本发明专利技术涉及一种用于检测抗
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测抗IFN
‑
γ
自身抗体的试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及生物技术和医学
,特别是涉及一种用于检测抗
IFN
‑
γ
自身抗体的试剂盒及其应用
。
技术介绍
[0002]抗
IFN
‑
γ
自身抗体综合征
(AIGA)
又称为成人起病免疫缺陷综合征,是由具有中和效应的抗
IFN
‑
γ
自身抗体所引起的一种新发免疫缺陷病
。IFN
‑
γ
在机体发挥防御胞内病原体的作用,极为重要;而抗
IFN
‑
γ
自身抗体通过中和及阻断
IFN
‑
γ
/IL
‑
12
轴,增加宿主对机会病原体的易感性
。
抗
IFN
‑
γ
自身抗体综合征相关感染病原谱涉及
41
种病原体,其中以非结核分枝杆菌或马尔尼菲篮状菌合并或不合并其他机会性感染最为常见
。
其在马尔尼菲篮状菌
、
播散型非结核分枝杆菌及曲霉患者中阳性率均超过半数以上
。
同时,抗
IFN
‑
γ
自身抗体是双重或多重感染的独立危险因素,也与播散感染密切相关,也可作为评估预后及是否复发感染的指标
。
[0003]然而,目前检测及诊断抗
IFN
‑
γ
自身抗体方法较少,已公布的检测方式仅有流式细胞术
、Western Blot、ELISA
三种方法,其中通过流式细胞术
、Western Blot
方法对抗
IFN
‑
γ
自身抗体进行检测,比较繁琐且耗时较多
。
并且通过研究分析过往
731
例抗
IFN
‑
γ
自身抗体综合征患者中,仅有
50
例患者提供确切检测数值,其中仅
11
例提供参考值
。
值得关注的是,所有检测中仅3例患者提供的检测结果为绝对定量,其余均为相对定量
(
比值比
、OD
值
)
或定性
。
同时,目前已有的可对抗
IFN
‑
γ
自身抗体进行定量检测的试剂盒,基本都存在稳定性差
、
可重复性差
、
或在使用过程中时常出现标曲呈现情况较好但临床样品检测效果不佳的情况,且上述试剂盒的检测结果大多无确定的阳性界限值,只能用于检测抗
IFN
‑
γ
自身抗体滴度较高的患者,而抗体滴度在临界值上下的患者容易误诊漏诊,各种检测方法检测结果差异较大,缺乏统一的标准,无法达到准确检测
AIGA
滴度的目的,从而无法早期干预达到较好治疗效果
。
技术实现思路
[0004]针对上述问题,本专利技术提供一种用于检测抗
IFN
‑
γ
自身抗体的试剂盒,该试剂盒通过采用由抗
IFN
‑
γ
自身抗体免疫缺陷疾病阳性样本中分离得到抗
IFN
‑
γ
自身抗体作为标准品,使标准品与待测样本中的抗
IFN
‑
γ
自身抗体高度同源,使检测结果更加准确
、
可靠,为早期干预提供判断依据
。
[0005]为了达到上述目的,本专利技术提供了一种用于检测抗
IFN
‑
γ
自身抗体的试剂盒,包括标准品,所述标准品包括抗
IFN
‑
γ
自身抗体,所述抗
IFN
‑
γ
自身抗体由抗
IFN
‑
γ
自身抗体免疫缺陷疾病阳性样本中分离得到
。
[0006]本专利技术人在对抗
IFN
‑
γ
自身抗体进行研究的过程中,发现目前市面上已有的试剂盒,之所以无法得到绝对定量的结果,并且出现稳定性差
、
可重复性差等问题,有部分原因和试剂盒中采用的标准品有关,目前已有试剂盒产品多采用重组抗
IFN
‑
γ
自身抗体作为标
准品,其与待测样本中的抗
IFN
‑
γ
自身抗体同源性较低,因此,本专利技术人提出将由
IFN
‑
γ
自身抗体免疫缺陷疾病阳性样本中分离得到抗
IFN
‑
γ
自身抗体作为标准品,进行曲线拟合,因上述标准品与待测样本中的抗
IFN
‑
γ
自身抗体高度同源,且与包被在固相载体上的抗原之间的结合能力相似,故试剂盒的检测结果会更加准确
、
可靠,能够为早期干预提供判断依据
。
[0007]在其中一个实施例中,所述试剂盒还包括抗原,所述抗原为
IFN
‑
γ
。
[0008]在其中一个实施例中,所述抗原固定于固相载体上
。
[0009]在其中一个实施例中,所述试剂盒包括:显色剂,洗涤剂,终止剂,所述标准品,和所述固相载体
。
[0010]在其中一个实施例中,所述试剂盒的最低检出限水平为
0.78ng/mL。
[0011]本专利技术人通过将实施例中制备得到的标准品进行不同程度的稀释后,对抗
IFN
‑
γ
自身抗体免疫缺陷疾病阳性样本和阴性样本进行检测,发现当浓度稀释为
0.39ng/mL
时,则不再能检出抗
IFN
‑
γ
自身抗体,说明上述试剂盒的最低检出限水平为
0.78ng/mL。
同时,当上述试剂盒为
ELISA
检测试剂盒时,
OD
值不能超过4,当
OD
值大于4时,存在待测样本中抗
IFN
‑
γ
自身抗体的实际浓度过大,酶标仪无法检测的可能性,则无法判断其实际浓度
。
[0012]本专利技术还提供了一种非诊断目的的抗
IFN
‑
γ
自身抗体的检测方法,采用所述试剂盒进行检测,该检测方法包括以下步骤:将待测样本和所述抗原混合,孵育,检测
OD
值,以所述标准品构建标准曲线,根据所述
OD
值
、
所述标准曲线,计算得到待测样本中抗
IFN
‑
γ
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种用于检测抗
IFN
‑
γ
自身抗体的试剂盒,其特征在于,包括标准品,所述标准品包括抗
IFN
‑
γ
自身抗体,所述抗
IFN
‑
γ
自身抗体由抗
IFN
‑
γ
自身抗体免疫缺陷疾病阳性样本中分离得到
。2.
根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括抗原,所述抗原为
IFN
‑
γ
。3.
根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述抗原固定于固相载体上
。4.
根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:显色剂,洗涤剂,终止剂,所述标准品,和所述固相载体
。5.
【专利技术属性】
技术研发人员:叶枫,李征途,王浩如,邱晔,李少强,占扬清,王彦,黎远祥,
申请(专利权)人:广州呼吸健康研究院,
类型:发明
国别省市:
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