一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法技术

本发明专利技术涉及细菌检测技术领域，尤其为一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：S1，将待检测样品置于35

【技术实现步骤摘要】
一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法


[0001]本专利技术涉及细菌检测
，具体为一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌是一种重要病原菌，可引起许多严重感染，需要经常对金黄色葡萄球菌进行检测，但现有的检测方法仍然存在不足之处，具体为：现有的检测方法耗时较长，无法进行快速检测。
[0003]因此，需要一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法来解决上述
技术介绍
中提出的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：
[0007]S1，将待检测样品置于35
‑
38℃的无菌环境中静置15—18min，再将待测样品加入生理盐水中，混合搅拌均匀后，得到样品液，将样品液静置10—15min后，把样品液投入透明容器内，再向透明容器内加入培养液，在30
‑
40℃的条件下进行均质处理，且均质时间为3—6min；
[0008]S2，等待均质处理结束后，对混合溶液进行振荡混匀，并在40
‑
43℃的条件下静置80—100min，得到混合培养液，将混合培养液接种在培养皿上进行培养，培养结束后收集培养皿中的培养物，得到检测物；
[0009]S3，将检测物转移到检测皿中，加入检测试剂，振荡混合均匀后，再滴入显色剂，继续振荡混合均匀，静置10—15min后，观察检测皿中培养物的颜色，若检测皿中出现粉红色，则表明样品中存在金黄色葡萄球菌。
[0010]作为本专利技术优选的方案，所述S1中生理盐水与待测样品的质量比为3∶7.5，混合搅拌的速率为20
‑
50r/min、混合搅拌的时长为5—10min，透明容器使用前需在120
‑
150℃的条件下进行5—8min的高温消毒杀菌处理。
[0011]作为本专利技术优选的方案，所述S1中培养液由氯化钠肉汤、氯化钠胰酪胨大豆肉汤以及增菌剂按照质量比为1∶1∶1.5混合制成，增菌剂由蛋白胨、牛肉浸出粉、低聚己糖、酵母浸粉以及丙酮酸钠按照摩尔质量比为3∶1∶0.2∶0.5∶0.1混合制成，培养液与样品液的质量比为1∶2。
[0012]作为本专利技术优选的方案，所述S2中细菌培养的温度为35
‑
38℃、培养时长为1.5—3h，混合培养液在培养皿中的液面高度为0.3—0.5cm。
[0013]作为本专利技术优选的方案，所述S3中检测试剂的配置方法为：将六水合三氯化铁加入乙二醇溶液中，超声处理至匀质状态，再加入醋酸钠、柠檬酸三钠以及聚乙二醇，继续超
声处理至匀质状态，将均质混合液转移至高温反应釜，在500℃下反应6h，过滤分离固体颗粒并以超纯水和无水乙醇交替清洗，得到羧基化磁性颗粒，将羧基化磁性颗粒投入Ag
‑
MnO2溶液中，在80℃下搅拌0.5h后静置50min并进行固液分离，得到磁性纳米颗粒，将磁性纳米颗投入磷酸盐缓冲液，磁吸附去上清液，再加入EDC和NHS，混合活化反应0.5h，接着加入金黄色葡萄球菌抗体并室温反应2h后，即可得到检测试剂。
[0014]作为本专利技术优选的方案，所述显色剂由十六烷基三甲基溴化铵、四氯金酸水合物、硼氢化钠0.6mL、十六烷基三甲基溴化铵、溴水杨酸以及硝酸银混合制成，检测试剂、显色剂以及检测物的质量比为3∶5∶1，检测试剂和显色剂均为事先配置后放入4℃冰柜中保存备用。
[0015]作为本专利技术优选的方案，所述六水合三氯化铁、乙二醇溶液、醋酸钠、柠檬酸三钠以及聚乙二醇的质量比为1∶20∶1.2∶0.2∶0.2，超声处理的功率为300—480W。
[0016]作为本专利技术优选的方案，所述Ag
‑
MnO2溶液的制备方法为将氯化锰、牛血清白蛋白以及硝酸银投入氢氧化钠水溶液中，室温下搅拌反应8h，反应结束后室温下离心，并用无水乙醇洗涤所得固体颗粒，把固体颗粒重新分散于纯水中，4℃存放，得到Ag
‑
MnO2溶液。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0018]1、本专利技术中，通过将待检测样品置于无菌环境中静置一段时间后，再将待测样品加入生理盐水中，混合搅拌均匀后，得到样品液，将样品液静置后投入透明容器内，再向透明容器内加入培养液，进行均质处理，等待均质处理结束后，对混合溶液进行振荡混匀，静置一段时间后，得到混合培养液，将混合培养液接种在培养皿上进行培养，培养结束后收集培养皿中的培养物，得到检测物，将检测物转移到检测皿中，加入检测试剂，振荡混合均匀后，再滴入显色剂，继续振荡混合均匀，静置后，观察检测皿中培养物的颜色，若检测皿中出现粉红色，则表明样品中存在金黄色葡萄球菌，检测过程方便快捷，耗费时间较少。
