一种磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法。所述检测方法为：分别检测磺酰基磁珠偶联蛋白的混合溶液和磺酰基磁珠偶联伯胺的混合溶液在259～265nm波长的吸光度值，根据磺酰基浓度和吸光度值之间拟合的方程式计算磁珠偶联蛋白的磺酰基总量和磁珠磺酰基总量，磺酰基磁珠的蛋白偶联效率为磁珠偶联蛋白的磺酰基总量除以磁珠磺酰基总量。本发明专利技术通过测定磺酰基磁珠和含氨基的抗体结合后脱离的磺酸盐从而测量磺酰基磁微粒偶联蛋白的效率。本发明专利技术的方法操作简单，无需复杂的操作步骤，通过紫外分光光度计便可准确测量磺酰基磁微粒偶联蛋白的效率。微粒偶联蛋白的效率。微粒偶联蛋白的效率。

【技术实现步骤摘要】
一种磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法。

技术介绍

[0002]自动化高通量是体外诊断技术发展的一个重要方向，通过简单而快速的外加磁场，磁珠可以取代传统材料中的离心和过滤操作，因此功能性修饰磁珠常被用作生物测定和分离的固相材料。
[0003]作为免疫沉降用载体时，磺酰基是一种常用的修饰基团。磁珠微粒表面的磺酰基基团是亲电子活性基团可以与含有氨基的抗体蛋白进行共价结合，随着化学结合的进行，磺酰基会逐渐脱离，磁珠偶联蛋白复合物的亲水性会增强，可以有效的维持偶联蛋白的生物活性并抑制免疫分析时的非特异性吸附。因此准确的磺酰基磁微粒偶联蛋白效率的测定方法对磺酰基磁珠偶联蛋白工艺的优化、提高蛋白偶联效率具有十分重要的意义。另外通过准确的磺酰基磁微粒偶联蛋白效率的测定方法控制每批检测试剂磁珠蛋白的偶联效率也是控制试剂质量的一个重要方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是，提供一种羧基微球偶联蛋白效率的检测方法。主要解决现有技术中磁珠蛋白偶联效率检测方法不准确的问题。
[0005]本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
[0006]一种磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法，该检测方法为：分别检测磺酰基磁珠偶联蛋白的混合溶液和磺酰基磁珠偶联伯胺的混合溶液在259～265nm波长的吸光度值，根据磺酰基浓度和吸光度值之间拟合的方程式计算磁珠偶联蛋白的磺酰基总量和磁珠磺酰基总量，按下式计算磺酰基磁珠的蛋白偶联效率，
[0007][0008]作为优选实施方案，所述拟合方程式的测定方法是：向0.05
‑
0.15M、pH9
‑
10的硼酸缓冲液中加入硫酸铵和甲苯磺酸钠配制不同浓度梯度的甲苯磺酸钠溶液，其中硫酸铵的浓度为1
‑
2mmoL/L、甲苯磺酸钠的浓度梯度范围为0.1
‑
1000mmol/L，测定不同浓度梯度的甲苯磺酸钠溶液在259～265nm波长的吸光度值，利用GraphPad Prism软件将甲苯磺酸钠浓度和吸光度值进行立方样条拟合，得到拟合方程式。
[0009]作为优选实施方案，所述拟合方程式为：Y＝
‑
0.000000552X3+0.0003X2+0.501X
‑
0.0117。
[0010]作为优选实施方案，向0.1M pH9.5的硼酸缓冲液中加入硫酸铵和甲苯磺酸钠配制不同浓度梯度的甲苯磺酸钠溶液，其中硫酸铵的浓度为1.5mmoL/L、甲苯磺酸钠的浓度梯度范围为0.1
‑
1000mmol/L。
[0011]作为优选实施方案，所述磺酰基磁珠为甲苯磺酰基磁珠、氧化硅甲苯磺酰基磁珠或聚苯乙烯甲苯磺酰基磁珠。
[0012]作为优选实施方案，所述磺酰基磁珠偶联蛋白的混合溶液的制备方法为：将磺酰基磁珠用硼酸缓冲液清洗2
‑
4遍，加入待偶联蛋白溶液混匀，待偶联蛋白和磁珠的质量比为1～10ug/mg，然后加入硫酸盐溶液混匀，得到磺酰基磁珠偶联蛋白的混合溶液，其中硫酸盐在混合溶液中的浓度为2.5
‑
3.5M。
[0013]作为优选实施方案，所述硫酸盐为硫酸铵，硫酸铵的浓度为3M。
[0014]作为优选实施方案，所述磺酰基磁珠偶联伯胺的混合溶液的制备方法为：将磺酰基磁珠用硼酸缓冲液清洗2
‑
4遍，加入伯氨基化合物混匀，然后加入硫酸盐溶液混匀，得到磺酰基磁珠偶联伯胺的混合溶液，其中硫酸盐在混合溶液中的浓度为2.5
‑
3.5M。
[0015]作为优选实施方案，所述伯氨基化合物为亚精胺，亚精胺和磁珠的质量比为0.05～0.15g/mg。
[0016]作为优选实施方案，所述硫酸盐为硫酸铵，硫酸铵在混合溶液中的浓度为3M。
[0017]本专利技术通过测定甲苯磺酰基磁珠和含氨基的抗体结合后脱离的对甲苯磺酸盐(反应式如下)，从而测量甲苯磺酰基磁微粒偶联蛋白的效率。
[0018][0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0020]1，本专利技术通过测定磺酰基磁珠和含氨基的抗体结合后脱离的磺酸盐从而测量磺酰基磁微粒偶联蛋白的效率。
