【技术实现步骤摘要】
iPS细胞来源的细胞外囊泡在治疗银屑病中的应用
[0001]本专利技术涉及生物
,具体为一种iPS细胞来源的细胞外囊泡在治疗银屑病中的应用。
技术介绍
[0002]银屑病俗称牛皮癣,是一种常见的慢性、复发性炎性皮肤病,具有特征性皮肤病变。银屑病的皮损从开始到最终消退大致可分为3个时期:进行期、静止期和消退期。目前,银屑病的治疗主要采用局部疗法、光疗、维甲酸、免疫抑制药物、免疫调节剂、生物制剂和中药等。然而,由于银屑病的常规治疗效果仍不理想,因此迫切需要更新的方法。
[0003]细胞疗法已显示出对治疗银屑病有希望的效果。最近的研究表明,细胞疗法的治疗益处与其细胞外囊泡密切相关。细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是可由几乎所有细胞释放的一类脂质双层包裹的颗粒,可作为载体向邻近或远处目标细胞运输生物活性物质,通过这种细胞间通讯方式调控广泛的生理或病理反应。EVs是一个总称,涵盖了通过多种机制产生的异质膜囊泡群。两个主要的EVs亚群包括微泡(MV)和外泌体(EXO)。近年的研究表明,EVs穿梭在多种类型的细胞中,参与了银屑病、系统性红斑狼疮、特应性皮炎、大疱性类天疱疮等慢性炎症性皮肤病和自身免疫性疾病的发病过程。
[0004]几乎所有类型的细胞都可以分泌EVs,同时EVs也广泛存在于体液中,包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等,然而用于临床试验和治疗的EVs存在几大问题:(1)EVs需求量巨大;(2)需要合适的供体并可能会对供体带来损伤;(3)不同来源的EVs可能存在 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种iPS细胞来源的细胞外囊泡在治疗银屑病中的应用,其特征在于:包括如下操作:S1、iPSC
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EVs的制备;S2、iPSC
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EVs乳剂的配制;S3、iPSC
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EVs的荧光标记;S4、咪喹莫特IMQ诱导的银屑病小鼠模型;S5、IL
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17、IL
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23和C5b
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9测量分析;S6、人体皮肤渗透试验。2.根据权利要求1所述的iPS细胞来源的细胞外囊泡在治疗银屑病中的应用,其特征在于:所述S1中研究局部应用的iPSC
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EVs是否可以减轻银屑病相关的炎症;iPSC
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EVs通过连续超速离心从48小时孵育的iPSC条件培养基中分离;分离的iPSC
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EVs通过透射电子显微镜、蛋白质印迹分析和动态光散射等进行表征鉴定。3.根据权利要求1所述的iPS细胞来源的细胞外囊泡在治疗银屑病中的应用,其特征在于:所述S2中iPSC
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EVs的水包油乳剂由下表中的成分组成;针对皮肤渗透率进行研究,将iPSC
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EVs用Alexa Fluor 488抗体标记试剂盒进行荧光标记,使用前,通过将混合物置于由管道连接的双注射器装置中乳化混合物,并通过交替推动注射器柱塞20次使一个注射器中的内容物以交替方式推入另一个注射器中进行混合。4.根据权利要求1所述的iPS细胞来源的细胞外囊泡在治疗银屑病中的应用,其特征在于:所述S3中iPSC
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EVs用Alexa Fluor 488胺反应性荧光探针标记;将0.8mL PBS或0.8mL PBS中的1mg iPSC
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EVs与1mg Alexa Fluor488荧光探针在体积为1mL的0.1M碳酸氢钠缓冲液中孵育1小时,同时轻轻摇动并避光;通过将两种混合物通过Bio
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GelP30聚丙烯酰胺凝胶柱,去除过量未反应的探针;分别代表标记iPSC
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EVs和标记对照的相应滤液通过0.22μm过滤器进行无菌过滤;标记的iPSC
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EVs或标记对照,用于如下所述的水包油乳剂中;用于外显率的乳剂的最终iPSC
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EVs浓度为0μg/ml iPSC
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【专利技术属性】
技术研发人员:蔡艳,黎飞,孙智勇,王燕,
申请(专利权)人:珠海市乐维品牌管理有限公司,
类型:发明
国别省市:
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