一种制造技术

本发明专利技术涉及一种

【技术实现步骤摘要】
一种
β
冠状病毒重组嵌合抗原、其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种
β
冠状病毒重组嵌合抗原
、
其相关产品
、
制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]冠状病毒属于冠状病毒科，冠状病毒科被分为四个冠状病毒属：
Alpha
冠状病毒
、Beta
冠状病毒
、Gamma
冠状病毒和
Delta
冠状病毒，其中
Alpha
‑
和
Beta
‑
冠状病毒属的冠状病毒主要感染哺乳动物
。SARS
‑
CoV
和
SARS
‑
CoV
‑2同属
Beta
冠状病毒属
、Sarbecovirus
亚属，它们都是具有囊膜的正链
RNA
病毒；此外，动物源性
SARS
相关冠状病毒
RaTG13、LYRa11、Pangolin GX、Pangolin GD、WIV1
也属于
Sarbecovirus
亚属；这些病毒能够广泛感染人和动物，具有高致命性，因此，开发相应疫苗有着重要意义
。
[0003]表面刺突蛋白
(S
蛋白
)
是冠状病毒的主要中和抗原
。SARS
‑
CoV、SARS<br/>‑
CoV
‑2的
S
蛋白的受体结合区
(Receptor Binding Domain,RBD)
被认为是诱导机体产生中和抗体的最主要的抗原靶区域
。RBD
作为疫苗能够将机体刺激产生的中和抗体更加聚焦在针对病毒的受体结合，可以提高疫苗的免疫原性和免疫效率
。
目前认为，
SARS
‑
CoV
和
SARS
‑
CoV
‑2等
Sarbecovirus
亚属冠状病毒可能通过其
RBD
与宿主细胞受体
ACE2
结合而进入细胞
。
[0004]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术
。

技术实现思路

[0005]专利技术目的
[0006]本专利技术的目的在于提供一种广谱且免疫原性好的
β
冠状病毒重组嵌合抗原
、
其相关疫苗产品及其制备方法和应用
。
[0007]解决方案
[0008]为实现本专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种
β
冠状病毒重组嵌合抗原，所述
β
冠状病毒重组嵌合抗原的氨基酸序列按照从
N
端到
C
端的顺序包括：按照
(A
‑
B)
‑
C
‑
(A
’‑
B
’
)
样式排列的氨基酸序列，其中：
[0010]A
‑
B
表示新型冠状病毒
Omicron
变异株
BA.1
亚型或
BA.2
亚型
S
蛋白
RBD
结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，
[0011]A
’‑
B
’
表示严重呼吸综合征冠状病毒
S
蛋白
RBD
结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，并且，
[0012]C
表示连接子
(GGS)n
，其中，
n
为0～
10
之间的整数
。
[0013]对于上述
β
冠状病毒重组嵌合抗原：
[0014]作为优选，
A
‑
B
表示选自以下的氨基酸序列：
SEQ ID NO:1
，
SEQ ID NO:2
，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；
[0015]作为优选，
A
’‑
B
’
表示如
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；
[0016]作为优选，所述连接子
(GGS)n
中，
n
为0～5之间的整数，更优选为
0。
[0017]进一步优选地，
A
‑
B
表示如
SEQ ID NO:1
或如
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列；和
/
或，
A
’‑
B
’
表示如
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列；
[0018]更进一步优选地，所述
β
冠状病毒重组嵌合抗原具有选自以下的氨基酸序列：
SEQ ID NO:5
，
SEQ ID NO:6。
[0019]在可行的优选实施方案中，所述
β
冠状病毒重组嵌合抗原的
N
端还包括信号肽；优选地，所述信号肽具有如
SEQ ID NO:7
所示的氨基酸序列；
[0020]在可行的优选实施方案中，所述
β
冠状病毒重组嵌合抗原的
C
端还包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
β
冠状病毒重组嵌合抗原，其特征在于：所述
β
冠状病毒重组嵌合抗原的氨基酸序列按照从
N
端到
C
端的顺序包括：按照
(A
‑
B)
‑
C
‑
(A
’‑
B
’
)
样式排列的氨基酸序列，其中：
A
‑
B
表示新型冠状病毒
Omicron
变异株
BA.1
亚型或
BA.2
亚型
S
蛋白
RBD
结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，
A
’‑
B
’
表示严重呼吸综合征冠状病毒
S
蛋白
RBD
结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列，并且，
C
表示连接子
(GGS)n
，其中，
n
为0～
10
之间的整数
。2.
根据权利要求1所述的
β
冠状病毒重组嵌合抗原，其特征在于：
A
‑
B
表示选自以下的氨基酸序列：
SEQ ID NO:1
，
SEQ ID NO:2
，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；和
/
或，
A
’‑
B
’
表示如
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％，
92
％，
95
％，
96
％，
97
％，
98
％或
99
％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；和
/
或，所述连接子
(GGS)n
中，
n
为0～5之间的整数
。3.
根据权利要求2所述的
β
冠状病毒重组嵌合抗原，其特征在于：
A
‑
B
表示如
SEQ ID NO:1
或如
SEQ ID NO:2
的氨基酸序列；和
/
或，
A
’‑
B
’
表示如
SEQ ID NO:4
的氨基酸序列；优选地，所述
β
冠状病毒重组嵌合抗原具有选自以下的氨基酸序列：
SEQ ID NO:5
，
SEQ ID NO:6。4.
根据权利要求1‑3任一项所述的
β
冠状病毒重组嵌合抗原，其特征在于：所述
β
冠状病毒抗原的
N
端还包括信号肽；优选地，所述信号肽具有如
SEQ ID NO:7
所示的氨基酸序列；和
/
或，所述
β
冠状病毒抗原的
C
端还包括组氨酸标签
。5.
一种如权利要求1‑3之一所述的
β
冠状病毒重组嵌合抗原的制备方法，其包括以下步骤：在编码权利要求1‑3之一所述的
β
冠状病毒重组嵌合抗原的核苷酸序列的5’
端加入编码信号肽的序列，3’
端加上编码组氨酸标签的序列，进行克隆表达，筛选正确的重组子，然后转染表达系统的细胞进行表达，表达后收集细胞上清，纯化得到
β
冠状病毒重组嵌合抗原
。6.
根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述表达系统细胞为哺乳动物细胞
、
昆虫细胞
、
酵母细胞或细菌细胞；可选地，所述哺乳动物细胞为
HEK293T
细胞
、293F
系列细胞或
CHO
细胞；进一步可选地，所述
293F
系列细胞为
HEK293F
细胞
、Freestyle293F
细胞或
Expi293F
细胞；可选地，所述昆虫细胞为
sf9
细胞
、Hi5
细胞
、sf21
细胞或
S2
细胞；可选地，所述酵母细胞为毕赤酵母细胞或者由其改造的酵母细胞；可选地，所述细菌细胞为大肠杆菌细胞
。7.
一种多核苷酸，其编码如权利要求1‑4之一所述的
β
冠状病毒重组嵌合抗原
。8.
根据权利要求7所述的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸为
DNA
或
mRNA
；优选地，所述多核苷酸为如
SEQ ID NO:9
或
10
所示的
DNA
序列；优选地，所述多核苷酸为如
SEQ ID NO:11
或
12
所示的
mRNA
序列
。9.
一种核酸构建体，其包含如权利要求7或8所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件
。
10.
一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：高福，赵欣，戴连攀，张蓉，阮文静，李德栋，刘志达，崔庆为，
申请(专利权)人：山西高等创新研究院，
类型：发明
国别省市：