一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法，包括提供其上分布有抗原源并将其固定的载体片；将载片放置在下板的中央区域，使固定有抗原的载片表面朝上；将上板相对于下板定位；将上板和下板保持在一起；将选定的含有抗体的液体引入通道中，并使通道中的液体与载体片的表面接触一段选定的时间；进而从每个通道中抽出含有抗体的液体；将上板从下板中抽出并从下板中移出载体片，从而可以用随后的免疫印迹方法处理载体片以获得许多平行的条，其显示了与分布的抗原结合的抗体

【技术实现步骤摘要】
一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法


[0001]本专利技术涉及电泳转膜
，具体地指一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法
。

技术介绍

[0002]载体片，通常是硝酸纤维素膜，然后将其与凝胶表面接触，使蛋白质粘附并固定在硝酸纤维素载体片的表面上
。
在免疫印迹技术中，将硝化纤维素薄片和粘附在其上的蛋白质切成几小条，并将每条小条在含有第一类特定抗体的溶液中孵育一段时间，第一类抗体称为第一抗体
。
标准免疫印迹技术非常耗时且乏味，特别是如果要测试数十或数百种抗体时，该技术还容易出错，因为分开的条带可能变得混在一起或识别不正确，并且条带本身可能趋于收缩或膨胀，从而使得难以比较在分开的条带上检测到的条带的位置
。
特别地，选择产生单克隆抗体的杂交瘤培养物使得高效和快速筛选大量培养物成为高度期望的
。
通常，如果未纯化目的抗原，免疫印迹是选择单克隆抗体的唯一方法
。
在选择杂交瘤的早期阶段，必须在数天内筛选集落以确保细胞活力
。
如果在此阶段筛选方法效率低下，则需要扩展细胞培养工作
。
更有效的筛选技术可筛选更多的杂交瘤，从而增加成功选择所需抗体生产株系的可能性
。
然而，由于多种原因，目前的免疫印迹筛选效率低下
。
首先，对于每个要测试的杂交瘤，必须通过该过程的许多步骤处理一条单独的硝化纤维素条
。
第二，在杂交瘤生长的早期阶段，可用于筛选的抗体数量极为有限，硝化纤维素的单个条带必须与有限数量的抗体一起孵育，这是一个难题
。
第三，完成程序后必须比较所有硝酸纤维素条
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法，允许使用非常少量的抗体溶液，从而可以对微量滴定板杂交瘤培养物进行免疫印迹筛选
。
[0004]本专利技术提出的一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法，包括以下步骤：
[0005]提供其上分布有抗原源并将其固定的载体片；
[0006]提供具有以下特征的模板：下板具有顶表面，该顶表面具有平坦的中央区域，该中央表面的尺寸适于容纳平坦放置的载体片材；和上板具有平坦的底表面，在该板的中心区域中形成有多个平行的通道，当上板和下板相对时，该上通道适于在下板的中心区域上延伸；在放置载片的上，下板的中心区域之外的外围区域，将上板紧紧地靠在下板上的装置；在板的中央区域的任一侧的周边位置上与至少一个板接合并在平行通道上延伸的桥接杆，以及与桥接杆接合的装置，用于在平行通道上方的位置将板压在一起；在上板中，接合在上板和下板之间的承载片将在平行通道的区域紧密接合；
[0007]将载片放置在下板的中央区域，使固定有抗原的载片表面朝上；
[0008]将上板相对于下板定位，使得在上板的底表面上形成的通道在载体片上延伸并且与抗原在片上的分布方向对齐；
[0009]将上板和下板保持在一起，从而使承载片紧紧地接合在上板和下板之间，并且与桥架相接合的装置将板在平行通道上方压在一起；
[0010]将选定的含有抗体的液体引入通道中，并使通道中的液体与载体片的表面接触一段选定的时间；进而从每个通道中抽出含有抗体的液体；
[0011]将上板从下板中抽出并从下板中移出载体片，从而可以用随后的免疫印迹方法处理载体片以获得许多平行的条，其显示了与分布的抗原结合的抗体
。
[0012]进一步地，在从所述下部板上移出所述载体板的步骤之后，用蒸馏水冲洗所述载体板
。
[0013]进一步地，在从所述下板上移除所述载体片的步骤之后，洗涤所述载体片以去除未结合的抗体，然后将所述载体片与示踪剂标记的第二抗体一起孵育，所述第二抗体将结合至结合在所述抗体上的抗体
。
[0014]进一步地，还包括步骤：获取目标样本的抗体，获取抗原表位与抗原识别区及其编码基因的对应关系，构建匹配抗原表位和抗体识别区及编码基因的第一数据库；利用训练好的神经网络模型对所述抗原表位进行处理，以得到待预测抗体的编码基因序列集合
