一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，所述免疫试纸条包括底板；对称固定在底板上的NC膜；对称固定在NC膜两端的金标/乳标垫和吸收垫；以及搭接在金标/乳标垫上的样品垫；其中，所述NC膜上各设置三条检测线及一条质控线，六条检测线上分别包被有各碳青霉烯酶的单克隆抗体，质控线上包被有羊抗鼠单克隆抗体；金标/乳标垫上喷涂有胶体金/乳胶微球标记的各单克隆抗体。该试纸条可以同时检测目前临床上常见的碳青霉烯酶(A/B/D类)，具有较高灵敏度和特异度，可在15min内得到可视化结果，适合于床旁即时检测，可广泛应用于临床标本中产碳青霉烯酶细菌的快速鉴定。快速鉴定。快速鉴定。

【技术实现步骤摘要】
一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条


[0001]本技术涉及生物检测领域，具体涉及一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条。

技术介绍

[0002]目前，全球细菌耐药形势日趋严峻，其中尤以耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)最为严重，肠杆菌目细菌对碳青霉烯类的耐药机制以产碳青霉烯酶为主，根据Ambler分类法可分为A类(KPC)、B类(NDM/VIM/IMP)和D类(OXA
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23/OXA
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48
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like)酶。由于不同药物对产生不同碳青霉烯酶菌株的体外抗菌活性不同，比如A类和D类酶的活性可以被新一代β内酰胺酶抑制剂——阿维巴坦抑制，临床用药推荐头孢他啶
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阿维巴坦。但是B类金属酶无法被β
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内酰胺酶抑制剂抑制，需要更换治疗药物如替加环素或多粘菌素，若继续使用阿维巴坦不仅不能清除细菌，反而会增加死亡率。因此对碳青霉烯酶的快速检测并鉴定分型，有助于临床医生及时开展针对性治疗，从而降低患者致残、致死率。
[0003]免疫层析技术(immunochromatography assay，ICA)作为近年来较为热门的非侵入性检测手段，具有操作简便，高灵敏度和高特异度以及成本低廉等优点，适合于现场即时检测(Point of care testing，POCT)。目前指南推荐使用的NG
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Test Carba 5碳青霉烯酶检测试剂盒，可在15min内快速检测KPC、VIM、IMP、NDM、OXA
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48五种常见酶型，覆盖临床约93％该类耐药菌株。但是上述方法并不能检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem
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resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)感染，因为OXA
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23作为介导CRAB耐药的主要碳青霉烯酶，并不在此检测范围中，易造成漏诊和误诊。
[0004]因此我们在前期研究中筛选并制备出针对鲍曼不动杆菌潜在靶向抗原OXA
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23的特异性单克隆抗体，开发出六联检双向免疫层析试纸条，进一步节省了空间和成本，主要检测酶型包括KPC、VIM、IMP、NDM、OXA
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23和OXA
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48，实现了一卡六检。检测范围可覆盖多种细菌包括肠杆菌目细菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等，很好地弥补了现有检测技术的不足。

