一种用于侏儒蛤遗传性别鉴定的分子标记及方法技术

本发明专利技术提供一种用于侏儒蛤遗传性别鉴定的分子标记，所述的分子标记包含有核苷酸序列为

【技术实现步骤摘要】
一种用于侏儒蛤遗传性别鉴定的分子标记及方法


[0001]本专利技术属于贝类性别鉴定
，具体涉及一种用于侏儒蛤遗传性别鉴定的分子标记及方法
。

技术介绍

[0002]侏儒蛤
(Mulinia lateralis)
，隶属于软体动物门
(Mollusca)、
双壳纲
(Bivalvia)、
异齿亚纲
(Heteroconchia)、
帘蛤目
(Venerida)、
蛤蜊总科
(Mactroidea)、
蛤蜊科
(Mactridae)、
骡蛤属
(Mulinia)
，是一种小型海水贝类，主要分布于西大西洋和加勒比海区域
。
因具有世代周期短
、
繁殖力强
、
易于实验室养殖等优点，被认为是贝类遗传研究的理想模式动物
。
侏儒蛤为雌雄异体，成体侏儒蛤可通过显微镜观察游离的配子来判定其性别：成熟卵子呈橘色或褐色的卵球形，成熟精子呈白色密集的小颗粒
。
处于性腺分化早期的侏儒蛤，无法通过镜检配子进行性别鉴定，必须借助性腺组织学切片
、
性别分化关键基因表达分析等手段
。
而对于性腺尚未分化的个体，以上方法均无法判定其性别，亟需一种高效
、
准确
、
便捷的侏儒蛤遗传性别鉴定方法
。
[0003]DNA
分子标记是一种性别鉴定的重要工具，具有不依赖组织和发育时期的特点，并且操作简单
、
成本低廉
、
结果准确，已在性别鉴定领域得到广泛应用
。
开发侏儒蛤的性别特异分子标记，不仅有利于贝类模式平台的建立，也将推动贝类性染色体演化的研究
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种用于侏儒蛤遗传性别鉴定的分子标记及方法，所提供的分子标记能够快速准确的鉴定侏儒蛤遗传性别
。
[0005]本专利技术首先提供一种侏儒蛤雄性特异性分子标记，所述的分子标记包含有：
[0006]1)
核苷酸序列为
SEQ ID NO:1
的分子标记；
[0007]2)
序列与
SEQ ID NO:1
互补的分子标记；
[0008]本专利技术另一个方面还提供一种检测上述侏儒蛤雄性特异性分子标记的引物对，其中一种引物对，其上游引物的序列为
SEQ ID NO:2
，下游引物的序列为
SEQ ID NO:3。
[0009]本专利技术再一个方面还提供一种侏儒蛤遗传性别鉴定的方法，所述的方法是通过检测上述的分子标记存在与否进行性别鉴定；
[0010]所述的方法，其中使用上游引物的序列为
SEQ ID NO:2
，下游引物的序列为
SEQ ID NO:3
的引物对进行检测，其中雄性个体中扩增出长度为
703bp
的片段；
[0011]更进一步的，所述的方法，还包含检测侏儒蛤雌雄个体都含有的标记；
[0012]所述的侏儒蛤雌雄个体都含有的标记，其一种核苷酸序列为
SEQ ID NO:4
；
[0013]用于检测上述核苷酸序列为
SEQ ID NO:4
的分子标记的引物对，其上游引物的序列为
SEQ ID NO:5
，下游引物的序列为
SEQ ID NO:6
；其扩增产物的片段为
436bp。
[0014]本专利技术还提供一种用于侏儒蛤遗传性别鉴定的分子检测试剂盒，包含用于检测雄性特异标记的引物对和用于检测雌雄共有分子标记的引物对
。
[0015]本专利技术通过采集侏儒蛤鳃丝
DNA
实现侏儒蛤遗传性别的鉴定，将雄性特异标记和雌雄共有分子标记联合应用，对侏儒蛤性别鉴定准确率达
100
％
。
与组织学鉴定方法相比，本专利技术不受特定组织和性腺发育程度的限制，并且操作简便快捷，结果稳定准确，对于侏儒蛤贝类模式平台的建立具有重要意义
。
附图说明
[0016]图1为显微镜检侏儒蛤成熟配子结果示意图，其中图
1A
为成熟卵子结果示意图；图
1B
为成熟精子结果示意图
。
[0017]图2为性成熟期已知性别侏儒蛤的遗传性别鉴定结果示意图，其中1‑
12
号为雌性个体，
13
‑
24
号为雄性个体，
M
为
100bp DNA ladder。
[0018]图3为性别分化初期的侏儒蛤性腺组织学切片结果示意图，其中图
3A
为未分化性腺，图
3B
为分化初期卵巢，图
3C
为分化初期精巢，
Fc
为滤泡细胞；
Ig
为性原细胞；
Og
为卵原细胞；
Oc
为卵母细胞；
Ct
为结缔组织；
It
为肠道；
Cc
为纤毛细胞；
Sg
为精原细胞；
Sc
为精母细胞
。
[0019]图4为性别分化初期的侏儒蛤遗传性别鉴定结果示意图，其中1‑
23
号为性别分化初期个体编号，
M
为
100bp DNA ladder。
具体实施方式
[0020]下面将结合实施例和附图对本专利技术进行详细的描述
。
[0021]实施例1：侏儒蛤性别特异分子标记的获得
[0022]选取雌雄各
15
个个体，取其鳃丝，采用传统酚氯仿法获取其基因组
DNA
，随后通过
Illumina NovaSeq 6000
进行重测序，测序深度为
20
×
，将处理得到的
clean reads
与基因组比对后，筛选到一段雄性特异覆盖区域，在该区域内获得一对雄性特异片段，该片段序列如
SEQ ID NO:1
所示
。
[0023]catcagaaatgtgtgagggtcgcaggcgaatttgttgtaaaatgatgacgttatgatgatgacgttatgtaatgatgacgatcgtgccccgctgagcttgtatcatacttctttatttgtattttttgtaaccttcacaagtttattgtataagaattattggtttgttgattggatattatttaattatcgtgctatgtaaaatttagttcatttattccttttatactttttatataacacaataatacgg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种侏儒蛤雄性特异性分子标记，其特征在于，所述的分子标记包含有：
1)
核苷酸序列为
SEQ ID NO:1
的分子标记；
2)
序列与
SEQ ID NO:1
互补的分子标记
。2.
检测权利要求1所述的分子标记的引物对在制备用于鉴定侏儒蛤遗传性别的分子检测试剂盒中的应用
。3.
如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的引物对，其上游引物的序列为
SEQ ID NO:2
，下游引物的序列为
SEQ ID NO:3。4.
一种侏儒蛤遗传性别鉴定的方法，其特征在于，所述的方法是通过检测权利要求1所述的分子标记存在与否进行性别鉴定
。5.
如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法，是使用上游引物序列为
SEQ ID NO:2
，下游引物的序列为
SEQ ID NO:3
的引物对进行检测，其中雄性个体中扩增出长度...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玲玲，李国庆，李亚娟，杨亚信，王师，包振民，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：