一种成活率高的自体脂肪移植方法技术

本发明专利技术涉及脂肪移植技术领域，尤其涉及一种成活率高的自体脂肪移植方法。所述方案包括以下步骤：1）提取脂肪干细胞；2）用血管内皮细胞培养得到的上清液处理脂肪干细胞；3）将步骤2）中经处理的脂肪干细胞与颗粒脂肪混合，进行脂肪移植。所述上清液是血管内皮细胞在低血清、低氧和低一氧化氮的条件下培养得到的。本发明专利技术制备的胁迫状态下内皮细胞上清液对于OGD条件下的脂肪干细胞的活性具有良好的保持作用；可以提高移植物最终的体积和质量保留率；可以抑制脂肪移植物凋亡；显著提高移植物新血管生成的能力；促进脂肪移植物的成活率。促进脂肪移植物的成活率。

【技术实现步骤摘要】

技术实现思路

[0007]基于此，有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种成活率高的自体脂肪移植方法
。
[0008]技术方案：为实现上述目的，我们提出了一种利用血管内皮细胞的上清添加到脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物中脂肪细胞存活率，提高了脂肪体积保留率
。
[0009]在本专利技术的一个实施方案中，提供了一种成活率高的自体脂肪移植方法，其包括以下步骤：1）提取脂肪干细胞；2）用血管内皮细胞培养得到的上清液处理脂肪干细胞；3）将步骤2）中经处理的脂肪干细胞与颗粒脂肪混合，进行脂肪移植
。
[0010]进一步地，所述上清液是血管内皮细胞先在常规条件下培养一段时间，然后在胁迫状态下培养一段时间后得到
。
[0011]进一步地，所述胁迫状态是低血清
、
低氧和低一氧化氮的条件
。
[0012]进一步地，所述血管内皮细胞是
CRL
‑
1730。
[0013]进一步地，所述上清液具体的制备步骤为：将
CRL
‑
1730
常规培养于含
10%
胎牛血清的
RPMI
‑
1640
培养液中培养
1d
，调整培养条件：
1%
胎牛血清，氧气
5%
，且培养液中加入
40ml
浓度为
10mol/L
的
NO
供体，培养
6h
，消化
、
离心
、
取上清液
。
[0014]进一步地，所述脂肪干细胞为
P3
代
。
[0015]进一步地，所述脂肪干细胞与颗粒脂肪混合的比例为1：
19。
[0016]在本专利技术另一较佳的实施方案中，提供了一种血管内皮细胞培养得到的上清液在制备提高脂肪移植成活率的制剂中的应用
。
[0017]进一步地，所述血管内皮细胞培养得到的上清液是是血管内皮细胞先在常规条件下培养一段时间，然后在胁迫状态下培养一段时间后得到
。
[0018]进一步地，所述胁迫状态是低血清
、
低氧和低一氧化氮的条件
。
[0019]进一步地，所述血管内皮细胞是
CRL
‑
1730。
[0020]有益效果：与现有技术相比，本专利技术制备的胁迫状态下内皮细胞上清液对于
OGD
条件下的脂肪干细胞的活性具有良好的保持作用；可以提高移植物最终的体积和质量保留率；可以抑制脂肪移植物凋亡；显著提高移植物新血管生成的能力；促进脂肪移植物的成活率
。
[0021]以下将结合附图对本专利技术的构思
、
具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的
、
特征和效果
。
附图说明
[0022]图1是本专利技术提取得到的脂肪干细胞的流式细胞术检测细胞表面标志物
CD44、CD73、CD90、CD105、CD45
的结果，图
1A
‑
D
为
CD44、CD73、CD90
和
CD105
阳性表达，图
1E
为
CD45
阴性表达；图2是脂肪干细胞在常规培养状态和
OGD
培养状态下经内皮细胞上清液预处理（
ES
）
、
胁迫状态下内皮细胞上清液组预处理（
DES
）以及等体积生理盐水处理（
Sal
）后的细胞活性图，图
2A
为常规培养状态，图
2B
为
OGD
培养状态；
图3是本专利技术移植物
1m
和
3m
的体积及质量保留率结果，图
3A
为体积保留率，图
3B
为质量保留率；图4是体内实验中本专利技术移植物在
1m
和
3mBAX
基因的
RT
‑
PCR
结果；图5是本专利技术移植物在
1m
和
3m
的
Caspase
‑3蛋白的
Western Blot
及灰度分析结果，图
5A
为
Western Blot
结果，图
5B
为灰度分析结果；图6是体内实验中本专利技术移植物在
1m
和
3mVEGFA
基因的
RT
‑
PCR
结果
。
具体实施方式
[0023]以下参考说明书附图介绍本专利技术的多个优选实施例，使其
技术实现思路
更加清楚和便于理解
。
本专利技术可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本专利技术的保护范围并非仅限于文中提到的实施例
。
[0024]脂肪细胞均来自整形外科医院腹部脂肪抽吸术的女性患者的术后废弃脂肪
。
纳入标准为：
22
‑
28
岁，无既往病史，近3‑6月无药物服用史
。
脂肪的采取及使用均征得患者本人同意
。
实施例1
[0025]1、
提取脂肪干细胞将获得的脂肪剪碎，用
PBS
清洗3次，以
100
目的细胞筛过滤后，加入
I
型胶原酶消化，消化条件为：
37℃
恒温摇床消化
60min。
消化完成后，用
DMEM
培养基终止消化
。
以
1000r
的速度离心
10
分钟后用
PBS
清洗，重复两次
。
重悬后，再次低速离心
10
分钟
。
收集离心管底部细胞团即基质血管成分（
SVF
，
Stromal Vascular Fraction
）， 用２
ml
的
MSCM
完全培养基重悬后以1×
105/ml
的密度接种于
10cm
细胞培养皿中，置于5％
CO2、37℃
条件下培养
。
原代细胞接种
48
小时后更换新培养基， 其后每
48
小时更换培养基
。
细胞达到
90%
融合后传代扩增，后续实验使用传至第三代（
P3
）的细胞
。
[0026]2、
脂肪干细胞多向分化能力的鉴定
P3
细胞采用胰酶消化获取，以1×
106个细胞／...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种成活率高的自体脂肪移植方法，其包括以下步骤：1）提取脂肪干细胞；2）用血管内皮细胞培养得到的上清液处理脂肪干细胞；3）将步骤2）中经处理的脂肪干细胞与颗粒脂肪混合，进行脂肪移植
。2.
根据权利要求1所述的自体脂肪移植方法，其特征在于，所述上清液是血管内皮细胞先在常规条件下培养一段时间，然后在胁迫状态下培养一段时间后得到的
。3.
根据权利要求2所述的自体脂肪移植方法，其特征在于，所述胁迫状态是低血清
、
低氧和低一氧化氮的条件
。4.
根据权利要求1所述的自体脂肪移植方法，其特征在于，所述血管内皮细胞是
CRL
‑
1730。5.
根据权利要求3所述的自体脂肪移植方法，其特征在于，所述上清液具体的制备步骤为：将
CRL
‑
1730
常规培养于含
10%
胎牛血清的
RPMI
‑
1640
培养液中培养
1d
，调整培养条件：<...

【专利技术属性】
技术研发人员：付建军，陈祁，王国辉，
申请(专利权)人：苏州邦伊医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：