检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒技术

本发明专利技术属于食品检测技术领域，具体涉及检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒，所述方法包括如下步骤：样品制备步骤：使用提取液提取所述含乳产品中的蛋白组分，得到含有蛋白组分的成分

【技术实现步骤摘要】
检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于食品检测
，具体涉及检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒
。

技术介绍

[0002]据报道，目前有
0.6
％～3％的6岁以下儿童及婴幼儿患有牛奶过敏
。
牛奶过敏不仅导致婴幼儿没有充足的营养供应，影响身体发育，而且极易引发各种慢性疾病如哮喘等，严重影响婴幼儿的健康成长
。
由于婴幼儿没有其他更多的营养来源，而牛奶过敏在医学上尚没有安全有效的根治手段，又鉴于婴幼儿较高的牛乳蛋白过敏症状发生率和少年儿童由于日益增长的牛乳摄入而引发的牛乳过敏问题，研发低敏性的奶粉，保障牛奶过敏婴幼儿的营养需求，具有重要的经济价值和社会意义
。
[0003]利用水解蛋白是获得低敏配方的最好方法，即对蛋白结构进行修饰从而大大减少具有抗原活性物质的量
。
目前，根据水解的程度，水解蛋白配方分为两种，一种是完全水解蛋白配方
(Extensively Hydrolyzed Formula
，
EHF)
，又称为深度水解配方；另外一种是适度水解蛋白配方
(Partially Hydrolyzed Formula
，
PHF)
，又称为部分水解配方
。
适度水解配方是对牛奶蛋白进行适度的水解，利用蛋白酶切断肽链，使之成为小肽段，改变牛奶蛋白的表位
(
抗原决定基
)
，从而降低蛋白的抗原性，但还保留微量抗原活性
。
由于保留了部分抗原性，婴儿持续少量牛奶蛋白抗原的摄入可以诱导免疫耐受
。
因此，适度水解配方通常推荐用于特应性高风险婴儿的初级干预，以及牛奶过敏的婴儿经过一段时间的完全水解配方治疗后，症状缓解后的续贯治疗，以期诱导耐受
。
完全水解蛋白配方和适度水解蛋白配方在过敏的初级预防方面的效果孰优孰劣，目前尚无定论
。
适度水解蛋白配方曾被多项临床研究证实具有过敏预防效果，被推荐作为婴幼儿过敏预防的早期膳食干预
。
有大量研究显示，适度水解配方可降低婴儿特应性皮炎的发生，并且这种预防效果可持续到3岁以后
。
[0004]在水解蛋白配方产品开发过程中，最重要的工作之一是如何对产品原料
、
低敏产品进行致敏性检测
。
目前，对于牛奶蛋白过敏源的检测主要利用免疫学方法，例如，引用文献1公开了一种基于纳米铂探针检测牛乳
β
‑
乳球蛋白及其致敏性残基的方法，通过重组表达技术制备
β
‑
乳球蛋白
IgE
表位串联体蛋白，再分别以串联体蛋白及
β
‑
乳球蛋白为抗原，按常规技术制备相应多克隆抗体，再经亲和纯化制备特异性抗体
。
以串联体多克隆抗体为捕获抗体，生物素化
β
‑
乳球蛋白多克隆抗体标记的纳米铂探针为检测抗体，建立夹心
ELISA
法，经酶标仪检测吸光值，通过建立标准曲线，实现对食品中过敏原
β
‑
乳球蛋白及其致敏性残基的定量检测
。
[0005]此外，目前市场上常见的牛奶蛋白过敏原检测方法是以试剂盒进行检测，然而由于大部分试剂盒不是从婴儿过敏原表位进行出发研制，导致其检出限值很高，无法准确进行过敏原检测
。
由于适度水解配方区别于完全水解配方和氨基酸配方，其具有多个完整的过敏原蛋白分子表位，虽然在免疫检测中其可以同时被两种抗体识别，但抗体易与水解产品中的基质成分发生反应，从而导致开发结果准确的针对于适度水解配方中的过敏原蛋白
分子的检测方法和试剂盒仍然存在困难
。
[0006]引用文献：
[0007]引用文献1：
CN 106290893 A。

