一种用于美白和抗皮肤衰老的包含NK细胞外泌体的组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及美容护肤技术领域，尤其是涉及一种用于美白和抗皮肤衰老的包含NK细胞外泌体的组合物及其制备方法和应用。所述组合物包含NK细胞外泌体与脂质体的融合体和负载在所述融合体中的具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质。本发明专利技术的所述组合物利用外泌体

【技术实现步骤摘要】
一种用于美白和抗皮肤衰老的包含NK细胞外泌体的组合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及美容护肤
，尤其是涉及一种用于美白和抗皮肤衰老的包含NK细胞外泌体的组合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]随着生活水平的逐渐提高，人们对肌肤健康状况的重视程度日渐提高。抗衰和美白是肌肤护理的两大主要诉求。日前市面大部分的护肤品都专注于抗衰和美白，有多种可选择的有效成分。其中美白成分主要有烟酰胺、维生素C、氨甲环酸、曲酸、果酸、熊果苷等；抗衰成分主要包括白藜芦醇、辅酶Q10、二裂酵母、玻色因、视黄醇、胜肽、虾青素、维生素C等。每种成分都各有其优缺点。有的成分效果好，但易过敏且引起炎症反应；有的成分安全性高，但稳定性差；有的成分价格昂贵，只能少量使用，达不到有效浓度。
[0003]护肤成分的有效性毋庸置疑，但如何增加护肤成分的透皮性达到少量高效的作用，并解决其对皮肤造成的刺激，降低致敏性，提高稳定性，是我们一直在探寻的方向。
[0004]目前仿生囊泡技术已经较为成熟，其中免疫细胞外泌体生产技术也大规模应用。纳米载体领域中外泌体和脂质体各有优势，外泌体来源于天然细胞，具有免疫原性低、可负载药物量大、体内长时间循环、屏障穿透能力强、靶向性高、抗炎等优点；脂质体具有价格低廉、载药量大、成分稳定等优点。然而目前未有将外泌体和脂质体联合用于负载护肤成分的报道。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术利用外泌体
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脂质体融合体来负载护肤成分，以增加护肤成分的透皮性从而达到少量高效的作用，并降低护肤成分对皮肤造成的刺激、降低致敏性和提高稳定性。
[0006]具体地，在一个方面，本专利技术提供了一种用于美白和抗皮肤衰老的组合物，其包含自然杀伤细胞(Natural killer cell，NK细胞)外泌体与脂质体的融合体和负载在所述融合体中的具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质。
[0007]更具体地，融合体由外泌体蛋白质量与脂质体质量的比例为1:5的NK细胞外泌体与脂质体融合而成。
[0008]更具体地，NK细胞外泌体与脂质体的融合可以采用本领域熟知的任何方法进行。这样的融合方法的一个实例是共孵育融合法。
[0009]更具体地，NK细胞外泌体与脂质体的融合可以如下进行：将一定质量比的NK细胞外泌体与脂质体等体积混合，将混合溶液在震荡下孵育(例如放置于37℃摇床150rpm孵育12h)，从而使外泌体与脂质体进行融合，得到分散性好、粒径均一的外泌体
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脂质体融合体。
[0010]更具体地，NK细胞外泌体是由经外源刺激的NK细胞的培养上清液制备的。
[0011]更具体地，所述外源刺激是使用芍药苷进行刺激。
[0012]更具体地，由NK细胞培养上清液制备外泌体的方法可以是本领域熟知的任何方法，包括例如聚乙二醇(PEG)高分子共沉降法。
[0013]更具体地，NK细胞外泌体如下制备：使用添加外源刺激物的无血清培养基连续培养NK细胞，收集细胞培养的培养基，离心去除细胞碎片,使用聚乙二醇(PEG)进行高分子共沉降法(PEG亲水性强，可与外泌体周围的水分子相互作用，形成疏水微环境)提取高纯度外泌体，低温低速离心，收集外泌体。
[0014]更具体地，脂质体可以是使用本领域熟知的方法制备的任何脂质体。
[0015]更具体地，脂质体的制备方法包括：使用卵磷脂和胆固醇作为原料，使用薄膜分散法制备脂质体，将脂质体进行旋蒸去除有机溶剂，使用PBS将脂质体薄膜水化，并超声促进脂质体乳化，于4℃冰箱中保存。
[0016]更具体地，NK细胞外泌体的粒径为60
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120nm，优选60
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70nm。
[0017]更具体地，脂质体的粒径为60
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120nm，优选60
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90nm。
[0018]更具体地，NK细胞外泌体与脂质体的融合体的粒径为60
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230nm，优选60
