一种源于真菌的天然制造技术

本发明专利技术公开一种源于真菌的天然

【技术实现步骤摘要】
一种源于真菌的天然、广谱、高效抗菌肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种源于真菌的天然
、
广谱
、
高效抗菌肽及其应用
。

技术介绍

[0002]抗菌肽
(Antimicrobial peptides
，
AMPs)
是一类广泛存在于自然界生物体内的小分子多肽物质，一般含有
10
‑
80
个氨基酸，对多种微生物包括细菌
、
真菌
、
病毒等具有较好的抑制或者杀伤作用
。
随着近年来抗生素的过度使用和滥用，细菌耐药乃至多重耐药频繁发生，成为当今细菌感染治疗面临的瓶颈难题
。
抗菌肽因其抗菌活性高
、
抑菌谱广
、
不易产生耐药性等特点，为寻找抗生素替代品的选择提供候选
。
[0003]抗菌肽来源广泛，包括动物
、
植物和微生物
。
真菌作为一种新兴的具有治疗潜力的多肽来源，其种属多样性成为新型抗菌肽挖掘的优势选择
。
人体肠道是细菌与真菌共生的重要场所，真菌与细菌间存在复杂的协同和拮抗作用
。
基于微生物间的共生关系，通过综合计算和实验方法快速表征，从真菌基因组内筛选广谱
、
高效的新型抗菌肽对防御临床细菌感染等应用具有重要意义
。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本专利技术的目的是提供了一种源于真菌的天然
、
广谱
、
高效抗菌肽及其应用
。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种广谱
、
高效的源自真菌的抗菌肽，所述抗菌肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0007]基于上述技术方案，进一步地，所述的抗菌肽的分子量为
1808.25Da
，等电点为
12.02
，不稳定性指数为
31.03
，平均亲水性
‑
0.377
，疏水性
49.12
，跨膜活性为
‑
7.5kcal/mol。
[0008]本专利技术另一方面提供一种药物组合物，所述的药物组合物包含有效量的上述的抗菌肽
。
[0009]基于上述技术方案，进一步地，所述的药物组合物还包含药学上可接受的载体和
/
或赋形剂，所述的药学上可接受的载体和
/
或赋形剂包括填充剂
、
粘合剂
、
润湿剂
、
崩解剂
、
吸收促进剂
、
表面活性剂
、
吸附载体
、
润滑剂和矫味剂
。
[0010]本专利技术另一方面提供一种包含上述的药物组合物的药物制剂
。
[0011]基于上述技术方案，进一步地，所述的药物制剂包括片剂
、
胶囊剂
、
颗粒剂
、
滴丸剂
、
口服液体制剂
、
注射剂和气雾剂
。
[0012]本专利技术还提供上述的抗菌肽
、
药物组合物
、
药物制剂在制备预防或治疗细菌感染的药物中的应用
。
[0013]基于上述技术方案，进一步地，所述的应用包括预防或治疗皮肤细菌感染和肠道
aureus Newman)
和革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌
(Pseudomonas aeruginosa PAO1)、
大肠杆菌
(Escherichia coli JM109)、
鲍曼不动杆菌
(Acinetobacter baumannii ATCC19606)、
肺炎克雷伯菌
(Klebsiella pneumoniae 700603)、
人伤寒沙门氏菌
(Salmonella typhi Ty2)
以及志贺氏菌
(Shigella m90T)。
[0031]实验采用二倍梯度稀释的方法，测定最小抑菌浓度即能够抑制细菌生长
、
繁殖的最低药物浓度
。
[0032]MIC
值测定过程如下：
[0033]1.
准备好新划线培养的细菌菌落，划取少许细菌克隆置于
1.5mL
无菌水中，使用紫外分光光度计调节菌液浓度为
OD
600
＝
0.4
，用适当体积的
MH
培养基稀释菌液
200
倍，调整至
OD
600
＝
0.002
；混匀，分装
75
μ
L
菌液
/
孔至
96
孔板中；
[0034]2.
使用
DMSO
溶解真菌抗菌肽
MC
，浓度为
5mg/mL
；使用
MH
培养基依次配置
300
μ
L
二倍梯度稀释的抗菌肽，浓度梯度为0至
200
μ
g/mL
；移液枪吹打混匀，依次加入
75
μ
L/
孔至含有待测菌液的
96
孔板中，每个浓度设置三个孔重复；
[0035]3.
将
96
孔板置于
37℃
，
180rpm
恒温摇床中培养
24h
；
[0036]4.
酶标仪检测菌液在
600nm
处的光吸收值，以检测不到细菌生长的孔和相邻孔的样品浓度的平均值作为最小抑菌浓度，即
MIC
值
。
[0037]经三次重复实验验证真菌抗菌肽
MC
的抑菌活性如表1所示，其
MIC
值在
12.5
‑
25
μ
g/mL。
[0038]表
1.
真菌抗菌肽
MC
的抑菌活性结果
[0039][0040]实施例3：
[0041]采用实施例2中
MIC
值测定方法对临床耐药分离菌进行抑菌实验测定
[0042]本实施例中所涉及到的菌株包括革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus MU50)
和革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌
(Pseudomonas aeruginosa 57006)、
大肠杆菌
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种广谱
、
高效的源自真菌的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。2.
根据权利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，所述的抗菌肽的分子量为
1808.25Da
，等电点为
12.02
，不稳定性指数为
31.03
，平均亲水性
‑
0.377
，疏水性
49.12
，跨膜活性为
‑
7.5kcal/mol。3.
一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含有效量的权利要求1或2所述的抗菌肽
。4.
根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还包含药学上可接受的载体和
/
或赋形剂，所述的药学上可接受的载体和
/
或赋形剂包括填充剂
、
粘合剂
、
润湿剂
、
崩解剂
、
吸收促进剂
、
表面活性剂
、
吸附载体
、

【专利技术属性】
技术研发人员：陈实，王芳，吴周方，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：