用于阻止聚合物染料-抗体缀合物之间的非特异性相互作用的组合物和方法技术

本公开内容涉及包含聚合物染料的非荧光组分(例如聚合物染料的单体组分、光漂白的聚合物染料和/或包含猝灭部分的聚合物染料)的组合物，其用于例如在生物样品的流式细胞术分析中降低聚合物染料缀合物的非特异性相互作用。还提供了用于使用这样的组合物的方法和包含这样的组合物的试剂盒。含这样的组合物的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于阻止聚合物染料
‑
抗体缀合物之间的非特异性相互作用的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请作为PCT国际专利申请于2022年2月4日提交，并要求于2021年2月5日提交的美国临时申请No.63/146,498的权益和优先权，该临时申请通过引用以其整体并入。

技术介绍

[0003]聚合物染料缀合物是明亮的(bright)，并提供可用于多色流式细胞术测定的优异性能。一般而言，聚合物染料缀合物由于其独特且复杂的结构而表现出高亮度。但是其独特且复杂的结构也导致一些显著的限制。
[0004]聚合物染料是疏水性的，并具有大的表观分子量，这使得它们易于在水性缓冲剂中聚集。因此，当聚合物染料与抗体缀合时，所得缀合物也可具有与彼此相互作用和/或与同一样品中存在的其他聚合物染料缀合物相互作用的倾向。当使用多于一种聚合物染料缀合物对同一样品进行染色时，可发生聚合物染料之间的非特异性相互作用，这可以导致数据欠补偿。
[0005]可消除聚合物染料缀合物之间非特异性相互作用的专门的染色缓冲剂是高度期望的。

