一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒及其检测方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒及其检测方法与应用，属于医学及生物化学技术领域，本发明专利技术提供的抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒中包含彼此独立的脱蜡液、染色液和封片液；所述脱蜡液中含有彼此独立的松节油和组织修复液，所述组织修复液由曲拉通100和乙二胺四乙酸组成；所述染色液中含有彼此独立的罗丹明B溶液、金胺O溶液和盐酸酒精溶液。本发明专利技术提供的抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒解决了石蜡组织切片样本中抗酸结核杆菌染色效果不佳的问题，对抗酸结核杆菌的检出率较高。对抗酸结核杆菌的检出率较高。对抗酸结核杆菌的检出率较高。

【技术实现步骤摘要】
一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒及其检测方法与应用


[0001]本专利技术涉及医学及生物化学
，具体涉及一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒及其检测方法与应用。

技术介绍

[0002]结核分枝杆菌检测阳性，是临床诊断结核病的金标准。在结核病的实验室诊断工作中，最常用的标本是痰标本，但由于结核杆菌可以感染肺部以外脏器而造成肺外结核病，在进行临床诊断和实施治疗时也需要对相应病灶部位的适当标本进行检查。一般的样品类型有：痰液、病灶组织、胸腹水、尿液、脑脊液、血液和血清等。目前结核杆菌的实验室检查方法有以下四种：显微镜检查法、分离鉴定、分子生物学检测和免疫学检测。
[0003]目前的脱蜡技术包括将组织切片依次放入二甲苯溶液、无水乙醇溶液、95%乙醇溶液、85%乙醇溶液、蒸馏水中浸泡。采用目前的脱蜡技术进行抗酸结核杆菌染色检测存在较多缺陷，比如，二甲苯毒性较大，长期接触有致癌风险；染色步骤操作复杂；脱蜡后染色经常无法观察到抗酸结核杆菌，检出率较低。
[0004]在目前的抗酸结核杆菌染色检测中，石蜡组织切片的染色效果较差，漏检率较高的问题需要得到解决。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒，解决了石蜡组织切片样本的抗酸结核杆菌染色效果不佳的问题，提高抗酸结核杆菌的检出率。
[0006]本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒，所述试剂盒中含有彼此独立的脱蜡液、染色液和封片液；所述脱蜡液中含有彼此独立的松节油和组织修复液，所述组织修复液由曲拉通100和乙二胺四乙酸组成；所述染色液中含有彼此独立的罗丹明B溶液、金胺O溶液和盐酸酒精溶液。
[0007]本专利技术抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒的作用原理：松节油可将石蜡组织上的石蜡溶解脱除，再由修复液进行组织结构修复，脱蜡完成后，利用金胺O溶液和罗丹明B对抗酸性菌的高亲和力，在室温条件下，标本中的抗酸性菌经过金胺O和罗丹明B染色，再利用盐酸酒精溶液脱色；在这个过程中，样品中经染色的抗酸性菌能够抵抗酸性乙醇的脱色处理，在荧光显微镜的蓝光照射激发下，抗酸性菌呈明亮的金色荧光，而其他细菌及背景中的物质呈暗色，实现高效准确检测。
[0008]优选的，所述组织修复液中，所述曲拉通100的终体积百分浓度为0.1
‑
5%；所述乙二胺四乙酸的终浓度为1mmol/L
‑
0.1mol/L。
[0009]优选的，所述组织修复液中，所述曲拉通100的终体积百分浓度为1
‑
3%；所述乙二胺四乙酸的终浓度为10
‑
100mmol/L。
[0010]优选的，所述罗丹明B溶液的体积百分浓度为0.05
‑
2%；
金胺O溶液的体积百分浓度为0.01
‑
0.05%；所述盐酸酒精溶液中盐酸的体积百分浓度为1
‑
5%，所述盐酸酒精溶液中酒精的体积百分浓度为70~80%。
[0011]通过上述优选的技术方案，罗丹明B溶液和金胺O溶液均为染料，染料浓度过高可能会观察到染料析出，影响观察被染色的抗酸结核杆菌，染料浓度过低则影响染色的荧光强度，不便于观察到被染色的抗酸结核杆菌；盐酸酒精浓度过低会影响洗脱效果，过高则可能会导致洗脱过度，不能实现应有的准确检测。
[0012]优选的，所述封片液为中性树胶。
[0013]本专利技术还提供了一种检测抗酸结核杆菌的方法，包括以下步骤：将组织切片放入松节油中浸泡，再放入组织修复液中浸泡；将浸泡后的组织切片放置于玻片上，然后向组织切片上滴加罗丹明B溶液浸泡并冲洗；再滴加金胺O溶液浸泡并冲洗；再滴加盐酸酒精溶液浸泡并冲洗；待玻片干燥后向样本滴加封片液进行封片处理；所述组织修复液由曲拉通100和乙二胺四乙酸组成。
