含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用。所述生物制剂包括阳性表达CD133、CD24和CD44的肾前体样细胞，具有强的连续传代能力，能够抑制肾脏组织成纤维化进程，促进肾组织再生或修复。促进肾组织再生或修复。促进肾组织再生或修复。

【技术实现步骤摘要】
含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]急慢性肾脏疾病导致的肾功能衰竭严重威胁人类健康，传统的药物治疗和透析治疗难以逆转肾脏结构的损伤和肾功能的持续下降，Ⅰ型糖尿病肾病、肾小球肾病、慢性肾炎等在疾病进展过程对肾脏造成损伤，造成肾小球滤过率持续下降，肾实质内瘢痕的堆积成肾纤维化，纤维基质沉淀扰乱器官结构，减少血液供应，纤维化会降低组织修复能力，最后不可避免的会进展为终末期肾病。肾前体细胞(Renal progenitors)分布在肾小管和肾小囊中，能够分化成为肾小管细胞和肾足细胞，恢复肾功能，逆转肾损伤，是肾组织修复最重要的细胞。体外构建肾前体细胞培养体系，研究肾前体细胞对肾脏疾病模型的治疗作用，对于研究慢性和急性肾脏疾病的意义重大。
[0003]利用胚肾分离得到肾前体样细胞的难度大，细胞连续传代能力有限。从尿液中分离筛选取得肾前体细胞的方法存在引入外源微生物污染的问题，且该种方法得到的前体细胞通过血液系统回输后无法实现定植。由胚胎干细胞或iPS细胞诱导分化形成的肾前体样细胞有发展成畸胎瘤的风险。
[0004]因此，有必要开发新型的含肾前体样细胞的生物制剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供新型的含肾前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用，以利于受损肾组织的再生或修复。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的生物制剂包括阳性表达CD133、CD24和CD44的肾前体样细胞，具有强的连续传代能力，能够抑制肾脏组织成纤维化进程，促进肾组织再生或修复。
[0007]优选的，所述肾前体样细胞为上皮组织来源前体样细胞。具体的，所述肾前体样细胞具有上皮前体细胞特征。
[0008]所述的“上皮组织”为被覆上皮。具体的，所述上皮组织来源前体样细胞来源于肾皮质组织。
[0009]优选的，所述肾前体样细胞还阳性表达CD73和SOX9中的至少一种。
[0010]优选的，所述肾前体样细胞阳性表达CD133、CD24、CD44、CD73和SOX9。
[0011]优选的，所述肾前体样细胞还阴性表达至少一种MHC二类分子。具体的，所述肾前体样细胞还阴性表达HLA
‑
DR、HLA
‑
DP和HLA
‑
DQ的至少一种。
[0012]优选的，所述肾前体样细胞还阴性表达CD34和CD45中的至少一种。
[0013]优选的，所述肾前体样细胞阴性表达HLA
‑
DR、HLA
‑
DP、HLA
‑
DQ、CD34和CD45。
[0014]所述生物制剂的制备方法包括：使用扩增转化培养基对肾原代细胞进行体外培养，得到阳性表达CD133、CD24和CD44的肾前体样细胞。
[0015]所述扩增转化培养基包含基础培养基，以及以占所述基础培养基的体积含量计的以下成分：
[0016]15
‑
25纳克/毫升的表皮细胞生长因子EGF，40
‑
60纳克/毫升的碱性成纤维细胞生长因子bFGF，体积百分比为0.5％
‑
1.5％的N2添加剂，体积百分比为0.5％
‑
1.5％的B27添加剂，5
‑
15微摩尔/升的ROCK激酶抑制剂，2
‑
4微摩尔/升的糖原合成酶激酶3β抑制剂，0.5
‑
1.5微摩尔/升的TGF
‑
β信号抑制剂，体积百分比为0.5％
‑
1.5％的补充剂ITS，不超过1纳摩尔/升的地塞米松，5
‑
15纳克/毫升的血小板源生长因子PDGF，体积百分比为1
‑
10％的血清。其中，补充剂ITS为胰岛素
‑
转铁蛋白。
[0017]优选的，所述基础培养基由体积比为3:1
‑
1:1的DMEM/F12培养基和MCDB培养基组成。
[0018]优选的，MCDB培养基为MCDB
‑
131培养基。
[0019]优选的，所述ROCK激酶抑制剂为Fasudil、Y
‑