[0021]2，本专利技术提出的方法操作简单，无需复杂的操作步骤，通过紫外分光光度计便可准确测量磺酰基磁微粒偶联蛋白的效率。
附图说明
[0022]图1是本专利技术中实施例1中对甲苯磺酰酸钠标准溶液浓度和吸光度值进行立方样条拟合的曲线图。
具体实施方式
[0023]下面结合实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。
[0024]实施例1：甲苯磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法
[0025]S1：对甲苯磺酸钠拟合曲线测定
[0026]向0.1M pH9.5的硼酸缓冲液中加入1.5mmoL/L的硫酸铵，配制用于拟合曲线测定的溶液体系，向该溶液体系中分别加入不同量的对甲苯磺酸钠，配制不同浓度梯度的对甲苯磺酸钠溶液体系。混匀后用紫外分光光度计260nm波长检测。样本信息及检测结果如表1所示：
[0027]表1
[0028][0029][0030]根据表1中的数据利用GraphPad Prism软件将对甲苯磺酸钠浓度和吸光度值进行立方样条拟合曲线分析，拟合的曲线如图1所示。拟合方程式为：Y＝
‑
0.000000552X3+0.0003X2+0.501X
‑
0.0117。
[0031]S2：甲苯磺酰基磁珠偶联蛋白检测
[0032]取1mL混合均匀的甲苯磺酰基磁珠置于磁铁分离器，静置1分钟后小心移出上清液，用900uL 0.1M pH9.5的硼酸缓冲液清洗3次，然后将甲苯磺酰基磁珠分散于900uL 0.1M pH9.5的硼酸缓冲液中，加入2.0uL5mg/mL的NSE蛋白溶液然后涡旋混匀，加入550uL 3M硫酸铵溶液并涡旋混匀。混合溶液37℃混匀18小时，得到1.45mL甲苯磺酰基磁珠偶联蛋白混合溶液。
[0033]取1mL混合均匀的甲苯磺酰基磁珠置于磁铁分离器，静置1分钟后小心移出上清液，用900uL 0.1M pH9.5的硼酸缓冲液清洗3次，然后将甲苯磺酰基磁珠分散于900uL 0.1M pH9.5的硼酸缓冲液中，加入1g亚精胺然后涡旋混匀，加入550uL 3M硫酸铵溶液并涡旋混匀。混合溶液37℃混匀18小时，得到1.45mL甲苯磺酰基磁珠偶联亚精胺混合溶液。
[0034]用紫外分光光度计260nm波长分别检测上述的甲苯磺酰基磁珠偶联蛋白混合溶液和甲苯磺酰基磁珠偶联亚精胺混合溶液的吸光度。
[0035]样本信息及检测结果如表2所示：
[0036]表2
[0037][0038]S3：甲苯磺酰基磁珠偶联蛋白效率计算
[0039]根据S1步骤中甲苯磺酸钠标准溶液浓度和吸光度的拟合方程：Y＝
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法，其特征在于，该检测方法为：分别检测磺酰基磁珠偶联蛋白的混合溶液和磺酰基磁珠偶联伯胺的混合溶液在259～265nm波长的吸光度值，根据磺酰基浓度和吸光度值之间拟合的方程式计算磁珠偶联蛋白的磺酰基总量和磁珠磺酰基总量，按下式计算磺酰基磁珠的蛋白偶联效率，2.根据权利要求1所述的磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法，其特征在于，所述拟合方程式的测定方法是：向0.05
‑
0.15M、pH 9
‑
10的硼酸缓冲液中加入硫酸铵和甲苯磺酸钠配制不同浓度梯度的甲苯磺酸钠溶液，其中硫酸铵的浓度为1
‑
2mmoL/L、甲苯磺酸钠的浓度梯度范围为0.1
‑
1000mmol/L，测定不同浓度梯度的甲苯磺酸钠溶液在259～265nm波长的吸光度值，利用GraphPadPrism软件将甲苯磺酸钠浓度和吸光度值进行立方样条拟合，得到拟合方程式。3.根据权利要求2所述的磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法，其特征在于，所述拟合方程式为：Y＝
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0.000000552X3+0.0003X2+0.501X
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0.0117。4.根据权利要求2所述的磺酰基磁珠偶联蛋白效率的检测方法，其特征在于：向0.1M pH9.5的硼酸缓冲液中加入硫酸铵和甲苯磺酸钠配制不同浓度梯度的甲苯磺酸钠溶液，其中硫酸铵的浓度为1.5mmoL/L、甲苯磺酸钠的浓度梯度范围为0.1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王秀东，杜晔，张亚楠，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：