【技术实现步骤摘要】
Prdx1 IgG中和抗体及其制备方法和在制备急性器官损伤或脓毒症药物中的应用
[0001]本专利技术属于医药领域,具体涉及Prdx1 IgG中和抗体及其制备方法和在制备急性器官损伤或脓毒症药物中的应用。
技术介绍
[0002]急性肝损伤(Acute Liver Injury,以下简称ALI)是由各种原因引起的肝脏损害,其病情发展迅速。研究表明,外源性物质,如病毒感染、滥用酒精或药物以及接触毒素都可能导致ALI。在我国急性肝损伤的首要病因是病毒感染,其次是药物。由于ALI所引起的坏死后型肝硬化不能治愈,不仅严重影响患者的生活质量,同时也给国家带来了沉重的医疗负担。因此预防急性肝损伤对公共卫生非常重要。对于严重ALI,肝移植是最有效的治疗手段之一,但统计表明接受肝移植治疗的患者不足10%。当前国内外对急性肝衰竭的治疗十分有限,病死率非常高。因此,寻找ALI的替代疗法是一项迫切的医疗需求。全球范围内已经开展了大量研究工作以寻找有效的防治ALI的药物,部分在临床使用较长时间,但目前这些药物的治疗效果依然差强人意。
[0003]急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是一种临床常见的综合征,它的发生常伴随着患者住院时间延长,部分患者预后不良进一步发展为慢性肾脏病。全球每年约1300万人发生AKI,约170万人死于AKI及其并发症。AKI可发生于临床多个学科,特别是在ICU中发病率超过50%。在我国,一项大样本多中心流行病学调查数据显示,按照KDIGO AKI的诊断标准和扩展标准,AKI发生率为0. ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种Prdx1 IgG中和抗体,其特征在于,所述Prdx1 IgG中和抗体为抗Prdx1蛋白的单克隆中和抗体或抗Prdx1蛋白的多克隆中和抗体。2.根据权利要求1所述的Prdx1 IgG中和抗体,其特征在于,所述抗Prdx1蛋白的单克隆中和抗体的氨基酸序列包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6中任一个氨基酸序列或多个氨基酸序列的组合,或者包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6中任一个或多个氨基酸序列中的氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有80%以上同源性的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的Prdx1 IgG中和抗体,其特征在于,所述抗Prdx1蛋白的单克隆中和抗体的重链可变区的CDR1区域氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,其重链可变区的CDR2区域氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,其重链可变区的CDR3区域氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;所述抗Prdx1蛋白的单克隆中和抗体的轻链可变区的CDR1区域氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,其轻链可变区的CDR2区域氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示;其轻链可变区的CDR3区域氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。4.根据权利要求3所述的Prdx1 IgG中和抗体,其特征在于,所述抗Prdx1蛋白的单克隆中和抗体包括重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸,其中重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示,轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。5.根据权利要求1所述的Prdx1 IgG中和抗体,其特征在于,所述抗Prdx1蛋白的多克隆中和抗体由以下方法制备得到:采用重组prdx1蛋白作为免疫原,免疫哺乳动物,获得表达Prdx1 IgG中和抗体的哺乳动物,最后从哺乳动物血清中提取和纯化得到抗Prdx1蛋白的多克隆中和抗体。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的Prdx1 IgG中和抗体,其特征在于,所述Prdx1 IgG中和抗体包括兔来源、人来源、小鼠来源、大鼠来源或人鼠嵌合的Prdx1中和抗体。7.一种编码权利要求1
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4、6中任一项所述Prdx1 IgG中和抗体的核酸分子,其特征在于,包括编码所述Prdx1 IgG中和抗体重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸,其中编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示,编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。8.一种如权利要求1
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4、6中任一项所述的Prdx1 IgG中和抗体的制备方法,其特征在于,所述Prdx1 IgG中和抗体为抗Prdx1蛋白的单克隆中和抗体,包括以下步骤:A)以哺乳动物离体肿瘤细胞的cDNA为模板进行PCR扩增,得到目的基因片段Prdx1连接至载体质粒中,转化大肠杆菌,筛选含插入片段的阳性克隆并通过测序验证,得到含有正确的哺乳动物Prdx1基因序列的原核表达质粒;B)将所述原核表达质粒转化于表达宿主菌进行培养,挑取单克隆进行诱导表达得到菌液,纯化得到目的表达蛋白,即为哺乳动物源Prdx1蛋白;C)将纯化后得到的哺乳动物源Prdx1蛋白作为抗原,对免疫动物进行免疫;D)免疫结束后取免疫动物的组织,提取浆细胞与骨髓瘤细胞融合,经次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养后,以所述人源Prdx1抗原包被,ELISA筛选阳性克隆,以有限稀释法进行亚克隆,获得杂交瘤细胞;E)将所述杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔以制备腹水,将腹水进行分离、纯化,得到抗
Prdx1蛋白的单克隆中和抗体。9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:A)以人肿瘤细胞U87MG的cDNA为模板进行PCR扩增,PCR扩增采用的引物如下:PRDX1
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F:CTGCCAAGTGATTGGTGCTTCTG;PRDX1
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R:AATGGTGCGCTTCGGGTCTGAT;获得两端带有酶切位点EcoRI/XhoI的Prdx1基因片段,用EcoRI/XhoI双酶切得到目的基因片段Prdx1;将载体质粒pET22b用EcoRI/XhoI双酶切,琼脂糖凝胶电泳后回收载体片段,与所述目的基因片段Prdx1在T4连接酶作...
【专利技术属性】
技术研发人员:陶立坚,彭张哲,孟婕,阳惠湘,谢艳云,
申请(专利权)人:中南大学湘雅医院,
类型:发明
国别省市:
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