一种关于脑脊液中肿瘤细胞制造技术

本发明专利技术公开的一种关于脑脊液中肿瘤细胞

【技术实现步骤摘要】
一种关于脑脊液中肿瘤细胞HER2抗原表达生物信息的识别方法


[0001]本专利技术涉及医学分子生物学
，特别涉及一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法
。

技术介绍

[0002]乳腺癌患者的生存期的不断延长，越来越多抗
HER2
靶向药物的应用使得
HER2
阳性乳腺癌患者的生存期延长最为明显，该类型好发脑转移，脑转移治疗失败后容易进展至脑膜转移，因此
HER2
阳性乳腺癌患者的脑膜转移发病率逐年升高
。
[0003]乳腺癌脑膜转移确诊的金标准是脑脊液中找到肿瘤细胞，在此基础上进一步明确脑脊液中肿瘤细胞是否表达
HER2
抗原至关重要，可以为临床选择药物提供重要信息
。
由于乳腺癌异质性很强，例如：
(1)HER2
在乳腺癌原发灶中强表达，而在脑脊液的肿瘤细胞中可能低表达或不表达；
(2)HER2
在乳腺癌原发灶中低表达，而在脑脊液的肿瘤细胞中不表达；
(2)HER2
在乳腺癌原发灶中不表达，而在脑脊液的肿瘤细胞中有表达
。
若
HER2
表达则有机会使用抗
HER2
靶向药物，
HER2
强表达
、
低表达和不表达的灵敏度依次下降，因此，脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达的生物信息能帮助在选择抗
HER2
靶向药物等数据应用上提供参考依据
。
[0004]随着检测技术的发展，
HER2
的表达由传统的阳性阴性二分类演变为近年来衍生
HER2
低表达的新概念，在乳腺癌中，约
45
％～
55
％呈现
HER2
低表达状态，随着新型抗体偶联药物
T
‑
DXd
在
HER
‑2低表达乳腺癌患者中被确认有效，此类药物已然成为
HER
‑2低表达晚期乳腺癌患者新的选择，目前国内药物临床应用可及，并且很多类似药物正在我国研发和进行临床研究，未来可选择的药物越来越多
。
[0005]对于
HER2
检测来说，组织样本是比较理想的类型，既往的风险识别标准
。
但是，临床仍有未被满足的需求，例如对于脑膜转移癌患者而言，脑膜组织样本活检在临床上因创伤大和阳性率低几乎不被使用，而腰椎穿刺属于临床常用的一种检测手段，每次可获取
5ml
的脑脊液标本用于检测有无肿瘤细胞，而脑脊液中肿瘤细胞属于细胞学检测而并非传统的组织检测，受限于脑脊液的每次送检量
5ml
和脑脊液中从脑膜上脱落的肿瘤细胞数有限，考虑传统的方法往往只能够检测有无肿瘤细胞和粗粗的半定量
(
大量
、
少量或偶见
)
，无法获取更多信息
。
如何提高乳腺癌脑膜转移患者脑脊液中的肿瘤细胞收集效率及对
HER2
检测定性和半定量至关重要
。
[0006]乳腺癌患者的脑脊液使用的细胞离心涂片收集器已经申请了技术专利
(
申请号
2019211607497
，申请日期
2019
‑
07
‑
23
，公布
/
公告号
CN210953565U
，公布
/
公告日期
2020
‑
07
‑
07)
，该细胞离心涂片收集器可以用于脑脊液中的肿瘤细胞收集，并且较传统方法能收集到更多肿瘤细胞，为
HER2
抗原免疫组化检测提供足够的肿瘤细胞
。
[0007]本专利技术在此基础上收集到脑脊液足够的肿瘤细胞，只要用新的方法检测到脑脊液中的肿瘤细胞膜上存在
HER2
抗原的免疫组化表达，并进一步用新的方法量化
HER2
抗原表
达，通过解决关于乳腺癌脑膜转移
HER2
是否表达和表达强度的迫切需求，为后续的数据使用提供参考依据
。

