一种眼球组织制片方法及眼球组织切片技术

本发明专利技术公开了一种眼球组织制片方法及眼球组织切片。所述眼球组织制片方法包括如下步骤：眼球组织预处理、固定和后处理；其中，固定依次包括三次固定；第一次固定：固定液Ⅰ固定；第二次固定：固定液Ⅱ固定；第三次固定：固定液Ⅰ固定；固定液Ⅰ包括以体积百分比计的如下组分：房水等渗液30％

【技术实现步骤摘要】
一种眼球组织制片方法及眼球组织切片


[0001]本专利技术涉及一种眼球组织制片方法及眼球组织切片。

技术介绍

[0002]在动物实验中，组织病理学检查属于关键环节，良好的固定方法是保持脏器原有结构并进一步进行病理分析的前提，但由于动物各组织/脏器在组成和结构等方面的差异，同样的固定方法对不同脏器/组织的固定效果大相径庭。
[0003]随着眼科新药物传递技术及新型治疗药物的兴起(如基因治疗药物)，目前临床前安全性评价面临巨大挑战。至今国内外尚无专门针对眼科药物的相关技术的指导原则/指南，考虑到眼睛的解剖及生理特殊(血
‑
眼屏障)，且不同种属间存在差异，而常规系统毒性研究中使用的基础眼球固定方法已不能满足目前不断涌现的新的眼科药物眼科毒性评价要求，如何建立一套符合要求的眼球组织制片方法已成为目前各研发和科研机构面临的直接问题。
[0004]眼球属于视觉特殊感受器，外界光源刺激通过晶状体汇聚到视网膜，并转化为神经冲动传递至中枢神经，由大脑皮层整合形成相应的外部环境视觉和图像。眼球由眼球壁和眼球内容物构成，眼球壁从前向后包括角膜、虹膜、睫状体、视网膜、脉络膜、巩膜、结膜等，眼球内容物包括房水、晶状体和玻璃体等。眼球结构复杂，各层组织的软硬度不均，关键结构(如视网膜、脉络膜和巩膜)之间的连接性很差；动物处于活体阶段时眼内压较强而死亡后眼压迅速下降容易导致结构脱落；加上制片流程包括解剖、固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等多个环环相扣的环节，任何一个环节出现问题都可能导致眼球结构失位甚至被破坏，从而对组织病理学判定造成巨大影响，其中视网膜与脉络膜的大面积脱离、视网膜褶皱和眼球组织变形就是最常见的问题。
[0005]在上述环节中，眼球制片最关键的技术是选用合适的固定液和一套切实有效的固定方法。目前，国际上常规的眼球组织制片一般采用Davidson
’
s固定液、改良Davidson
’
s固定液或Bouin固定液进行眼球固定，随后不进行特殊处理，和其余脏器一起进行取材、脱水、包埋、切片和染色封片等操作，上述固定液对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但酸度较高(pH为3～3.5)，且组织收缩明显，因此视网膜与脉络膜脱离、视网膜褶皱和眼球组织变形等情况往往更为严重。
[0006]亟需一种改善眼球组织视网膜与脉络膜脱离，以及眼球组织变形的眼球组织制片方法。

