一种血浆中氟比洛芬的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种血浆中氟比洛芬的检测方法，包括：采用氟比洛芬标准曲线工作液加入空白血浆配制成标准曲线血浆样品；采用同位素内标配制内标工作溶液

【技术实现步骤摘要】
一种血浆中氟比洛芬的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，具体涉及一种采用
LC
‑
MS
检测血浆中氟比洛芬的方法
。

技术介绍

[0002]氟比洛芬是由英国布兹
(Boots)
公司开发的非甾体类抗炎药
(NSAIDS)
，其作用机制主要为非选择性地抑制环氧合酶，阻断前列腺素的生物合成，从而发挥药效
。
氟比洛芬已被广泛地用于炎症和疼痛的治疗
。
[0003]目前，对血浆样品的预处理方法主要有蛋白沉淀法
、
液液萃取法和固相萃取法
。
现有的氟比洛芬血药浓度的检测方法中，采用蛋白沉淀法预处理，检测限较高，线性范围为
0.05
～
50
μ
g/mL(LC
‑
MS/MS
法测定人血清中氟比洛芬含量
[J].
药物分析杂志，
2008
，
28(08)
：
1248
‑
1251)
；采用液液萃取法预处理，加入含有盐酸的甲基叔丁基醚溶液进行提取，分离有有机层，氮吹干燥后使用流动相复溶，检测限降低至
2.0
～
1000ng/mL
，但是预处理步骤复杂且耗时
(
对映体选择性
HPLC
‑
MS
用于氟比洛芬贴剂药物动力学研究
[J].r/>中国药学杂志，
2013
，
48(13)
：
1099
‑
1103)。
[0004]现有的检测方法存在检测限高
、
预处理效率低的问题，并不能很好的满足临床开展氟比洛芬血药浓度的检测
、
药物动力学及生物利用度的研究需求
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种血浆中氟比洛芬的检测方法，该方法采用蛋白沉淀法预处理血浆样品，并采用同位素内标作为校正，通过
LC
‑
MS/MS
法进行检测
。
本专利技术血浆样品的预处理方法简单便捷，同时灵敏度高
。
本专利技术方法的检测下限能满足较小给药量时生物体内的含量测定要求，检测过程中信噪比符合标准要求，无杂质峰的干扰，测定的药物的含量准确度高
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案具体如下所述：
[0007]一种血浆中氟比洛芬的检测方法，该方法包括如下步骤：
[0008]S1
：采用氟比洛芬对照品配制不同浓度的标准曲线工作溶液；向标准曲线工作液加入空白血浆配制成标准曲线血浆样品；采用同位素内标配制内标工作溶液；
[0009]S2
：血浆样品预处理：
[0010]取待测血浆样品，加入稀释剂
、
内标工作溶液；混匀后再加入沉淀剂，涡旋，离心，取上层清液用于
LC
‑
MS/MS
检测；
[0011]S3
：氟比洛芬的定量计算：
[0012]标准曲线血浆样品经预处理后，进行
LC
‑
MS/MS
检测，
(
氟比洛芬峰面积与内标峰面积比
)
对
(
标准曲线中氟比洛芬的理论浓度与内标浓度比
)
进行线性最小二乘法回归计算，得到回归方程，进而计算样品中氟比洛芬的实测浓度
。
[0013]进一步地，步骤
S1
中，所述标准曲线工作液的配制：称取氟比洛芬对照品，加入溶
剂，最终配制成的氟比洛芬浓度为
1.000mg/mL
的标准对照品储备液
。
取体积的标准对照品储备液，用稀释剂逐级稀释得到多个浓度的标准曲线工作溶液
。
[0014]进一步地，步骤
S1
中，所述标准曲线工作溶液的浓度范围为
10.00
～
4000ng/mL。
优选地，标准曲线工作液各浓度为
4000、3200、1600、800.0、400.0、160.0、20.00、10.00ng/mL。
[0015]进一步地，步骤
S1
中，所述标准曲线血浆样品的浓度范围为
0.500
～
200ng/mL。
优选地，准曲线血浆样品各浓度为
200、160.0、80.00、40.00、20.00、8.000、1.000、0.500ng/mL。
[0016]进一步地，步骤
S1
中，所述内标工作溶液的配制：称取同位素内标对照品，加入溶剂，摇匀，即得内标储备液，置于
‑
20℃
条件下保存
。
取内标储备液，加入稀释剂，定容稀释得到内标工作溶液
。
[0017]进一步地，所述溶剂是甲醇；所述稀释剂是体积比为
1∶1
的甲醇
‑
水溶液
。
[0018]进一步地，步骤
S1
中，所述同位素内标是氟比洛芬
‑
13