技术实现思路

[0006]聚合物染料缀合物由于其性质可彼此相互作用，导致非特异性结合。本公开内容提供了用于降低或阻止聚合物染料缀合物之间的非特异性相互作用的组合物。
[0007]本公开内容提供了能够降低染料缀合物之间的非特异性相互作用的组合物，其包含聚合物染料的一种或更多种非荧光组分和缓冲剂。所述组合物任选地还可包含非离子表面活性剂。所述组合物任选地还可包含蛋白质稳定剂。所述组合物任选地还可包含防腐剂。
[0008]本公开内容提供了染色缓冲剂组合物，其包含聚合物染料的一种或更多种非荧光组分、非离子表面活性剂和缓冲剂，其中所述组合物能够降低非特异性结合，例如一种或更多种荧光聚合物染料缀合物之间的聚合物
‑
聚合物相互作用。
[0009]聚合物染料的非荧光组分可以是聚合物染料的单体组分、光漂白的聚合物染料和包含猝灭部分的聚合物染料(例如猝灭的聚合物染料)中的一种或更多种。
[0010]本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的聚合物染料的单体组分。
[0011]本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的光漂白的染料。
[0012]本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的猝灭的聚合物染料。
[0013]本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的聚合物染料的单体组分和猝灭的聚合物染料。
[0014]本公开内容提供了这样的组合物，其包含在缓冲剂中的聚合物染料的单体组分和光漂白的染料。
[0015]本公开内容的组合物任选地还可包含蛋白质稳定剂、非离子表面活性剂和/或防
腐剂。例如，本公开内容的工作浓度组合物(1
×
)还可包含0.1至10mg/mL、0.5至5mg/mL、1至3mg/mL、或约2mg/mL的蛋白质稳定剂。
[0016]本公开内容的浓缩的染色缓冲剂组合物(10
×
)还可包含1至100mg/mL、2至50mg/mL、5至40mg/mL、10至30mg/mL、或约20mg/mL的蛋白质稳定剂。在一些实施方案中，蛋白质稳定剂以0.1至100mg/mL、0.2至50mg/mL、1至20mg/mL或1至10mg/mL存在。
[0017]本公开内容的工作浓度组合物(1
×
)可包含0.01％至10％、0.01％至4％、0.01％至2％、0.01％至0.4％或约0.02％(重量/体积)的非离子表面活性剂。
[0018]本公开内容的浓缩的染色缓冲剂组合物(10
×
)可包含0.1％至40％、0.5％至20％、1％至10％或约5％(重量/体积)的非离子表面活性剂。
[0019]本公开内容的组合物可任选地还包含0.01％至0.5％、0.03％至0.3％、或0.05％至0.2％、或约0.1％(重量/体积)的防腐剂。
[0020]例如，本公开内容提供了工作浓度染色缓冲剂组合物(1
×
)，其包含在生物缓冲剂中的0.3至1.5mg/mL、0.5至1.2mg/mL或约1mg/mL的猝灭的聚合物染料和任选地0.1至10mg/mL或0.2至5mg/mL的蛋白质稳定剂，所述生物缓冲剂例如PBS缓冲剂，其包含0.01％至10％或0.1％至4％(重量/体积)的非离子表面活性剂。
[0021]本公开内容提供了浓缩的染色缓冲剂组合物(10
×
)，其包含在生物缓冲剂中的3至15mg/mL、5至12mg/mL、或约10mg/mL的猝灭的聚合物染料和任选地1至100mg/mL或2至50mg/mL的蛋白质稳定剂，所述生物缓冲剂例如PBS缓冲剂，其包含0.1％至40％或1％至10％(重量/体积)的非离子表面活性剂。发现该组合物显著降低了多色染料缀合物组中的非特异性聚合物染料缀合物相互作用。这在FCA流式细胞术分析中通过将染色且裂解的血液样品与没有所述猝灭的聚合物染料的情况下的相同样品比较得到证明。
[0022]本公开内容提供了工作浓度染色缓冲剂组合物(1
×
)，其包含在生物缓冲剂中的20至40mg/mL、或约30mg/mL的聚合物染料的单体组分；0.2至0.8mg/mL或0.3至0.7mg/mL的猝灭的聚合物染料；以及0.01％至10％或0.1％至4％的非离子表面活性剂。工作浓度组合物(1
×
)还可包含0.1至10mg/mL、0.5至5mg/mL的蛋白质稳定剂。
[0023]本公开内容提供了浓缩的染色缓冲剂组合物(10
×
)，其包含在生物缓冲剂中的200至400mg/mL、或约300mg/mL的聚合物染料的单体组分；2至8mg/mL或3至7mg/mL猝灭的聚合物染料；以及0.1％至40％或1％至20％的非离子表面活性剂。浓缩的组合物(10
×
)还可包含1至100mg/mL或5至50mg/mL的蛋白质稳定剂。
[0024]发现该组合物显著降低了多色染料缀合物组中的非特异性聚合物染料缀合物相互作用。这在FCA流式细胞术分析中通过将染色且裂解的全血样品与没有所述单体组分且没有所述猝灭的聚合物染料的情况下的相同样品比较得到证明。
[0025]本公开内容提供了工作浓度染色缓冲剂组合物(1
×
)，其包含在生物缓冲剂中的20至40mg/mL、或约30mg/mL的聚合物染料的单体组分；0.2至0.8mg/mL、0.3至0.7mg/mL、或约0.5mg/mL的光漂白的聚合物染料；以及0.01％至10％或0.1％至4％的非离子表面活性剂。工作浓度组合物(1
×
)还可包含0.1至10mg/mL或0.5至5mg/mL的蛋白质稳定剂。
[0026]本公开内容提供了浓缩的染色缓冲剂组合物(10
×
