t-PAI制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及t

【技术实现步骤摘要】
t
‑
PAI
·
C检测试剂盒制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及t
‑
PAI
·
C检测试剂盒制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]组织型纤溶酶原激活物(Tissue
‑
type plasminogenactivator，t
‑
PA)与纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1(Plasminogen activator inhibitor
‑
1，PAI
‑
1)以1：1的比例形成组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物(tissue
‑
type plasminogen activator
‑
plasminogen activator inhibitor
‑
1 complex，t
‑
PAI
·
C)，是调节机体凝血与纤溶的重要因子。
[0003]组织型纤溶酶原激活物是主要由血管内皮细胞合成的一种糖蛋白，可以激活纤溶酶原，使其转变为纤溶酶，降解纤维蛋白。
[0004]纤溶酶原激活物抑制剂包括纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1(PAI
‑
1)和纤溶酶原激活物抑制剂
‑
2(PAI
‑
2)。PAI
‑
1是主要由血管内皮细胞合成的一种糖蛋白，在灭活组织型纤溶酶原激活物，抑制纤溶的发生方面起主要作用。
[0005]t
‑
PA与PAI
‑
1的作用部位是在其轻链的赖氨酸296～天冬氨酸304之间。正常情况下，血液循环中的大多数t
‑
PA与PAI
‑
1以1：1的比例形成复合物，少量处于游离状态。血小板α颗粒中贮存着大量PAI
‑
1，当血管内皮细胞受到损伤时，血小板被凝血酶激活，PAI
‑
1释放至血小板α颗粒表面，t
‑
PA表达量随之变化，造成t
‑
PAI
·
C浓度的异常。冠心病的许多危险因子诸如吸烟、高血压、糖尿病、肥胖等所伴有的血胰岛素增高、血中甘油三酯升高、高密度脂蛋白下降、高血糖等都可直接刺激血管内皮细胞PAI
‑
1的转录和分泌，此外，肿瘤病人中也常伴随PAI
‑
1的升高，这均可造成t
‑
PAI
·
C浓度的异常。
[0006]组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物可作为心血管疾病、肿瘤等疾病的早期检测及愈后分析的参考指标，与TAT、TM等联合检测能提升静脉血栓栓塞、弥漫性血管内凝血等的预警效能。
[0007]目前，市场上组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物检测使用的多为酶标板，适用于全自动检测分析仪(化学发光法)的检测组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物的试剂种类较少，操作步骤较多，耗时长。随着该诊断项目越来越受到重视，市场需求也在急剧增加。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术提供了t
‑
PAI
·
C检测试剂盒制备方法及其应用。本专利技术提供的检测试剂中，当样本中含有组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物时，包被磁微粒的抗体、标记有酶的抗体与组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物发生免疫反应，形成连接包被磁微粒的抗体
‑
组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物
‑
标记有酶的抗体“三明治”夹心免疫复合物；以磁微粒为载体，通过磁场吸附该免疫复合物，用清洗液清洗掉未反应的物质，得到包被磁微粒的抗体
‑
组织型纤溶酶原
激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物
‑
标记有酶的抗体“三明治”夹心免疫复合物；通过加入化学发光底物液，“三明治”夹心免疫复合物上的酶作用于发光底物进而发光，通过检测发光信号，计算样本中组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物浓度。本专利技术试剂各组分较为稳定，重复性好，采用一步法，操作简单。
[0009]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0010]本专利技术提供了检测试剂，包括：抗体包被的磁微粒和酶标记的抗体；
[0011]所述抗体包括：组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物抗体。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述磁微粒包括：氨基磁微粒或羧基磁微粒。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述磁微粒为羧基磁微粒。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述酶包括：辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述酶为碱性磷酸酶。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述抗体包被的磁微粒的终浓度为5～10mg/mL；所述酶标记的抗体的终浓度为0.5～1μg/mL。
[0017]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述抗体包被的磁微粒的终浓度为5mg/mL和/或10mg/mL。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述酶标记的抗体的终浓度为0.5μg/mL和/或1μg/mL。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂，还包括：0.01～200mM金属离子和0.05％～15％(w/v)稳定剂。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，还包括：0.5～150mM金属离子和0.5％～2％(w/v)稳定剂。
[0021]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述金属离子包括：镁离子、锌离子、铝离子、锰离子、钠离子、钾离子和/或铜离子中的一种或多种；
[0022]所述稳定剂包括：牛血清白蛋白、氨基酸、多羟基化合物和/或聚合物中的一种或多种。
[0023]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述聚合物包括：聚乙烯吡咯烷酮
‑
10、聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮P5288、聚乙烯醇、聚氧化乙烯、聚乙二醇单甲醚、TritonX
‑
100、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测试剂，其特征在于，包括：抗体包被的磁微粒和酶标记的抗体；所述抗体包括：组织型纤溶酶原激活物
‑
纤溶酶原激活物抑制剂
‑
1复合物抗体。2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述抗体包被的磁微粒的终浓度为5～10mg/mL；所述酶标记的抗体的终浓度为0.5～1μg/mL。3.如权利要求1或2所述的检测试剂，其特征在于，还包括：0.01～200mM金属离子和0.05％～15％(w/v)稳定剂。4.如权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述金属离子包括：镁离子、锌离子、铝离子、锰离子、钠离子、钾离子和/或铜离子中的一种或多种；所述稳定剂包括：牛血清白蛋白、氨基酸、多羟基化合物和/或聚合物中的一种或多种。5.如权利要求4所述的检测试剂，其特征在于，所述聚合物包括：聚乙烯吡咯烷酮
‑
10、聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮P5288、聚乙烯醇、聚氧化乙烯、聚乙二醇单甲醚、Triton X
‑
100、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇12000、聚丙二醇2000中的一种或多种。6.如权利要求1至5任一项所述的检测试剂，其特征在于，还包括：磁微粒缓冲体系和/或酶标记物缓冲体系。7.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，樊曼曼，
申请(专利权)人：上海太阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：