27632、Thiazovivin和SB
‑
772077
‑
B的任意一种。
[0020]优选的，所述TGF
‑
β信号抑制剂为RepSox、SB431542和A83
‑
01的任意一种。
[0021]优选的，所述糖原合成酶激酶3β抑制剂为BIO、CHIR99021和TWS119中的至少一种。
[0022]本专利技术还提供了所述生物制剂在肾病治疗药物制备方面的应用。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例的肾前体细胞CD133、CD24、CD44、CD73和SOX9表达情况示意图；
[0024]图2为本专利技术实施例的肾前体细胞HLA
‑
DR、HLA
‑
DP、HLA
‑
DQ、CD34和CD45的表达情况示意图；
[0025]图3为本专利技术实施例的肾前体样细胞的光学显微镜照片；
[0026]图4为本专利技术实施例的肾前体样细胞和经对照培养得到的细胞两者的增殖性能对比图；
[0027]图5为本专利技术实施例的实验组、生理盐水对照组以及空白对照组各左侧肾脏照片的对比图；
[0028]图6为本专利技术实施例的实验组、生理盐水对照组和空白对照组的Masson染色照片；
[0029]图7为本专利技术实施例的实验组、生理盐水对照组和空白对照组的天狼星红染色照片；
[0030]图8为本专利技术实施例的正常对照组、模型对照组、受试物组A和受试物组B的Urea水平对比图；
[0031]图9为本专利技术实施例的正常对照组、模型对照组、受试物组A和受试物组B的Cr水平对比图。
具体实施方式
[0032]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提
下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本文中使用的“包括”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同，而不排除其他元件或者物件。
[0033]本专利技术各实施例中，如无特别说明，细胞培养均在37摄氏度环境下且二氧化碳浓度为5％的细胞培养箱中进行。细胞培养使用的培养基以及处理细胞所使用的各类试剂，例如缓冲液使用前均经无菌化处理以及0.22微米滤器过滤以去除杂质。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物制剂，其特征在于，包括肾前体样细胞，所述肾前体样细胞阳性表达CD133、CD24和CD44。2.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述肾前体样细胞还阳性表达CD73和SOX9中的至少一种。3.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述肾前体样细胞还阴性表达HLA
‑
DR、HLA
‑
DP、HLA
‑
DQ、CD34和CD45中的至少一种。4.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述肾前体样细胞为上皮组织来源前体样细胞。5.根据权利要求4所述的生物制剂，其特征在于，所述上皮组织来源前体样细胞来源于肾皮质组织。6.一种生物制剂的制备方法，其特征在于，包括：使用扩增转化培养基对肾原代细胞进行体外培养，得到阳性表达CD133、CD24和CD44的肾前体样细胞；所述扩增转化培养基包含基础培养基，以及以占所述基础培养基的体积含量计的以下成分：15
‑
25纳克/毫升的EGF，40
‑
60纳克/毫升的bFGF，体积百分比为0.5％
‑
1.5％的N2添加剂，体积百分比为0.5％
‑
1.5％的B27添加剂，5
‑
15微摩尔/升的ROCK激酶抑制剂，2
‑
4微摩尔/升的糖原合成酶激酶3β抑制剂，0.5
‑
1.5微摩尔/升的TGF
‑
β信号抑制剂，体积百分比为0.5％
‑
1.5％的补充剂ITS，不超过1纳摩尔/升的地塞米松，5
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伸奥，张琴，
申请(专利权)人：上海赛立维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：