[0014]优选的，所述组织切片放入松节油中浸泡的时间为5
‑
20min；放入组织修复液中浸泡的时间为8
‑
12min。
[0015]优选的，所述罗丹明B溶液浸泡的时间为1
‑
2min；所述金胺O溶液浸泡的时间为12
‑
18min；所述盐酸酒精溶液浸泡的时间为2
‑
3min。
[0016]本专利技术还提供了上述抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒在制备检测抗酸结核杆菌试剂中的应用。
[0017]本专利技术还提供了上述制备方法得到的抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒在制备检测抗酸结核杆菌试剂中的应用。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本方案在脱蜡技术中通过使用松节油和修复液，当石蜡组织上的石蜡脱除后，再进行组织结构的修复，使用松节油能够提升石蜡的脱除效果，然后使用特定配方的组织修复液进行组织结构的修复，能够有利于增强后续的染色效果。
附图说明
[0019]图1是本专利技术实施例1的阳性检测结果图；图2是本专利技术实施例2的阳性检测结果图；图3是本专利技术实施例3的阳性检测结果图；图4是本专利技术实施例4的阳性检测结果图；图5是本专利技术实施例5的阳性检测结果图。
具体实施方式
[0020]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术的实施例及附图，对本专利技术的技术专利技术进行进一步详细地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0021]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。
[0022]实施例1收集120例抗酸结核杆菌阳性石蜡切片组织样本，按以下步骤进行脱蜡染色：S1、取结核抗酸杆菌阳性石蜡切片组织样本，将组织样本放入松节油中浸泡两次，单次浸泡10min，再将组织样本放入组织修复液中浸泡10min，组织修复液中含有1%曲拉通100以及10mmol/L的（乙二胺四乙酸）EDTA（pH9.0）。
[0023]S2、组织样本脱蜡后，将组织样本放置在玻片上，然后向组织切片上滴加2滴0.1%罗丹明B溶液覆盖浸泡1min后流水冲洗；再向组织切片上滴加2滴0.05%金胺O溶液覆盖浸泡15min后流水冲洗；再向组织切片上滴加2滴3%盐酸酒精溶液覆盖浸泡2min后流水冲洗，晾干。
[0024]S3、待玻片干燥后向样本滴加一滴中性树胶封片，然后进行观察。
[0025]实施例1的阳性检测结果见图1。
[0026]实施例2收集120例抗酸结核杆菌阳性石蜡切片组织样本，按以下步骤进行脱蜡染色：S1、取结核抗酸杆菌阳性石蜡切片组织样本，将组织样本放入松节油中浸泡两次，单次浸泡10min，再将组织样本放入组织修复液中浸泡10min，组织修复液中含有1%曲拉通100以及10mmol/L的（乙二胺四乙酸）EDTA（pH9.0）。
[0027]S2、组织样本脱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有彼此独立的脱蜡液、染色液和封片液；所述脱蜡液中含有彼此独立的松节油和组织修复液，所述组织修复液由曲拉通100和乙二胺四乙酸组成；所述染色液中含有彼此独立的罗丹明B溶液、金胺O溶液和盐酸酒精溶液。2.根据权利要求1所述的抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒，其特征在于，所述组织修复液中，所述曲拉通100的终体积百分浓度为0.1
‑
5%；所述乙二胺四乙酸的终浓度为1mmol/L
‑
0.1mol/L。3.根据权利要求2所述的抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒，其特征在于，所述组织修复液中，所述曲拉通100的终体积百分浓度为1
‑
3%；所述乙二胺四乙酸的终浓度为10
‑
100mmol/L。4.根据权利要求1~3任一项所述的抗酸结核杆菌荧光染色试剂盒，其特征在于，所述罗丹明B溶液的体积百分浓度为0.05
‑
2%；金胺O溶液的体积百分浓度为0.01
‑
0.05%；所述盐酸酒精溶液中盐酸的体积百分浓度为1
‑
5%，所述盐酸酒精溶液中酒精的体积百分浓度为70~80%。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴自学，孙康俊，邓玲玲，潘为民，
申请(专利权)人：江苏美克医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：