法配备具有不同苯甲酸含量的标准工作液，并采用气相色谱-质谱法以 准确确定苯甲酸含量与峰面积之间的对应关系。本专利技术又提供了一种检测乳与奶酪中苯甲酸含量的方法，它采用气相色谱-质谱 /质谱法检测奶酪样品中的苯甲酸，根据上述的苯甲酸标准曲线确定奶酪中的苯甲酸含量， 并提高检测时的抗干扰能力。为实现上述目的，本专利技术提供了一种苯甲酸标准溶液的制备方法，该方法包括如 下步骤1)取20. 0 μ g/ml的苯甲酸标准工作液ImL到一个10_15ml的离心管中；2)在该离心管中加入蒸馏水至5ml，再加入ImL盐酸溶液(6mol/L)和2ml 二氯甲 烷，用旋涡混合器混合1分钟，用离心机在3000rpm-4000rpm条件下离心5_10分钟；3)用Iml注射器吸取下清液经过过滤膜过滤到进样小瓶，此即为制得待测的苯甲 酸标准溶液。本专利技术还提出了一种根据上述苯甲酸标准溶液制备方法确定苯甲酸标准溶液标 准曲线的方法，该方法包括1)制备具有不同苯甲酸含量的苯甲酸标准溶液；2)用气相色谱_质谱/质谱法分别标定上述步骤1)制备的不同浓度的苯甲酸标 准溶液；3)确定苯甲酸含量与峰面积对应的标准曲线。根据本专利技术的再一种确定苯甲酸标准溶液标准曲线的方法，其中，苯甲酸标准溶 液的量分别为取 20.0 μ g/ml 的苯甲酸标液 0. lml.O. 2ml,0. 5ml,0. 6ml,0. 8ml 和 1.0ml。根据本专利技术的另一种确定苯甲酸标准溶液标准曲线的方法，其中，气相色谱的条 件为色谱柱毛细管色谱柱，固定相为亚硝基对苯二甲酸改性聚乙二醇或相当者，色谱 柱规格为 30mX0. 25mmX0. 2μπι 或 30mX0. 32mmX0. 2ym ；进样口 温度200-300 V ；进样方式分流，分流比为40 1-50 1 ；载气高纯氦气；流速毛细管色谱柱内径为0. 25 μ m的流速为1. 0-1. 4ml/min,毛细管色谱柱内径 为 0. 32 μ m 的流速为 1. 8-2. 5ml/min ；升温程序如下初温为140°C维持1-2分钟，然后以4-7°C /min升到175_190°C后， 保持4-7分钟，程序共10-20. 5分钟。根据本专利技术的又一种确定苯甲酸标准溶液标准曲线的方法，其中，质谱的条件 为电离方式电轰击电离(EI)；电离能量70eV ；离子源温度200-220°C；传输线温度150-200°C；溶剂延迟时间3· 0-5. 0分钟；进样量l_2yL;扫描模式多反应监测(MRM)，定性离子质荷比(m/z) 122 > 105，122 > 77，定量离 子质荷比(m/z) 122 > 105 ；碰撞能量质荷比(m/z)122 > 105 为 8V, 122 > 77 为 20V。本专利技术又提出了一种用上述方法确定的苯甲酸标准溶液标准曲线检测奶酪中苯 甲酸含量的方法，该方法包括1)称取3_5g海砂到50ml离心管，然后在离心管中称取l_3g奶酪样品，加入l-2g乙酸锌，准确加入20ml蒸馏水；2)用玻璃棒充分搅拌，使奶酪均勻混合在海砂中；3)用旋涡混合器充分混合；4)用离心机在3000rpm-4000rpm条件下离心5-10分钟；5)过滤水层，吸取5ml滤液于一个10_15ml的离心管中，加入6mol/L盐酸溶液 lml，2ml 二氯甲烷；6)用旋涡混合器混合1分钟，用离心机在3000rpm-4000rpm条件下离心5_10分 钟；7)用Iml注射器吸取下清液经过滤膜过滤到进样小瓶，此即为制得待测的苯甲酸 样品溶液；8)用气相色谱_质谱/质谱仪对所述的待测的苯甲酸样品溶液进行测量；9)将步骤8)所得的测量结果与所确定的苯甲酸含量标准曲线进行比对，确定所 述待测的苯甲酸样品溶液的苯甲酸含量；10)根据所述待测的苯甲酸样品溶液的苯甲酸含量确定所述奶酪中的苯甲酸含量。本专利技术的气相色谱-质谱法检测乳与奶酪中苯甲酸含量的方法，采用气相色 谱-质谱/质谱法测定奶酪中的苯甲酸，具有消耗有机溶剂少、操作时间短、操作简单方便、 检测准确率高、抗干扰能力强等特点。附图说明以下附图仅旨在于对本专利技术做示意性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种苯甲酸标准溶液制备方法，其特征在于，该方法包括：１）取２０．０μｇ／ｍｌ的苯甲酸标准工作液１ｍＬ到一个１０ｍｌ－１５ｍｌ的离心管中；２）在所述离心管中加入蒸馏水至５ｍｌ，再加入１ｍＬ盐酸溶液（６ｍｏｌ／Ｌ）和２ｍｌ二氯甲烷，用旋涡混合器混合１分钟，用离心机在３０００ｒｐｍ－４０００ｒｐｍ条件下离心５－１０分钟；３）用１ｍｌ注射器吸取下清液经过过滤膜过滤到进样小瓶，此即为制得待测的苯甲酸标准溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡桂林，赵源，常建军，刘晓川，李梅，刘卫星，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：15[中国|内蒙]
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