本发明专利技术涉及一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法，属于生物工程技术领域，包括以下步骤：(1)免疫抗原的制备：将鸭疫里默氏杆菌菌株进行厌氧培养；挑取生长出的单菌落接种后，摇床振荡培养；将培养的菌液离心后，洗涤离心并采用生理盐水悬浮后获得；(2)动物免疫：将制备的抗原接种于健康且阴性的实验禽，注射抗原后7天，采血分离获得血清；(3)血清型鉴定：将玻片凝集抗原与未稀释血清混合，当出现清晰的乳白色絮状凝集块，即为所述阳性血清。本发明专利技术提供一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法，制备的阳性血清可用于鸭疫里默氏杆菌的血清型鉴别，操作简便，成本低，应用性强，为鸭疫里默氏杆菌感染病的防控提供支撑。氏杆菌感染病的防控提供支撑。氏杆菌感染病的防控提供支撑。
【技术实现步骤摘要】
一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法
[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法。
技术介绍
[0002]鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是鸭疫里默氏杆菌感染的病原。鸭疫里默氏杆菌感染是一种高致病性、接触性的细菌性疾病，本病发生呈急性或慢性败血性过程，以心包炎、肝周炎、气囊炎、脑炎和关节炎以及干酪性输卵管炎为特征。自然条件下鸭最易感，各品种鸭均能感染发病。该病一年四季均可发生，没有明显的季节性。感染鸭群中的致病率可达90％，死亡率可达5％
‑
80％。目前该病流行于全国各养鸭地区，给养鸭业造成了重大的经济损失。鸭疫里默氏杆菌血清型众多，且不同地区流行的鸭疫里默氏杆菌血清型存在差异，了解本地区鸭疫里默氏杆菌的流行血清型，对于该病的防控是及其重要的。
技术实现思路
[0003]本专利技术的目的就在于为了解决上述问题而提供一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法。
[0004]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：
[0005]一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法，包括以下步骤：
[0006](1)免疫抗原的制备：
[0007]将冻存的2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)菌株划线接种于含10％牛血清的营养琼脂上，厌氧培养；
[0008]挑取生长出的单菌落接种于含10％牛血清的胰酪大豆胨液体培养基中，摇床振荡培养；
[0009]将培养的菌液离心后，用0.9％无菌生理盐水洗涤，离心，最后将菌体以含0.3％甲醛的生理盐水悬浮后作为免疫抗原和玻片凝集抗原；
[0010](2)动物免疫：
[0011]周期内将制备的抗原接种于健康且阴性的实验禽，最后一次注射抗原后7天，对实验禽进行采血，分离获得血清；
[0012](3)血清型鉴定：
[0013]将所述玻片凝集抗原与未稀释的步骤(2)获得血清混合，当出现清晰的乳白色絮状凝集块，为制备的血清与鸭疫里默氏杆菌抗原呈现阳性反应，即为所述阳性血清。
[0014]作为本专利技术的进一步优化方案，所述步骤(1)中的含10％牛血清的营养琼脂，具体制备过程如下：使用营养琼脂作为基础培养基，称取3.5g于100mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，待其冷却至50℃左右时，加入10mL牛血清轻轻晃动混匀，倒入平皿中制成。
[0015]作为本专利技术的进一步优化方案，所述营养琼脂的成分为每升中添加蛋白胨10g、牛肉粉3g、氯化钠5g、琼脂15g。
[0016]作为本专利技术的进一步优化方案，所述步骤(1)中的含10％牛血清的胰酪大豆胨液体培养基，具体制备过程如下：使用胰酪大豆胨液体培养基为基础液体培养基，称取3.0g于100mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min，冷却后加入10mL牛血清混匀制成。
[0017]作为本专利技术的进一步优化方案，所述胰酪大豆胨液体培养基的成分为每升中添加胰蛋白胨17g、大豆蛋白胨3g、氯化钠5g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄球2.5g。
[0018]作为本专利技术的进一步优化方案，所述步骤(2)抗原接种方式采用胸肌多点注射的方式。
[0019]作为本专利技术的进一步优化方案，所述步骤(2)抗原接种周期为：第1次注射剂量为0.1mL，之后每隔4天注射1次，每次注射剂量分别为0.1mL、0.2mL、0.5mL、0.5mL、1.0mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL。