技术实现思路

[0008]专利技术要解决的问题
[0009]由于婴幼儿牛奶过敏高发，基于水解蛋白的低敏配方产品得到了广泛关注，随之而来的重要需求在于如何对含乳产品，特别是基于水解蛋白的产品进行致敏性检测
。
然而，现有的牛奶蛋白过敏原检测试剂盒检出限值很高，检测结果不准确，并且当前针对适度水解蛋白产品，通常采用的方法是基于过敏原或粗提物的酶联免疫实验，针对性不足
。
[0010]对此，本专利技术经过大量的实验分析，发现可以通过检测
β
‑
乳球蛋白来检测含乳产品，尤其是经过适度水解的牛奶产品的致敏性
。
进一步，本专利技术通过制备
β
‑
乳球蛋白的抗体，研究不同抗体之间的配对关系，研制了适用于含乳产品，尤其是适度水解蛋白产品中
β
‑
乳球蛋白的夹心酶联免疫检测方法，满足了市场上对适度水解蛋白产品过敏原检测的需求
。
[0011]用于解决问题的方案
[0012]本专利技术发现，可以通过以下的技术方案来解决上述技术问题：
[0013][1].
一种检测含乳产品中的过敏原的方法，其中，所述方法包括如下步骤：
[0014]样品制备步骤：使用提取液提取所述含乳产品中的蛋白组分，得到含有蛋白组分的成分
(A)
，所述提取液为碱性缓冲性溶液，任选的，所述缓冲性溶液中含有非离子型表面活性剂；
[0015]酶联免疫检测步骤：利用双抗体夹心法对所述成分
(A)
进行酶联免疫检测；
[0016]并且，所述含乳产品包括适度水解蛋白产品，所述过敏原为
β
‑
乳球蛋白
。
[0017][2].
根据
[1]所述方法，其中，所述提取液为含有吐温系表面活性剂的
CBS
溶液
。
[0018][3].
根据
[1]或
[2]所述的方法，其中，在所述样品制备步骤中，包括将提取液与所述适度水解蛋白配方产品混合后加热的操作步骤；
[0019]优选地，所述加热的温度为
55
～
65℃
，加热的时间为
10
～
30min。
[0020][4].
根据
[1]～
[3]中任一项所述的方法，其中，在所述酶联免疫检测步骤中，包括如下操作步骤：
[0021]获得抗原抗体复合物的步骤，其中，将所述成分
(A)
加入到包被有捕获抗体的酶标板上以得到所述抗原抗体复合物，所述捕获抗体为牛
β
‑
乳球蛋白的兔抗免疫血清；
[0022]检测抗体检测的步骤，其中，使用检测抗体与所述原抗体复合物进行反应；所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的牛
β
‑
乳球蛋白的兔多克本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测含乳产品中的过敏原的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：样品制备步骤：使用提取液提取所述含乳产品中的蛋白组分，得到含有蛋白组分的成分
(A)
，所述提取液为碱性缓冲性溶液，任选的，所述缓冲性溶液中含有非离子型表面活性剂；酶联免疫检测步骤：利用双抗体夹心法对所述成分
(A)
进行酶联免疫检测；并且，所述含乳产品包括适度水解蛋白产品，所述过敏原为
β
‑
乳球蛋白
。2.
根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述提取液为含有吐温系表面活性剂的
CBS
溶液
。3.
根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述样品制备步骤中，包括将提取液与所述含乳产品混合后加热的操作步骤
。4.
根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述酶联免疫检测步骤中，包括如下操作步骤：获得抗原抗体复合物的步骤，其中，将所述成分
(A)
加入到包被有捕获抗体的酶标板上以得到所述抗原抗体复合物，所述捕获抗体为牛
β
‑
乳球蛋白的兔抗免疫血清；检测抗体检测的步骤，其中，使用检测抗体与所述原抗体复合物进行反应；所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的牛
β
‑
乳球蛋白的兔多克隆抗体；显色和光学检测的步骤，其中，所述光学检测采用吸光光度的检测
。5.
根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述酶联免疫检测步骤中，包括如下操作步骤：
(1)
包被：使用
CBS
溶液稀释捕获抗体，加入至酶标板中，包被酶标板；所述捕获抗体为牛
β
‑
乳球蛋白的兔抗免疫血清；
(2)
封闭：弃去酶标板中的液体，使用
PBST
溶液洗涤酶标板，加入封闭液，封闭酶标板；
(3)
抗原抗体反应：弃去封闭液，使用
PBST
溶液洗涤酶标板，加入所述成分
(A)
，进行抗原抗体反应，获得抗原抗体复合物；
(4)
抗原抗体复合物与检测抗体反应：弃去酶标板中的液体，使用
PBST
溶液洗涤酶标板，加入利用抗体稀释工作液稀释的检测抗体，所述抗原抗体复合物与检测抗体进行反应；所述检测抗体为辣根过氧化物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王象欣，解庆刚，崔东影，张影，陆思宇，高鹏，蒋士龙，张永久，蔡方良，冷友斌，
申请(专利权)人：飞鹤哈尔滨乳品有限公司飞鹤镇赉乳品有限公司飞鹤甘南乳品有限公司飞鹤龙江乳品有限公司，
类型：发明
国别省市：