技术实现思路

[0007]为解决现有技术眼球组织制片方法中所存在的眼球组织视网膜与脉络膜脱离，以及眼球组织变形等缺陷，本专利技术提供了一种眼球组织制片方法及眼球组织切片，以本专利技术的眼球组织制片方法制得的眼球组织切片可保证眼球组织无明显变形，视网膜与脉络膜基本未脱离。
[0008]为实现如上目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0009]本专利技术第一方面提供了一种眼球组织制片方法，其包括如下步骤：眼球组织预处理、固定和后处理；
[0010]其中，所述固定依次包括三次固定；
[0011]第一次固定：固定液Ⅰ固定；
[0012]第二次固定：固定液Ⅱ固定；
[0013]第三次固定：固定液Ⅰ固定；
[0014]所述固定液Ⅰ包括以体积百分比计的如下组分：房水等渗液30％
‑
40％，甲醛溶液5％
‑
25％、无水乙醇20％
‑
55％、甲酸0.25％
‑
1％和去离子水；其中，去离子水为余量；
[0015]所述固定液Ⅱ包括福尔马林。
[0016]本专利技术中，所述固定液Ⅰ可包括以体积百分比计的如下组分：房水等渗液35％、甲醛溶液10％、无水乙醇30％、甲酸0.5％和去离子水24.5％。
[0017]本专利技术中，所述固定液Ⅱ中福尔马林可为中性缓冲福尔马林。
[0018]本专利技术中，所述固定液Ⅱ中福尔马林的体积浓度可为10％。
[0019]本专利技术中，所述第一次固定的时间可为24
‑
36h，例如33h；所述第一次固定时固定液的用量可为眼球组织体积的8
‑
10倍，例如8倍。
[0020]本专利技术中，所述第二次固定的时间可为2
‑
6h，例如6h；所述第二次固定时固定液的用量为眼球组织体积的8
‑
10倍，例如8倍。
[0021]本专利技术中，所述第三次固定的时间可为12
‑
24h，例如18h；所述第三次固定时固定液的用量可为眼球组织体积的8
‑
10倍，例如8倍。
[0022]本专利技术中，所述第一次固定、第二次固定和第三次固定均可采用振荡固定的方式进行固定；所述振荡固定较佳地在摇床中进行；所述摇床的转速更佳地为80
‑
90转/分钟，例如85转/分钟。
[0023]本专利技术中，所述振荡固定的方式有助于固定液迅速渗透组织，使组织迅速保持形态和结构固定在原位，又不会引起组织过度震荡受损，可达到更好的固定效果。
[0024]本专利技术中，所述眼球组织可为非啮齿动物眼球组织，例如食蟹猴眼球组织。
[0025]本专利技术中，所述房水等渗液可为本领域常规的房水等渗液，可视为固定液I中的单一组分之一，本领域技术人员可知其具体含义。所述房水等渗液一般包括氯化钠、尿素、氯化钾和去离子水。
[0026]其中，所述房水等渗液中氯化钠的浓度可为7
‑
17g/L，例如9.0g/L。
[0027]其中，所述房水等渗液中尿素的浓度可为0.70
‑
1.60g/L，例如0.9g/L。
[0028]其中，所述房水等渗液中氯化钾的浓度可为0.10
‑
0.35g/L，例如0.2g/L。
[0029]本专利技术中，所述甲醛溶液可为甲醛的饱和水溶液；所述甲醛溶液的体积浓度较佳地为37％
‑
40％。
[0030]本专利技术中，所述预处理可包括眼球组织的采集以及眼球组织中结缔组织的去除。
[0031]其中，所述眼球组织的采集可包括：眼球组织在体时注射固定液Ⅰ后再取出，例如在角膜缘(角膜与巩膜交接处)靠近巩膜处以注射器缓慢注入本专利技术固定液Ⅰ，直至眼球变硬至手触有一定弹性但未涨硬为止。所述采集方式可使眼球组织饱满充盈，不易皱缩，有更好的固定效果。
[0032]其中，所述眼球组织中结缔组织的去除可包括：在生理盐水中剪去眼球组织周围多余的结缔组织。
[0033]本专利技术中，所述第二次固定之后还可包括眼球组织的修切；较佳地，所述修切包括：沿平行于玻璃动脉的方向对所述第二次固定所得所得眼球组织进行修切。
[0034]本专利技术中，所述后处理可包括依次脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、摊片、烘干、染色和封片。
[0035]其中，所述脱水可为乙醇脱水，较佳地为梯度浓度乙醇脱水；所述梯度浓度乙醇脱水较佳地包括依次进行：70％乙醇处理60min，80％乙醇处理60min，95％乙醇处理6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种眼球组织制片方法，其特征在于，其包括如下步骤：眼球组织预处理、固定和后处理；其中，所述固定依次包括三次固定；第一次固定：固定液Ⅰ固定；第二次固定：固定液Ⅱ固定；第三次固定：固定液Ⅰ固定；所述固定液Ⅰ包括以体积百分比计的如下组分：房水等渗液30％
‑
40％，甲醛溶液5％
‑
25％、无水乙醇20％
‑
55％、甲酸0.25％
‑
1％和去离子水；其中，去离子水为余量；所述固定液Ⅱ包括福尔马林。2.如权利要求1所述的眼球组织制片方法，其特征在于，所述固定液Ⅰ包括以体积百分比计的如下组分：房水等渗液35％、甲醛溶液10％、无水乙醇30％、甲酸0.5％和去离子水24.5％；和/或，所述固定液Ⅱ中福尔马林为中性缓冲福尔马林；和/或，所述固定液Ⅱ中福尔马林的体积浓度为10％。3.如权利要求1所述的眼球组织制片方法，其特征在于，所述第一次固定的时间为24
‑
36h，例如33h；和/或，所述第一次固定时固定液I的用量为眼球组织体积的8
‑
10倍，例如8倍；和/或，所述第二次固定的时间为2
‑
6h，例如6h；和/或，所述第二次固定时固定液II的用量为眼球组织体积的8
‑
10倍，例如8倍；和/或，所述第三次固定的时间为12
‑
24h，例如18h；和/或，所述第三次固定时固定液I的用量为眼球组织体积的8
‑
10倍，例如8倍；和/或，所述第一次固定、第二次固定和第三次固定均采用振荡固定的方式进行固定；所述振荡固定较佳地在摇床中进行；所述摇床的转速更佳地为80
‑
90转/分钟，例如85转/分钟。4.如权利要求1所述的眼球组织制片方法，其特征在于，所述眼球组织为非啮齿动物眼球组织，例如食蟹猴眼球组织；和/或，所述房水等渗液包括氯化钠、尿素、氯化钾和去离子水；所述房水等渗液中氯化钠的浓度较佳地为7
‑
17g/L，例如9.0g/L；所述房水等渗液中尿素的浓度较佳地为0.70
‑
1.60g/L，例如0.9g/L；所述房水等渗液中氯化钾的浓度较佳地为0.10
‑
0.35g/L，例如0.2g/L；和/或，所述甲醛溶液为甲醛的饱和水溶液；所述甲醛溶液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亚群，李华，邵薇，孟永，王丽娟，李曦，马俊，杨宁，钱庄，陈晓俊，
申请(专利权)人：益诺思生物技术南通有限公司，
类型：发明
国别省市：