一种减少破坏提高纯度的自体脂肪移植方法技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，尤其涉及一种提高纯度自体脂肪的移植方法

【技术实现步骤摘要】
一种减少破坏提高纯度的自体脂肪移植方法


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其涉及一种减少破坏提高纯度的自体脂肪移植方法
。

技术介绍

[0002]自体脂肪移植由
Neuber
在
1893
年第一次提出后，历经
130
年，随着技术的不断改进，已经广泛应用于整形外科领域
。
但术后脂肪成活率成为制约手术效果的重要因素
。
脂肪移植后的成活率受多种因素影响，这种机制十分复杂，从而导致吸收率难以预测
。
多年来学者们不断研究探索，试图找出一种标准化的安全高效的脂肪移植技术
。
直到
1994
年
Coleman
医生首次发表了
Coleman
脂肪移植技术
。
该技术主要包括三个部分：脂肪的获取
、
制备和移植
。
这项技术为我们后续的技术发展奠定了理论基础
。
依托于
Coleman
脂肪移植技术的标准化流程，脂肪移植术后成活率得到了极大的提高
。
但是脂肪成活率仍是不确定的，个体之间存在着极大差异
。
[0003]脂肪间充质干细胞是存在于脂肪组织中的，具有多项分化潜能的干细胞，具有来源丰富
、
取材方便的优点，因此被认为是组织再生和修复的理想种子细胞
。
基于脂肪间充质干细胞的成脂分化能力构建组织工程脂肪，能有效提高脂肪移植的效果，为软组织的缺损重建提供了新的途径，在组织工程和再生医学领域中具有良好的应用前景
。
但是，目前脂肪间充质干细胞成脂分化的效率较低，而且成脂诱导时间长，难以满足临床上对脂肪组织的大量需求，限制了其在临床上的应用
。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术一方面提供一种提高自体脂肪移植纯度和成活率的方法，其采用
Ad
‑
EPO
感染脂肪干细胞，感染可持续生成可溶性的
EPO。
同时
Ad
‑
EPO
可促进脂肪组织的成活，提高移植脂肪的成活质量
。
[0005]本专利技术的另一方面提供一种诱导培养基，其组成为：
10% FBS
（胎牛血清）的低糖 DMEM+
地塞米松
+
脂肪酸
+
甘氨酸
+
缬氨酸
+
半胱氨酸
。
[0006]其中甘氨酸的浓度为
40
‑
70mM
，在一个具体实施方式中，其浓度可以为
45mM、50mM、55mM、60mM、65mM。
[0007]其中缬氨酸和半胱氨酸的浓度为
10
‑
20mM
，在一个具体实施方式中，其浓度可以为
11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM。
[0008]其中脂肪酸的浓度为
0.5
‑
2mM
，在一个具体的实施方式中，其浓度为
0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM、1.2mM、1.3mM、1.4mM、1.5mM、1.6mM、1.7mM、1.8mM、1.9mM。
[0009]其中脂肪酸可以为棕榈酸
、
油酸
、
硬脂酸的一种或多种
。
[0010]本专利技术的另一方面，提供一种减少破坏提高纯度的自体脂肪移植方法，具体为使用
Ad
‑
EPO
诱导脂肪干细胞的同时采用改进培养基诱导脂肪干细胞生长分化
。
[0011]本专利技术的一种提高自体脂肪移植纯度和成活率的方法，具有以下优势：
1、
采用
Ad
‑
EPO
诱导脂肪组织的成活，提高移植脂肪的成活质量
。
[0012]2、
使用改进诱导培养可显著增加脂肪干细胞生长速度和成脂化率
。
[0013]3、
该方法操作简单，且无后遗症，在自体脂肪移植上具备良好的应用前景
。
附图说明
[0014]图1为
ELISA
法检测
Ad
‑
EPO
和
Ad
‑
GFP
感染脂肪干细胞后上清中
EPO
的表达情况；图2为脂肪干细胞在各种诱导下的生长曲线；图3为各种诱导条件下裸鼠脂肪移植物的重量；图4为各种诱导条件下脂肪干细胞的活力情况
。
具体实施方式
[0015]下面结合实施例对本专利技术做进一步的描述
。
这些实施例仅是对本专利技术的典型描述，但本专利技术不限于此
。
下述实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法，所使用的原料，试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂
。
[0016]实施例
1 腺病毒基因表达载体构建重组腺病毒的构建过程如下：首先构建携带红细胞生长素基因（
EPO
）的穿梭质粒
PXCJL1
‑
CMV/pA
‑
EPO
，然后
LipofectAMIN
介导该质粒以及5型腺病毒基因组的质粒
GT4050
共感染
293
细胞，采用细胞内质粒
DNA
同源重组法构建重组腺病毒
Ad
‑
EPO
，并以噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒，
PCR
法鉴定阳性克隆之后进行扩增
。
[0017]实施例
2 ADSCs
细胞分离提取（1）大鼠使用
0.1%
戊巴比妥钠经腹腔注射麻醉后，电动剃毛器和 100mg/mL 硫酸钠脱毛剂给予双侧腹股沟区及下腹部区脱毛备皮
。
大鼠取仰卧位，四肢及头部固定于手术台上，常规消毒，铺无菌单；先于腹股沟区切开该处皮肤，显露皮下脂肪垫，以眼科剪刀切取约 1ml 脂肪组织
。
再于下腹部行纵向切口，暴露腹直肌及腹膜，剪刀纵形钝性分离，暴露双侧附睾，以眼科剪刀切取附睾周围组织脂肪约 1ml
；（2）用含有青链霉素
(100
μ
/mL)
的 PBS 液反复冲洗脂肪组织，在超净台下剔除脂肪表面的肉眼可分辨的血管
、
筋膜等结缔组织
。
对于来自腹股沟的脂肪需要再平行于大血管的走向切开脂肪，剔除肉眼可见的椭圆形的淋巴结
。
用眼科剪充分剪碎至约为 1 mm
3 体积的小脂肪块；（本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种提高纯度和成脂率的脂肪干细胞移植方法，其特征在于：使用
EPO
感染脂肪干细胞，同时使用包含脂肪酸和氨基酸的诱导培养基诱导其分化
。2.
根据权利要求1的移植方法，其特征在于，
EPO
感染脂肪干细胞的步骤分为：（1）基因表达载体构建；（2）
ADSCs
细胞分离提取；（3）
ADSCs 诱导分化
。3.
根据权利要求2的移植方法，其特征在于，使用腺病毒作为基因表达载体
。4.
根据权利要求1的移植方法，其特征在于，所述氨基酸为甘氨酸
、
缬氨酸和半胱氨酸
。5.
根据权利要求1所述的移植方法，其特征在于，所述诱导培养基的组分包含
10% FBS
（胎牛血清）的低糖 DMEM、
脂肪酸
、...

【专利技术属性】
技术研发人员：付建军，王国辉，罗培东，陈祁，
申请(专利权)人：苏州邦伊医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：