技术实现思路

[0005]针对当前临床耐碳青霉烯类细菌检测方法的不足，本技术提供了一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，利用免疫层析技术实现临床常见耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌的定性及半定量的快速同步检测，可以实现同步快速检测KPC、NDM、VIM、IMP、OXA
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23和OXA
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48六类碳青霉烯酶；该试纸条操作简单，携带方便，结果判读时间短，可在多种情况下使用。
[0006]本技术解决其技术问题采用的技术方案是：
[0007]本专利技术首先保护一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，包括：
[0008]底板；
[0009]对称固定在底板上的NC膜；
[0010]对称固定在NC膜两端的金标/乳标垫和吸收垫；
[0011]以及搭接在金标/乳标垫上的样品垫；
[0012]其中，所述NC膜上各设置三条检测线及一条质控线，六条检测线上分别包被有各碳青霉烯酶的单克隆抗体，质控线上包被有羊抗鼠单克隆抗体；
[0013]金标/乳标垫上喷涂有胶体金/乳胶微球标记的各单克隆抗体。
[0014]作为本技术的进一步优选，每片NC膜上的各检测线及质控线间隔设置，如可以等间距设置，宽度和间隔可根据实际需要设置，如宽度设为5mm，间隔设为5mm。
[0015]作为本技术的进一步优选，所述单克隆抗体分别为KPC蛋白单克隆抗体，NDM蛋白单克隆抗体，VIM蛋白单克隆抗体，IMP蛋白单克隆抗体，OXA
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23蛋白单克隆抗体和OXA
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48蛋白单克隆抗体。
[0016]作为本技术的进一步优选，胶体金/乳胶微球标记颗粒大小为20～40nm，如20nm，25nm，30nm，35nm，40nm等等。
[0017]作为本技术的进一步优选，试纸条外套塑料卡壳，设有加样孔和结果观察窗，宽度根据实际情况设置，如可以为5mm。
[0018]优选的，前述试纸条还可以装入铝箔包装袋内，形成试纸条产品。
[0019]使用时，待测样品可为分离的单个菌落或者阳性血液标本。
[0020]作为本技术的进一步优选，底板选用PVC底板，NC膜选用美国Millipore135，样品垫选用芬兰Ahlstrom 8964玻璃纤维素膜，金标/乳标垫选用芬兰Ahlstrom 6613聚酯纤维膜，吸收垫选用纤维素滤纸。
[0021]有益效果
[0022]本技术碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，可在一条试纸条上实现对KPC、NDM、VIM、IMP、OXA
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23和OXA
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48六类碳青霉烯酶的同步、快速检测，且操作简单，无需大型设备及仪器，对周围环境及检测人员的专业要求低，检测速度快，可在15min内获得可视化结果，能为临床医生以及研究人员及时提供革兰阴性杆菌碳青霉烯酶型等信息，极大地弥补现阶段临床检验工作的不足，指导临床工作进行及时、针对性地使用抗生素。
附图说明
[0023]图1为免疫层析试纸条检测原理图；
[0024]图2为新型免疫层析试纸条结构层次示意图；
[0025]图3为产品示意图；
[0026]图4为结果判读图；
[0027]1‑
样品垫；2
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金标/乳标垫AB；3
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吸收垫；4
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NC膜AB；5
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PVC底板；6
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质控线；7
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检测线；71
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检测线1；72
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检测线2；73
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检测线3；74
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检测线4；75
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检测线5；76
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检测线6。
具体实施方式
[0028]为了使本技术的内容更容易被清楚的理解，以下结合实施例对本技术做进一步详细说明。现在结合附图对本专利技术作进一步详细的说明。这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本专利技术的基本结构，因此其仅显示与本专利技术有关的构成。
[0029]实施例1
[0030]参见图2和图3，一种碳青霉烯酶快速六联检测免疫层析试纸条，包括PVC底板5、对称固定在底板上的NC膜4；对称固定在NC膜4两端的金标/乳标垫2和吸收垫3；以及搭接在金标/乳标垫上样品垫，所述NC膜4分别设置三条检测线7及一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，其特征在于，底板；对称固定在底板上的NC膜；对称固定在NC膜两端的金标/乳标垫和吸收垫；以及搭接在金标/乳标垫上的样品垫；其中，所述NC膜上各设置三条检测线及一条质控线，六条检测线上分别包被有各碳青霉烯酶的单克隆抗体，质控线上包被有羊抗鼠单克隆抗体；金标/乳标垫上喷涂有胶体金/乳胶微球标记的各单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，其特征在于，所述单克隆抗体分别为KPC蛋白单克隆抗体，NDM蛋白单克隆抗体，VIM蛋白单克隆抗体，IMP蛋白单克隆抗体，OXA
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23蛋白单克隆抗体和OXA
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48蛋白单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的碳青霉烯酶快速六联检测双向免疫层析试纸条，其特征在于，每片NC膜上的各检测线及质控线等间距设置，宽度均为5mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：任建安，吴秀文，李家扬，吴文琦，周志涛，王家杰，吴美琳，田赛，邱明杰，
申请(专利权)人：中国人民解放军东部战区总医院，
类型：新型
国别省市：