X
；根据分子对接
、
分子动力学和已有基因序列数据库
Y
筛选出编码基因序列集合
X
中对抗原具有不同活性
、
稳定性
、
特异性的抗体序列，以建立次级抗体库
。
[0015]本专利技术的有益效果是：通过使用非常少量的抗体溶液，从而可以对微量滴定板杂交瘤培养物进行免疫印迹筛选
。
筛选的结果可能会在几个小时内获得，为研究人员提供了立即选择杂交瘤进行扩增并丢弃无用菌落的信息
。
载体片在使用各种抗体溶液处理期间保持完好无损，使研究人员可以查看整个片并准确比较示踪剂标记的条带位置
。
也可以使用模板将多克隆抗体的特异性和效价进行测试
。
附图说明
[0016]图1是本专利技术方法流程示意图
。
具体实施方式
[0017]以下结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步的详细描述
。
[0018]如图1所示的一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法，包括以下步骤：
[0019]提供其上分布有抗原源并将其固定的载体片；
[0020]提供具有以下特征的模板：下板具有顶表面，该顶表面具有平坦的中央区域，该中央表面的尺寸适于容纳平坦放置的载体片材；和上板具有平坦的底表面，在该板的中心区域中形成有多个平行的通道，当上板和下板相对时，该上通道适于在下板的中心区域上延伸；在放置载片的上，下板的中心区域之外的外围区域，将上板紧紧地靠在下板上的装置；在板的中央区域的任一侧的周边位置上与至少一个板接合并在平行通道上延伸的桥接杆，以及与桥接杆接合的装置，用于在平行通道上方的位置将板压在一起；在上板中，接合在上板和下板之间的承载片将在平行通道的区域紧密接合；
[0021]将载片放置在下板的中央区域，使固定有抗原的载片表面朝上；
[0022]将上板相对于下板定位，使得在上板的底表面上形成的通道在载体片上延伸并且与抗原在片上的分布方向对齐；
[0023]将上板和下板保持在一起，从而使承载片紧紧地接合在上板和下板之间，并且与桥架相接合的装置将板在平行通道上方压在一起；
[0024]将选定的含有抗体的液体引入通道中，并使通道中的液体与载体片的表面接触一段选定的时间；进而从每个通道中抽出含有抗体的液体；
[0025]将上板从下板中抽出并从下板中移出载体片，从而可以用随后的免疫印迹方法处理载体片以获得许多平行的条，其显示了与分布的抗原结合的抗体
。
[0026]在从所述下部板上移出所述载体板的步骤之后，用蒸馏水冲洗所述载体板
。
[0027]在从所述下板上移除所述载体片的步骤之后，洗涤所述载体片以去除未结合的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种通过免疫印迹筛选多种抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：提供其上分布有抗原源并将其固定的载体片；提供具有以下特征的模板：下板具有顶表面，该顶表面具有平坦的中央区域，该中央表面的尺寸适于容纳平坦放置的载体片材；和上板具有平坦的底表面，在该板的中心区域中形成有多个平行的通道，当上板和下板相对时，该上通道适于在下板的中心区域上延伸；在放置载片的上，下板的中心区域之外的外围区域，将上板紧紧地靠在下板上的装置；在板的中央区域的任一侧的周边位置上与至少一个板接合并在平行通道上延伸的桥接杆，以及与桥接杆接合的装置，用于在平行通道上方的位置将板压在一起；在上板中，接合在上板和下板之间的承载片将在平行通道的区域紧密接合；将载片放置在下板的中央区域，使固定有抗原的载片表面朝上；将上板相对于下板定位，使得在上板的底表面上形成的通道在载体片上延伸并且与抗原在片上的分布方向对齐；将上板和下板保持在一起，从而使承载片紧紧地接合在上板和下板之间，并且与桥架相接合的装置将板在平行通道上方压在一起；将选定的含有抗体的液体引入通道中，并使通道中的液体与载体片的表面接触一段选定的时间；进而从每个通道中抽出含有抗体的液体；将上板从下板中抽出并从下板中移出载体片，从而可以用随后的免疫印迹方法处理载体片以获得许多平行的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳艳，牛君星，邓小龙，王向颖，毛媛媛，
申请(专利权)人：武汉科拜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：