一种联合使用AS-IV与Sal-B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学领域，具体公开了一种联合使用AS

【技术实现步骤摘要】
一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法


[0001]本专利技术属于细胞生物学领域，具体公开了一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法。

技术介绍

[0002]心血管疾病是引起全球死亡率多发的原因，内皮损伤是心血管疾病的主要原因之一。血管新生是修复内皮损伤治疗心血管疾病的有效途径，人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)具有强大的自我更新与分化潜力，来源稳定，可通过重编程定向分化为内皮细胞，被用于心血管疾病的细胞替代治疗。
[0003]由于常规分化实验具有投入高、效率较低等局限性，因此在临床应用前需要寻找更有效的分化方法，以保证临床应用的高效性和安全性。
[0004]近年来，不断有研究表明，AS
‑
IV与Sal
‑
B在促血管再生方面作用突出，AS
‑
IV可以促进VEGF表达、诱导组织内血管生成等，Sal
‑
B可以增加VEGF表达、保护内皮细胞、减少梗死面积等。但目前尚无有效的联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，本专利技术首次公开了一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法。
[0006]本专利技术包括以下技术方案：
[0007]一方面，本专利技术公开了一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法，其特征在于，在保持人诱导多能干细胞iPSC
‑
Ecs培养基中0
‑
200μM Sal
‑
B固定存在的条件下，动态的调整iPSC
‑
ECs培养基中AS
‑
IV的浓度；
[0008]所述动态的调整iPSC
‑
Ecs培养基中AS
‑
IV的浓度包括在a时间内将AS
‑
IV的浓度降为接近0,紧接着b时间内将AS
‑
IV的浓度恢复为工作浓度0
‑
50μM之间，a
‑
b进行若干循环。
[0009]进一步的，上述一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法，所a时间长度选自18
‑
23h，所述b时间长度选自1
‑
6h。
[0010]进一步的，上述一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法，培养基中Sal
‑
B的浓度为50μM，AS
‑
IV的工作浓度为20μM，a时间长度为22h，b时间长度为2h。
[0011]另一方面，本专利技术公开了AS
‑
IV与Sal
‑
B在制备促进人诱导多能干细胞向内皮分化的试剂/药物中的应用。
[0012]进一步的，AS
‑
IV与Sal
‑
B在制备修复血管内皮损伤/促进血管再生/促进血管类器官生长的试剂/药物中的应用。
[0013]进一步的，AS
‑
IV与Sal
‑
B在制备促进人诱导多能干细胞向内皮分化过程中的
CD144 mRNA表达量提高的试剂/药物中的应用。
[0014]进一步的，AS
‑
IV与Sal
‑
B在制备促进人诱导多能干细胞向内皮分化过程中的eNOS mRNA表达量提高的试剂/药物中的应用。
[0015]进一步的，AS
‑
IV与Sal
‑
B在制备促进人诱导多能干细胞向内皮分化过程中的细胞成管能力提高的试剂/药物中的应用。
[0016]进一步的，AS
‑
IV与Sal
‑
B在制备促进人诱导多能干细胞向内皮分化过程中的激活Piezo1/MEK/Erk通路的试剂/药物中的应用。
[0017]另一方面，本专利技术公开了一种促进人诱导多能干细胞向内皮分化的试剂盒，包括需要联合使用的AS
‑
IV与Sal
‑
B。
[0018]本专利技术具有如下有益效果:
[0019]本专利技术过药物毒性及诱导分化效率的筛选，确定了AS
‑
IV和Sal
‑
B能够有效促进iPSC
‑
ECs分化的最佳干预浓度及干预时长，并进一步确定了AS
‑
IV与Sal
‑
B组分配伍可以更有效地促进iPSC
‑
ECs的分化，且经AS
‑
IV与Sal
‑
B组分配伍干预后的iPSC
‑
ECs的细胞成管能力更好。
[0020]进一步的，我们发现与正常组相比，AS
‑
IV与Sal
‑
B组分配伍干预后的iPSC
‑
ECs的Piezo1 mRNA水平及蛋白水平、MEK及Erk的mRNA水平及蛋白磷酸化水平皆有所提升。此外，Piezo1基因沉默后，AS
‑
IV与Sal
‑
B组分配伍对iPSC
‑
ECs的分化无明显的促进作用，且MEK、Erk的蛋白磷酸化水平也无明显的升高。以上结果表明，AS
‑
IV与Sal
‑
B组分配伍干预是通过Piezo1/MEK/Erk促进iPSC
‑
ECs的分化。
[0021]本专利技术所述的方法可以最优化的发挥AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的能力，具有潜在的作为治疗修复血管损伤，促进血管重生，制备血管类器官的试剂或者药物的市场化应用。
附图说明
[0022]图1：不同浓度的AS
‑
IV对iPSCs增殖的影响，与control组相比，***P<0.001；
[0023]图2：不同浓度的Sal
‑
B对iPSCs增殖的影响，与control组相比，**P<0.01，
[0024]***P<0.001；
[0025]图3：不同浓度的AS
‑
IV干预iPSC
‑
ECs分化后的CD144 mRNA的表达情况，与N组相比，**P<0.01；
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法，其特征在于，在保持人诱导多能干细胞iPSC
‑
ECs培养基中0
‑
200μM Sal
‑
B固定存在的条件下，动态的调整iPSC
‑
ECs培养基中AS
‑
IV的浓度；所述动态的调整iPSC
‑
ECs培养基中AS
‑
IV的浓度包括在a时间内将AS
‑
IV的浓度降为接近0,紧接着b时间内将AS
‑
IV的浓度恢复为工作浓度0
‑
50μM之间，a
‑
b进行若干循环。2.根据权利要求1所述的一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法，其特征在于，所a时间长度选自18
‑
23h，所述b时间长度选自1
‑
6h。3.根据权利要求1所述的一种联合使用AS
‑
IV与Sal
‑
B促进人诱导多能干细胞向内皮分化的方法，其特征在于，培养基中Sal
‑
B的浓度为50...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑志娟，王峻清，李运伦，袁艳萍，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：