C
‑
d3或氟比洛芬
‑
d3。
进一步地，步骤
S1
中所述内标溶液浓度为
50
～
100ng/mL。
[0019]进一步地，步骤
S2
中，所述待测血浆样品与内标溶液的的体积比为2：
1。
优选地，所述待测血浆样品为
100
μ
L
，所述内标工作溶液为
50
μ
L。
进一步地，步骤
S2
中，所述沉淀剂为甲醇
。
进一步地，所述沉淀剂的体积为
300
μ
L。
[0020]进一步地，步骤
S2
中，所述涡旋的时间为3～
10min。
进一步地，步骤
S2
中，所述离心的条件为
4℃、2450g、10min。
[0021]进一步地，步骤
S2
中，所述
LC
‑
MS/MS
检测的液相条件：色谱柱：
GL Sciences InertSustain C18 3
μ
m 3.0
×
100mm
；预柱：
Security GuardTM Cartridges C18 4
×
3.0mm
；梯度洗脱；流速：
0.4
～
0.6mL/min
；进样量：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种血浆中氟比洛芬的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1
：采用氟比洛芬对照品配制不同浓度的标准曲线工作溶液；向标准曲线工作液加入空白血浆配制成标准曲线血浆样品；采用同位素内标配制内标工作溶液；
S2
：血浆样品预处理：取待测血浆样品，加入稀释剂
、
内标工作溶液；混匀后再加入沉淀剂，涡旋，离心，取上层清液用于
LC
‑
MS/MS
检测；所述
LC
‑
MS/MS
检测的液相条件中，流动相选自以下组别之一：组别一：流动相
A
：
2mM
乙酸铵水溶液；流动相
B
：乙腈；组别二：流动相
A
：
0.1
％甲酸水；流动相
B
：体积比为
40∶60
的甲醇
‑
乙腈混合溶液；组别三：流动相
A
：
2mM
乙酸铵水溶液；流动相
B
：乙腈；
S3
：氟比洛芬的定量计算：标准曲线血浆样品经预处理后，进行
LC
‑
MS/MS
检测，
(
氟比洛芬峰面积与内标峰面积比
)
对
(
标准曲线中氟比洛芬的理论浓度与内标浓度比
)
进行线性最小二乘法回归计算，得到回归方程，进而计算样品中氟比洛芬的实测浓度
。2.
根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤
S1
中，所述同位素内标为氟比洛芬
‑
13
C
‑
d3或氟比洛芬
‑
d3。3.
根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤
S2
中，所述
LC
‑
MS/MS
检测的液相条件：色谱柱：
GL Sciences InertSustain C18 3
μ
m 3.0
×
100mm
；预柱：
Security GuardTM Cartridges C18 4
×
3.0mm
；流动相：流动相
A
：
2mM
乙酸铵水溶液；流动相
B
：乙腈；梯度洗脱；流速：
0.4
～
0.6mL/min
；进样量：
20
μ
L
；柱温：
40℃
；洗针液：体积比为
1∶1
的甲醇
‑
水溶液；所述梯度洗脱的程序为：0～
2.2min
，流动相
A
：流动相
B
＝
70
％：
30
％；
2.2
～
4.01min
，流动相
A
：流动相
B
＝
10
％：
90
％；
4.01
～
4.8min
，流动相
A
：流动相
B
＝
70
％：
30
％；或0～
2.2min
，流动相
A
：流动相
B
＝
75
％：
25
％；
2.2
～
4.01min
，流动相
A
：流动相
B
＝
10
％：
90
％；
4.01
～
4.8min
，流动相
A
：流动相
B
＝
75
％：
25
％
。4.
根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤
S2
中，
LC
‑
MS/MS
检测的质谱条件：电喷雾离子化源，多反应监测模式，负离子模式扫描；检测离子对设置如下：
FBLF
：
Q1 Mass
：
243.2Da
，
Q3 Mass
：
199.1Da
，
Dwell
：
200msec<...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹小丽，廖志正，袁小艳，戴智，
申请(专利权)人：湖南慧泽生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：