技术实现思路

[0008]为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术的目的在于提供一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法
。
以克服现有技术存在的脑脊液样本取材量受限，肿瘤细胞收集数量有限
(
不像乳腺癌组织中的肿瘤细胞那么大量和集中
)
，乳腺癌
HER2
表达存在异质性的问题，提供一种可以量化的关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法
。
[0009]为了实现本专利技术的目的，所采用的技术方案是：
[0010]一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法，包括如下步骤：
[0011]第一步，采用细胞离心涂片收集器乳腺癌患者若干脑脊液样本以获取其中潜在的肿瘤细胞样本；
[0012]第二步，将存在于所述乳腺癌患者脑脊液样本中的肿瘤细胞样本离心制作涂片
；
[0013]第三步，将涂片固定后的肿瘤细胞样本进行
HER2
免疫组化检测；
[0014]第四步，将完成所述第三步免疫组化检测后的肿瘤细胞样本进行数据积分来进行关于
HER2
表达的生物信息的确认和量化，所述量化为计算不同染色程度的肿瘤细胞并分级后积分，积分值的高低与
HER2
表达的生物信息的强弱呈正相关
。
[0015]在本专利技术的一个优选实施例中，所述细胞离心涂片收集器为公告号
CN210953565U
所提及的细胞离心涂片收集器
。
[0016]在本专利技术的一个优选实施例中，所述离心制作涂片具体为将所述乳腺癌患者脑脊液样本进行低速离心5‑
15
分钟后去上清后得沉淀物制作待固定的涂片后进行二次低速离心后固定以形成固定涂片
。
[0017]在本专利技术的一个优选实施例中，所述
HER2
免疫组化检测具体为如下步骤：
[0018]步骤一，采用预冷的有机溶剂对固定涂片进行固定
10
‑
20
分钟后采用
PBS
缓冲液进行若干次涂片清洗；
[0019]步骤二，清洗后的涂片中加入一抗，所述一抗为兔抗人
HER
‑
2/neu
免疫组化单克隆抗体；其后进行模拟人体温度的孵育；
[0020]步骤三，完成孵育后再进行若干次涂片清洗后进行
DAB
显色后采用复染剂进行复染后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，采用细胞离心涂片收集器乳腺癌患者若干脑脊液样本以获取其中潜在的肿瘤细胞样本；第二步，将存在于所述乳腺癌患者脑脊液样本中的肿瘤细胞样本离心制作涂片；第三步，将涂片固定后的肿瘤细胞样本立即进行
HER2
免疫组化检测；第四步，将完成所述第三步免疫组化检测后的肿瘤细胞样本进行数据积分来进行关于
HER2
表达的生物信息的确认和量化，所述量化为计算不同染色程度的肿瘤细胞并分级后积分，积分值的高低与
HER2
表达的生物信息的强弱呈正相关
。2.
如权利要求1所述的一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法，其特征在于，所述细胞离心涂片收集器为公告号
CN210953565U
所提及的细胞离心涂片收集器
。3.
如权利要求1所述的一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法，其特征在于，所述离心制作涂片具体为将所述乳腺癌患者脑脊液样本进行低速离心5‑
15
分钟后去上清后得沉淀物制作待固定的涂片后进行二次低速离心后固定以形成固定涂片
。4.
如权利要求1所述的一种关于脑脊液中肿瘤细胞
HER2
抗原表达生物信息的识别方法，其特征在于，所述
HER2
免疫组化检测具体为如下步骤：步骤一，采用预冷的有机溶剂对涂片进行固定
10
‑
20
分钟后采用
PBS
缓冲液进行若干次涂片清洗；步骤二，清洗后的涂片中加入一抗，所述一抗为兔抗人
HER
‑
2/neu
免疫组化单克隆抗体；其后进行模拟人体温度的孵育；步骤三，完成孵育后再进行若干次涂片清洗后进行
DAB
显色后...

【专利技术属性】
技术研发人员：初钊辉，陈锟，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：