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120nm。
[0019]更具体地，与单独施用的具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质相比，如本文所述的组合物具有改善的透皮性。
[0020]更具体地，与负载具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质的单独的NK细胞外泌体相比，如本文所述的组合物具有改善的透皮性。
[0021]更具体地，与负载具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质的单独的脂质体相比，如本文所述的组合物具有改善的透皮性。
[0022]更具体地，活性物质可以是具有美白和抗皮肤衰老的任何活性物质，实例包括但不限于烟酰胺、维生素C、氨甲环酸、曲酸、果酸、熊果苷、白藜芦醇、辅酶Q10、二裂酵母、玻色因、视黄醇、胜肽、虾青素等。
[0023]在另一方面，本专利技术提供了一种制备如本文所述的用于美白和抗皮肤衰老的组合物的方法，其包括以下步骤：
[0024]1)制备NK细胞外泌体，
[0025]2)制备负载具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质的脂质体，和
[0026]3)将NK细胞外泌体与负载具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质的脂质体融合，即得到所述用于美白和抗皮肤衰老的组合物。
[0027]更具体地，在所述方法中，步骤1)包括用外源刺激物刺激NK细胞，然后由NK细胞的培养上清液制备外泌体。
[0028]更具体地，所述外源刺激物是芍药苷。
[0029]更具体地，在所述方法中，由NK细胞培养上清液制备外泌体的方法可以是本领域熟知的任何方法，包括例如聚乙二醇(PEG)高分子共沉降法。
[0030]更具体地，在所述方法中，步骤1)包括使用添加外源刺激物的无血清培养基连续培养NK细胞，收集细胞培养的培养基，离心去除细胞碎片,使用聚乙二醇(PEG)进行高分子共沉降法(PEG亲水性强，可与外泌体周围的水分子相互作用，形成疏水微环境)提取高纯度外泌体，低温低速离心，收集外泌体。
[0031]更具体地，在所述方法中，步骤2)包括制备脂质体，然后将具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质负载在脂质体中。
[0032]更具体地，在所述方法中，脂质体可以是使用本领域熟知的方法制备的任何脂质体。
[0033]更具体地，在所述方法中，脂质体的制备方法包括：使用卵磷脂和胆固醇作为原料，使用薄膜分散法制备脂质体，将脂质体进行旋蒸去除有机溶剂，使用PBS将脂质体薄膜水化，并超声促进脂质体乳化，于4℃冰箱中保存。
[0034]更具体地，在所述方法的步骤2)中，可以使用本领域熟知的任何方法在脂质体中负载具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质。
[0035]更具体地，在脂质体中负载具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质包括对于脂溶性较好的活性物质，将其在制作脂质体时共同溶解，旋蒸去除有机溶剂后形成薄膜，使用PBS水化并测定包封率和载药量。对于水溶性较好的活性物质，将其溶解于PBS中，在薄膜水化时加入，通过水化及超声负载药物，并加入PEG2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于美白和抗皮肤衰老的组合物，其特征在于，包含NK细胞外泌体与脂质体的融合体和负载在所述融合体中的具有美白和抗皮肤衰老作用的活性物质。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述融合体由外泌体蛋白质量与脂质体质量的比例为1:5的NK细胞外泌体与脂质体融合而成。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述NK细胞外泌体是由经外源刺激的NK细胞的培养上清液制备的，优选地，所述外源刺激是使用芍药苷进行刺激。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述NK细胞外泌体的粒径为60
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120nm。5.根据权利要求1
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3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述脂质体的粒径为60
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120nm。6.根据权利要求1
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3中任一项所述的组合物，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖美君，
申请(专利权)人：广东科标生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：