[0020]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法，制备的阳性血清可用于鸭疫里默氏杆菌的血清型鉴别，操作简便，成本低，应用性强，为鸭疫里默氏杆菌感染病的防控提供支撑。
附图说明
[0021]图1本专利技术制备的阳性血清与抗原的反应情况(A：阳性血清与抗原的反应B：阴性血清与抗原的反应)。
具体实施方式
[0022]下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
[0023]1、材料
[0024]本专利技术所用方法如无特别说明均为本领域技术人员所知晓的常规方法，所用试剂等，如无特别说明，均为市售购买产品。
[0025]2、方法
[0026]2.1免疫抗原的制备
[0027]使用营养琼脂(成分为每升L中添加蛋白胨10g、牛肉粉3g、氯化钠5g、琼脂15g)作为基础培养基，称取3.5g于100mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min，待其冷却至50℃左右时，加入10mL牛血清轻轻晃动混匀，倒入平皿中制成含10％牛血清的营养琼脂平板备用。使用胰酪大豆胨液体培养基(成分为每升L中添加胰蛋白胨17g、大豆蛋白胨3g、氯化钠5g、磷酸氢二钾2.5g、葡萄球2.5g)为基础液体培养基，称取3.0g于100mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min，冷却后加入10mL牛血清混匀备用。
[0028]将冻存的2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)菌株划线接种于含10％牛血清的营养琼脂上，置于37℃厌氧烛缸培养24～48h。挑取生长出的单菌落接种于含10％牛血清的胰酪大豆胨液体培养基中，37℃摇床振荡培养培养24h。将培养的菌液离心后，用0.9％无菌生理盐水洗涤，离心两次，最后将菌体以含0.3％甲醛的生理盐水悬浮后作为免疫抗原和玻片凝集抗原。
[0029]2.2动物免疫
[0030]选择体重为2
㎏
的健康禽5只，免疫前采集血清检测为阴性。采用胸肌多点注射的方式将制备的抗原接种于每只禽，第1次注射剂量为0.1mL，之后每隔4天注射1次，每次注射剂量分别为0.1、0.2、0.5、0.5、1.0、1.0、1.5、2.0mL。最后一次注射抗原后7天，采血分离血清。
[0031]2.3血清型鉴定
[0032]取洁净载玻片一张，滴加玻片凝集抗原10uL，再滴加未稀释的阳性血清10uL，将载玻片反复摆动混匀。观察结果，如图1所示，出现清晰的乳白色絮状凝集块，即为制备的血清与鸭疫里默氏杆菌抗原呈现阳性反应。
[0033]以上所述实施例仅表达了本专利技术的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本专利技术专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本专利技术的保护范围。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)免疫抗原的制备：将冻存的2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)菌株划线接种于含10％牛血清的营养琼脂上，厌氧培养；挑取生长出的单菌落接种于含10％牛血清的胰酪大豆胨液体培养基中，摇床振荡培养；将培养的菌液离心后，用0.9％无菌生理盐水洗涤，离心，最后将菌体以含0.3％甲醛的生理盐水悬浮后作为免疫抗原和玻片凝集抗原；(2)动物免疫：周期内将制备的抗原接种于健康且阴性的实验禽，最后一次注射抗原后7天，对实验禽进行采血，分离获得血清；(3)血清型鉴定：将所述玻片凝集抗原与未稀释的步骤(2)获得血清混合，当出现清晰的乳白色絮状凝集块，为制备的血清与鸭疫里默氏杆菌抗原呈现阳性反应，即为所述阳性血清。2.根据权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌阳性血清的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的含10％牛血清的营养琼脂，具体制备过程如下：使用营养琼脂作为基础培养基，称取3.5g于100mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，待其冷却至50℃左右时，加入10mL牛血清轻轻晃动混匀，倒入平皿中制成。3.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝东敏，陈丽颖，魏战勇，程冰花，
申请(专利权)人：安徽强英食品集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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