一种脐带源外泌体装载制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一种脐带源外泌体装载

【技术实现步骤摘要】
一种脐带源外泌体装载NMN的方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种脐带源外泌体装载
NMN
的方法及其应用
。

技术介绍

[0002]近年来，外泌体
(exosomes)
正逐渐成为护肤赛道中的“热门话题”。
外泌体是一种可由多种细胞分泌的直径约为
30
‑
100nm
的双层膜结构的杯状小囊泡
。
外泌体能在细胞间传递蛋白
、mRNA、microRNA
等活性物质
,
参与许多重要的生理
、
病理过程，其独特作用受到越来越多关注
。
细胞在正常的生理状况下都会分泌外泌体，由于质膜和多泡体之间融合的结果，外泌体样囊泡通过胞吐作用被分泌到胞外空间
。
外泌体样囊泡被脂质双层分为内部和外部，由于其含有膜脂质
、
膜蛋白
、
遗传物质和细胞质成分，间接地反映出细胞的性质和状态
。
同时，外泌体样囊泡通过与其他细胞和组织的结合，并将膜成分
、mRNA、miRNA、
蛋白质
(
生长激素
、
细胞因子等
)
等转移至受体细胞，而作为介导细胞
‑
细胞之间通讯的胞外运输蛋白
。
目前的研究表明，外泌体可以通过修复损伤细胞发挥相应的皮肤护理功效
。
[0003]间充质干细胞
(mesenchymal stem cells
，
MSCs)
是一种具有高度自我更新
、
多向分化及独特免疫调节能力特性的细胞，其可以通过与先天免疫和适应性免疫系统的细胞相互作用以及分泌细胞调节性因子发挥免疫调节作用
。
间充质干细胞外泌体
(exosomes frommesenchymal stem cells
，
MSCs
‑
Exo)
就是
MSCs
发挥功能的一种分泌物质
。
研究表明，
MSCs
‑
Exo
具有多种活性，比如组织修复
、
免疫调节和疾病治疗，越来越被重视
。
[0004]脐带间充质干细胞
(umbilical cord
‑
mesenchymal stem cells
，
UC
‑
MSCs)
具有来源充足
、
取材方便
、
培养简单等特点，也不存在伦理学问题，因而得到广泛研究
。
脐带间充质干细胞外泌体
(UC
‑
MSCs
‑
Exo)
也较其他干细胞外泌体更易被应用和推广
。
[0005]NMN
，全称：
β
‑
烟酰胺单核苷酸，是一种自然存在的具有生物活性核苷酸，存在于各种生物体内透明质酸广泛分布于动物组织细胞外基质和细胞间质中
。
目前烟酰胺在皮肤抗衰中被证实的各种作用，
NMN
有可能可以更好地完成，因为
NMN
可以更直接更高效地转化为
NAD+
，从而激活下游各类调节细胞周期
、
细胞寿命
、DNA
修复和能量代谢的信号通路
。2013
年
P&G
日本团队利用双光子显微镜在
80
位亚洲女性皮肤上观察到的数据显示，表皮层细胞中
NAD+/NADH
含量随着年纪增大显著下降
,
这可能与细胞老化和光损伤直接相关，而补充
NAD+
可以减缓细胞的老化
。
[0006]根据目前有
NMN
护肤人体临床数据的文献报道，虽然在人体内
NMN
可以转换成
NAD+
，但外用
NMN
能否透过皮肤屏障在细胞内转换为
NAD+
，成为了研究难题亟需解决
。

技术实现思路

[0007]针对上述现有技术的问题，本专利技术的目的在于提供一种脐带源外泌体装载
NMN
的方法及其应用
。
外泌体是一种纳米级微小囊泡，能有效透过皮肤屏障达到内皮细胞层，利用外泌体的透皮性再装载
NMN
，能有效的将
NMN
运输至内皮层，使
NMN
在皮内转化为
NAD+
，帮助促生胶原蛋白
、
调节皮肤细胞周期，起到延缓皮肤细胞衰老，美白皮肤的作用
。
[0008]为了实现上述目的，本申请采用了如下技术方案：
[0009]本专利技术提供了一种脐带源外泌体装载
NMN
的方法，包括以下步骤：
[0010]S1
：获取脐带源外泌体；
[0011]S2
：脐带源外泌体装载
NMN
，具体步骤为：
[0012]S21
：称取
NMN
溶解至
PBS
中配制成母液，充分混匀后保存；
[0013]S22
：将
S1
获取的脐带源外泌体
、NMN、buffer
混合后加入到电转杯中电转，
[0014]S23
：电转结束后向电转杯内加入外泌体保存液，轻柔吹打后转移至外泌体保存液中，即得装配
NMN
的脐带源外泌体
。
[0015]在以上技术方案中，
S1
的具体步骤为：
[0016]S11
：复苏
huMSC
，接种到无血清干细胞培养基，
37℃、5
％
CO2条件下进行培养；
[0017]S12
：镜下观察细胞，融合度达到
85
％时，收集细胞培养上清液；
[0018]S13
：收集后的上清液离心
、
过滤去除杂质；
[0019]S14
：过滤后的培养上清液加
PEG6000
溶液混匀
、
沉淀，沉淀结束后离心，离心后取出倒掉上清液，用
PBS
重悬底部沉淀，即得脐带源外泌体
。
[0020]在以上技术方案中，
S21
中，母液的浓度为
0.25g/ml
，
S22
中，
NMN
的浓度为
12000umol/L
，三个成分的添加量为每
2E11pcs
脐带源外泌体添加
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种脐带源外泌体装载
NMN
的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1
：获取脐带源外泌体；
S2
：脐带源外泌体装载
NMN
，具体步骤为：
S21
：称取
NMN
溶解至
PBS
中配制成母液充分混匀后保存；
S22
：将
S1
获取的脐带源外泌体
、NMN、buffer
混合后加入到电转杯中电转，
S23
：电转结束后向电转杯内加入外泌体保存液，轻柔吹打后转移至外泌体保存液中，即得装配
NMN
的脐带源外泌体
。2.
根据权利要求1所述方法，其特征在于：
S1
的具体步骤为：
S11
：复苏
huMSC
，接种到无血清干细胞培养基，
37℃、5
％
CO2条件下进行培养；
S12
：镜下观察细胞，融合度达到
85
％时，收集细胞培养上清液；
S13
：收集后的上清液离心
、
过滤去除杂质；
S14
：过滤后的培养上清液加
PEG6000
溶液混匀
、
沉淀，沉淀结束后离心，离心后取出倒掉上清液，用
PBS
重悬底部沉淀，即得脐带源外泌体
。3.
根据权利要求1所述方法，其特征在于：
S21
中，母液的浓度为
0.25g/ml
，
S22
中，
NMN
的浓度为
12000umol/L
，三个成分的添加量为每
2E11pcs
脐带源外泌体添加
2ugNMN
和
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖美君，
申请(专利权)人：广东科标生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：