具体实施方式
[0019]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术，本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0021]实施例，本专利技术提供一种技术方案：
[0022]一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括以下步骤：
[0023]S1，将待检测样品置于35
‑
38℃的无菌环境中静置15—18min，再将待测样品加入生理盐水中，混合搅拌均匀后，得到样品液，将样品液静置10—15min后，把样品液投入透明容器内，再向透明容器内加入培养液，在30
‑
40℃的条件下进行均质处理，且均质时间为3—6min；
[0024]S2，等待均质处理结束后，对混合溶液进行振荡混匀，并在40
‑
43℃的条件下静置
80—100min，得到混合培养液，将混合培养液接种在培养皿上进行培养，培养结束后收集培养皿中的培养物，得到检测物；
[0025]S3，将检测物转移到检测皿中，加入检测试剂，振荡混合均匀后，再滴入显色剂，继续振荡混合均匀，静置10—15min后，观察检测皿中培养物的颜色，若检测皿中出现粉红色，则表明样品中存在金黄色葡萄球菌。
[0026]进一步的，所述S1中生理盐水与待测样品的质量比为3∶7.5，混合搅拌的速率为20
‑
50r/min、混合搅拌的时长为5—10min，透明容器使用前需在120
‑
150℃的条件下进行5—8min的高温消毒杀菌处理。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将待检测样品置于35
‑
38℃的无菌环境中静置15—18min，再将待测样品加入生理盐水中，混合搅拌均匀后，得到样品液，将样品液静置10—15min后，把样品液投入透明容器内，再向透明容器内加入培养液，在30
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40℃的条件下进行均质处理，且均质时间为3—6min；S2，等待均质处理结束后，对混合溶液进行振荡混匀，并在40
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43℃的条件下静置80—100min，得到混合培养液，将混合培养液接种在培养皿上进行培养，培养结束后收集培养皿中的培养物，得到检测物；S3，将检测物转移到检测皿中，加入检测试剂，振荡混合均匀后，再滴入显色剂，继续振荡混合均匀，静置10—15min后，观察检测皿中培养物的颜色，若检测皿中出现粉红色，则表明样品中存在金黄色葡萄球菌。2.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，其特征在于：所述S1中生理盐水与待测样品的质量比为3∶7.5，混合搅拌的速率为20
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50r/min、混合搅拌的时长为5—10min，透明容器使用前需在120
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150℃的条件下进行5—8min的高温消毒杀菌处理。3.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，其特征在于：所述S1中培养液由氯化钠肉汤、氯化钠胰酪胨大豆肉汤以及增菌剂按照质量比为1∶1∶1.5混合制成，增菌剂由蛋白胨、牛肉浸出粉、低聚己糖、酵母浸粉以及丙酮酸钠按照摩尔质量比为3∶1∶0.2∶0.5∶0.1混合制成，培养液与样品液的质量比为1∶2。4.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法，其特征在于：所述S2中细菌培养的温度为35
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38℃、培养时长为1.5—3h，混合培养液在培养皿中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张林吉，任士飞，张青青，昌丽莉，乔丹丹，贾燕，陈永亮，孙朋，王兵，
申请(专利权)人：徐州生物工程职业技术学院，
类型：发明
国别省市：