口腔护理产品和原料的抗氧化功能的检测方法及抗氧化天然产物的筛选技术

本发明专利技术涉及口腔护理产品领域，尤其涉及口腔护理产品和原料的抗氧化功能的检测方法及抗氧化天然产物的筛选。本发明专利技术提供了口腔护理产品的抗氧化功能的检测方法，包括如下步骤：取铺板后的口腔相关细胞与过氧化氢混合，获得模型组；取预处理的待测物与过氧化氢混合后，与铺板后的口腔相关细胞混合，获得实验组；根据模型组和实验组的细胞活性，获得待测物的抗氧化功效。本发明专利技术主要基于氧化应激与口腔健康的关系，建立体外细胞抗氧化功效评价方法，进一步对抗氧化原料进行初步的筛选，最终对口腔护理产品抗氧化功效进行评估，以此保证产品的抗氧化功效，提高抗氧化产品的开发效率，降低功效波动风险，以此推动抗氧化口腔护理产品的发展。发展。

【技术实现步骤摘要】
口腔护理产品和原料的抗氧化功能的检测方法及抗氧化天然产物的筛选


[0001]本专利技术涉及口腔护理产品领域，尤其涉及口腔护理产品和原料的抗氧化功能的检测方法及抗氧化天然产物的筛选。

技术介绍

[0002]氧化应激(Oxidative Stress，OS)是指体内氧化与抗氧化作用失衡的一种状态，活性氧族(reactive oxygen species，ROS)产生过多，包括超氧阴离(O2‑
)、过氧化氢自由基(HOO
‑
)、羟基自由基(
‑
OH)、过氧化氢(H2O2)等，超出机体清除能力,导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。氧化应激被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。1990年Sohal首次提出了OS概念，发现ROS在长期高糖状态可产生大量糖基化产物(advanced glycation end product，AGE)激活OS，越来越多的研究表明OS与口腔组织的衰老和口腔疾病具有较大的关联性。Chen等人研究表明，OS能激活宿主免疫系统，使机体对牙周微生物免疫应答增强，并产生大量ROS，引起牙周组织直接损伤；此外，OS还可改变细胞信号通路，造成牙周组织对微生物免疫反应级联放大，促进炎症因子的高表达，导致牙周组织破坏。暨南大学口腔医学院吴东蕾阐述了OS与颞下颌关节紊乱病、牙周疾病、咀嚼肌疾病等多种疾病有关。由此可见，氧化应激对口腔健康问题有非常紧密的联系。
[0003]目前，已有相关报道表明可以通过抑制氧化应激反应(抗氧化)，筛选相关抗氧化剂并将其应用至口腔护理产品中，从而解决OS造成的口腔问题。已有研究表明活性氧与氧化应激的产生可能导致牙周炎病，并解释了其致病理机制；另有研究表明抗氧化剂可用于牙周炎的治疗，确定了抗氧化剂在治疗牙周炎疾病的可行性。有学者通过研究报告展示了维生素E及其衍生物在口腔护理中的应用，表明维生素E及其衍生物可以对抗自由基帮助修复口腔黏膜、促进溃疡愈合和减轻牙龈有关问题，以及在口腔护理产品中的应用。此外，有工程师开发了抗氧化牙膏，该牙膏含有莼菜多糖和广藿香精油，通过体外清除自由基法(TRAP自由基、DPPH自由基和羟基自由基)评估产品的抗氧化能力，使其达到保护牙龈、修复损伤、抗菌消炎、预防或治疗牙齿和口腔疾病的功效。
[0004]现有的技术主要集中于对抗氧化产品的开发和应用整体的研究，无前期对抗氧化原料进行筛选过程以及方法，且对产品的抗氧化功效评价方法存在着参差不齐的问题，主要表现为检测指标不统一等情况。此外，现有的技术中基本都是通过化学法体外清除自由基评估产品的抗氧化功效，少有涉及通过体外细胞实验评估原料或产品的抗氧化效果，而体外细胞实验评估抗氧化功效方法相对于化学清除自由基实验，其评估结果更接近产品在人体中的应用。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了口腔护理产品和原料的抗氧化功能的检测方法及抗氧化天然产物的筛选。本专利技术主要基于氧化应激与口腔健康的关系，建立体外细胞抗氧化功效
评价方法，进一步对抗氧化原料进行初步的筛选，最终对口腔护理产品抗氧化功效进行评估，以此保证产品的抗氧化功效，提高抗氧化产品的开发效率，降低功效波动风险，以此推动抗氧化口腔护理产品的发展。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了口腔护理产品的抗氧化功能的检测方法，包括如下步骤：
[0008]S1：取铺板后的口腔相关细胞与过氧化氢混合，获得模型组；
[0009]S2：取预处理的待测物与过氧化氢混合后，与铺板后的口腔相关细胞混合，获得实验组；
[0010]S3：根据所述模型组和所述实验组的细胞活性，获得所述待测物的抗氧化功效；
[0011]S1和S2中所述铺板的细胞浓度为1～400
×
103cells/mL；
[0012]S1和S2不分先后顺序。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述铺板的细胞浓度为1～3
×
