用于鉴定检材来源的一步法RT-PCR多重扩增体系及其使用的引物组合制造技术

本发明专利技术公开了用于鉴定检材来源的一步法RT

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定检材来源的一步法RT
‑
PCR多重扩增体系及其使用的引物组合


[0001]本专利技术属于法医学
，具体涉及用于鉴定检材来源的一步法RT
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PCR多重扩增体系及其使用的引物组合，检材来源外周血、月经血、精液、唾液和/或阴道分泌液。

技术介绍

[0002]体液斑迹类检材是犯罪现场常见的生物检材，其组织属性来源的准确判定有助于犯罪现场重建、案件性质判定及案件审判，是法医物证研究的重要内容。通过鉴别案发现场体液斑迹的组织来源，可推断案发现场可能发生过的犯罪活动，从而为案发现场的重建及案件的侦破提供有力的证据支持。案件现场常见的体液包括外周血、月经血、唾液、精液、阴道分泌液等。血液是案发现场最常见也是最重要的检材之一，血液与非血液类样本最大的不同在于血液中含有大量的血细胞，而外周血与月经血虽然均含有大量红细胞，但与外周血相比，月经血中还含有大量的子宫内膜碎片、子宫颈粘液和阴道分泌物等混合物。现场血液类检材是属于外周血还是月经血是非常重要的法庭科学问题，往往对案件定性及重建案发现场、提供法庭证据具有十分重要的意义；尤其是针对性侵案件、女性失踪案以及某些伤害案中，女性受害者称因受暴力攻击出现血尿，在这种情况下，需要确定尿液中的血细胞来源是否存在月经血污染。外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌液是案发现场最常见的五种体液，五种体液的鉴别对案发现场重建及案件侦破具有重要意义，目前，五种体液的准确鉴别仍是一个挑战。
[0003]传统的体液鉴定如生化免疫法、镜检法等无法满足法庭科学的要求。基于mRNA分析进行体液斑迹组织来源的鉴定，因具有高灵敏度、高特异性、与DNA分析兼容等优势受到研究者的广泛关注，逐渐被国内外法庭科学接受，有望成为人体液斑迹组织属性来源鉴定的常规方法。常规RT
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PCR对mRNA进行检测需先进行逆转录(reverse transcription，RT)生成cDNA，再对cDNA进行聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)。一步法RT
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PCR将逆转录与PCR扩增结合在一起，使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下顺次发挥作用，单管内完成逆转录和PCR扩增两步反应，用于mRNA检测可大幅简化操作流程，缩短实验时间。但检测哪些体液特异表达基因可以区分外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌液？用于扩增的基因数目越多，引物间相互抑制情况越复杂，如何设计并合成大小适宜的引物？开发一步法多重荧光mRNA
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PCR体液鉴定体系具有重要价值。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是快速、高效的鉴定待测检材来源于外周血、月经血、精液、唾液和阴道分泌液中的哪一种或哪一种。
[0005]本专利技术首先保护引物组合，可包括引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6、引物7、引物8、引物9、引物10、引物11、引物12、引物13、引物14、引物15、引物16、引物17、引物18、引物19、引物20、引物21、引物22、引物23、引物24、引物25和引物26；
[0006]引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
[0007]引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
[0008]引物3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
[0009]引物4的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
[0010]引物5的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
[0011]引物6的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
[0012]引物7的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
[0013]引物8的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
[0014]引物9的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；
[0015]引物10的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
[0016]引物11的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；
[0017]引物12的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；
[0018]引物13的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；
[0019]引物14的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；
[0020]引物15的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；
[0021]引物16的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；
[0022]引物17的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；
[0023]引物18的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示；
[0024]引物19的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示；
[0025]引物20的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示；
[0026]引物21的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示；
[0027]引物22的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示；
[0028]引物23的核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示；
[0029]引物24的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示；
[0030]引物25的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示；
[0031]引物26的核苷酸序列如SEQ ID NO:26所示。
[0032]所述引物组合具体可由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6、引物7、引物8、引物9、引物10、引物11、引物12、引物13、引物14、引物15、引物16、引物17、引物18、引物19、引物20、引物21、引物22、引物23、引物24、引物25和引物26组成。
[0033]上述任一所述的引物组合中，引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6、引物7、引物8、引物9、引物10、引物11、引物12、引物13、引物14、引物15、引物16、引物17、引物18、引物19、引物20、引物21、引物22、引物23、引物24、引物25和引物26的摩尔比可为0.20：0.20：0.25：0.25：0.06：0.06：2.00：2.00：2.00：2.00：0.04：0.04：0.25：0.25：0.40：0.40：0.40：0.40：2.00：2.00：1.00：1.00：0.025：0.025：0.025：0.025。
[0034]上述任一所述的引物组合中，引物1、引物3、引物5、引物7、引物9、引物11、引物13、引物15、引物17、引物19、引物21、引物23和引物25均用荧光标记。
[0035]上述任一所述的引物组合中，引物1、引物3和引物5用FAM标记。引物7和引物9用HEX标记。引物11和引物13用L552标记。引物15和引物17用LR600标记。引物19、引物21、引物23和引物25用TET
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592标记。
[0036]本专利技术还保护一种鉴定待测检材来源于外周血、月经血、精液、唾液和/或阴道分泌液的多重扩增体系，包括上述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物组合，包括引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6、引物7、引物8、引物9、引物10、引物11、引物12、引物13、引物14、引物15、引物16、引物17、引物18、引物19、引物20、引物21、引物22、引物23、引物24、引物25和引物26；引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；引物3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；引物4的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；引物5的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；引物6的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；引物7的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；引物8的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；引物9的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；引物10的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；引物11的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；引物12的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；引物13的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；引物14的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；引物15的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；引物16的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；引物17的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；引物18的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示；引物19的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示；引物20的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示；引物21的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示；引物22的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示；引物23的核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示；引物24的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示；引物25的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示；引物26的核苷酸序列如SEQ ID NO:26所示。2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于：引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6、引物7、引物8、引物9、引物10、引物11、引物12、引物13、引物14、引物15、引物16、引物17、引物18、引物19、引物20、引物21、引物22、引物23、引物24、引物25和引物26的摩尔比为0.20：0.20：0.25：0.25：0.06：0.06：2.00：2.00：2.00：2.00：0.04：0.04：0.25：0.25：0.40：0.40：0.40：0.40：2.00：2.00：1.00：1.00：0.025：0.025：0.025：0.025。3.根据权利要求1或2所述的引物组合，其特征在于：引...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵一霞，孙启凡，胡胜，季安全，叶健，
申请(专利权)人：公安部鉴定中心，
类型：发明
国别省市：