)，其包含在生物缓冲剂中的200至400mg/mL、或约3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.组合物，其用于与至少一种荧光聚合物染料一起使用以用于对生物样品染色，所述至少一种荧光聚合物染料与结合配偶体缀合，所述组合物包含：第一聚合物染料的至少一种非荧光组分；非离子表面活性剂；和生物缓冲剂；其中所述组合物与不存在所述组合物的情况下的至少一种荧光聚合物染料缀合物相比，降低了所述至少一种荧光聚合物染料缀合物的非特异性结合。2.权利要求1所述的组合物，其中所述第一聚合物染料的非荧光组分表现出以下中的至少一者：量子产率(QY)不大于0.1、不大于0.06或不大于0.056；当被405nm激光激发时，小于约50个任意荧光单位(AFU)；以及当在405nm下被激发时，与母体荧光聚合物相比，>95％的原始最大发射强度的猝灭。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述第一聚合物染料的非荧光组分选自聚合物染料的单体组分、光漂白的聚合物染料、包含猝灭部分的聚合物染料和非荧光聚合物染料。4.根据权利要求3所述的组合物，其包含聚合物染料的单体组分和光漂白的聚合物染料。5.根据权利要求3所述的组合物，其包含聚合物染料的单体组分和包含猝灭部分的聚合物染料。6.根据权利要求1至5所述的组合物，其中所述非离子表面活性剂是泊洛沙姆非离子表面活性剂。7.根据权利要求1至5中所述的组合物，其中所述至少一种聚合物染料包含两种或更多种聚合物染料，每种聚合物染料与结合配偶体缀合。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述两种或更多种聚合物染料缀合物包含不同的聚合物染料或包含相同的聚合物染料。9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述至少一种荧光聚合物染料是具有根据式(I)的结构的聚合物：其中：每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个L是接头部分；每个M独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、和亚乙炔基；G1和G2独立地选自未经修饰的聚合物末端和经修饰的聚合物末端；a、c和d独立地限定所述结构内每个单元的mol％，所述单元各自可以是均匀或随机重复的，并且其中每个a为10％至100％的mol％，每个c为0至90％的mol％，并且每个d为0至
25％的mol％；每个b独立地是0或1；并且m是1至约10,000的整数。10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述至少一种荧光聚合物染料是具有根据式(XX)的结构的聚合物：其中：每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个B独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、和亚乙炔基；每个E是独立选择的发色团、官能部分或结合配偶体；G1和G2独立地选自未经修饰的聚合物末端和经修饰的聚合物末端；L1、L2和L3是接头部分；W是水溶性部分；下标n和m独立地是1至10,000的整数，下标p是0至10,000的整数，并且下标n、m和p之和的范围为2至10,000；下标q是1、2、3或4；下标r是1、2、3或4；下标s是0、1、2或3；下标t是1或2下标r和s之和的范围为1至4；并且A和B随机或非随机地分布在所缀合的聚合物中。11.根据权利要求10所述的组合物，其中L1选自磺酰胺、磺酰胺、磺内酰胺、二亚磺酰胺、酰胺、膦酰胺、膦酰胺酸酯、次膦酰胺和仲胺。12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述与所述至少一种聚合物染料缀合的结合配偶体是能够与靶分析物特异性结合的分子或分子复合物。13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述与所述至少一种聚合物染料缀合的结合配偶体选自蛋白质、亲和配体、抗体、抗体片段和寡核苷酸。14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述结合配偶体是单克隆或多克隆抗体。15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中所述结合配偶体是免疫球蛋白或免疫球蛋白的免疫活性部分。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述结合配偶体是单链抗体、Fab、Fab
’
和F(ab
’
)2片段、Fv或Fab表达文库。17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中至少一种聚合物染料的单体组分包含选自二氢菲(DHP)部分和芴部分的部分。18.根据权利要求3至17中任一项所述的组合物，其中所述至少一种聚合物染料的单体组分包含具有根据式(XXII)的化学结构的基于二氢菲(DHP)的水溶性单体：其中：每个G1、G2独立地选自卤素(F、Cl、Br、I)、C1‑
C6烷基和PEG；每个R2独立地选自水溶性部分、烯烃、炔烃、环烷基、卤代烷基、(杂)芳基氧基、(杂)芳基氨基、磺酰胺
‑
PEG、膦酰胺
‑
PEG、烷基铵盐、烷基氧基铵盐、寡聚醚铵盐、烷基磺酸盐、烷氧基磺酸盐、寡聚醚磺酸盐、磺酰胺基寡聚醚、磺酰胺、亚磺酰胺、膦酰胺酸酯、次膦酰胺、每个R3是水溶性部分；每个R4独立地选自H、烷基、PEG、水溶性部分、接头部分、发色团、羧酸胺、胺、氨基甲酸盐/酯、羧酸、羧酸酯、马来酰亚胺、经活化酯、N
‑
羟基琥珀酰亚胺基、肼、酰肼、腙、叠氮化物、炔烃、醛、或硫醇、或其被保护基团；每个R5独立地选自H、羟基、C1‑
C
12
烷基、C2‑
C
12
烯烃、C2‑
C
12
炔烃、C3‑
C
12
环烷基、C1‑
C
12
卤代烷基、C1‑
C
12
烷氧基、C2‑
C
18
(杂)芳基氧基、C2‑
C
18
(杂)芳基氨基、C2‑
C
12
羧酸和C2‑
C
12
羧酸酯；每个Q独立地是键、NR4或
‑
CH2；每个Z独立地是CH2、O或NR4；每个f独立地是0至50的整数；并且每个n独立地是1至20的整数。19.根据权利要求18所述的组合物，其中G1和G2各自是卤素；每个Z是O；每个R2是H；每个n独立地是2至4；并且每个f独立地是5至20；任选地其中每个n是3。20.根据权利要求3至19中任一项所述的组合物，其中所述至少一种聚合物染料的单体组分是具有根据式(XXIII)的化学结构的基于芴或基于咔唑的水溶性单体：
其中：每个G1、G2独立地选自卤素(F、Cl、Br、I)、C1‑
C6烷基和PEG；每个X是C、N或Si；每个R4独立地选自H、烷基、PEG、水溶性部分、接头部分、发色团、羧酸胺、胺、氨基甲酸盐/...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗雷德里克，
申请(专利权)人：贝克曼库尔特有限公司，
类型：发明
国别省市：