104cells/mL。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述获得所述待测物的抗氧化功效中，当所述实验组的细胞活性与所述模型组的细胞活性相比，具有显著差异P＜0.05，所述待测物具有抗氧化功效。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述获得所述待测物的抗氧化功效的公式为：
[0016][0017]当所述抗氧化功效值大于0，小于等于20％时，所述待测物的抗氧化功效为低；
[0018]当所述抗氧化功效值大于20％，小于等于60％时，所述待测物的抗氧化功效为中；
[0019]当所述抗氧化功效值大于60％时，所述待测物的抗氧化功效为高。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述口腔相关细胞包括：人牙龈成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和/或人永生化角质形成细胞中的一种或多种。
[0021]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述待测物包括：超氧化物歧化酶、槲皮素、白芨提取物、积雪草提取物、贻贝提取物和/或救必应提取物中的一种或多种。
[0022]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中，所述待测物包括：1250～10000ppm超氧化物歧化酶、7.8～250μm槲皮素、0.2～5％白芨提取物、80～2000ppm积雪草提取物、80～2000ppm贻贝提取物和/或80～400ppm救必应提取物中的一种或多种。
[0023]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法S1和S2中所述过氧化氢的浓度为800μm～1.2mM。
[0024]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法S1和S2中所述与过氧化氢混合的时间为6～24h。
[0025]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法S1和S2中所述与过氧化氢混合的时间为24h。
[0026]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法S2中所述预处理包括：根据所述待测物的溶解性选择不同的溶剂进行预溶解和/或当所述待测物含有微生物时，需要除菌的步
骤。
[0027]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法S2中所述预处理的时间为6～48h。
[0028]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法S1和S2中所述铺板的时间为12～24h。
[0029]本专利技术提供了口腔护理产品的抗氧化功能的检测方法，包括如下步骤：
[0030]S1：取铺板后的口腔相关细胞与过氧化氢混合，获得模型组；
[0031]S2：取预处理的待测物与过氧化氢混合后，与铺板后的口腔相关细胞混合，获得实验组；
[0032]S3：根据所述模型组和所述实验组的细胞活性，获得所述待测物的抗氧化功效；
[0033]S1和S2中所述铺板的细胞浓度为1～400
×
103cells/mL；
[0034]S1和S2不分先后顺序。
[0035]本专利技术的有益效果包括：<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.口腔护理产品的抗氧化功能的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：取铺板后的口腔相关细胞与过氧化氢混合，获得模型组；S2：取预处理的待测物与过氧化氢混合后，与铺板后的口腔相关细胞混合，获得实验组；S3：根据所述模型组和所述实验组的细胞活性，获得所述待测物的抗氧化功效；S1和S2中所述铺板的细胞浓度为1～400
×
103cells/mL；S1和S2不分先后顺序。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述获得所述待测物的抗氧化功效中，当所述实验组的细胞活性与所述模型组的细胞活性相比，具有显著差异P＜0.05，所述待测物具有抗氧化功效。3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述获得所述待测物的抗氧化功效的公式为：当所述抗氧化功效值大于0，小于等于20％时，所述待测物的抗氧化功效为低；当所述抗氧化功效值大于20％，小于等于60％时，所述待测物的抗氧化功效为中；当所述抗氧化功效值大于60％时，所述待测物的抗氧化功效为高。4.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏珊，李平，江本生，康晓磊，谢晓芳，
申请(专利权)人：广州舒客实业有限公司，
类型：发明
国别省市：