一株广碳源利用的盐单胞菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一株广碳源利用的盐单胞菌及应用。所述盐单胞菌为，其保藏编号为GDMCC NO.63382。本发明专利技术的能够利用不同的中长链脂肪酸碳源高产PHA，除了能够以常用的葡萄糖为碳源外，还能够利用甘油、糖蜜、果糖、蔗糖等多种廉价碳源，并且在高氮源和高碱性下也能够正常生长。能够提高碳源转化率。本发明专利技术利用盐单胞菌（）LY03制备PHA降低了生产成本，可高产PHA，具有巨大的工业应用价值。业应用价值。业应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一株广碳源利用的盐单胞菌及应用


[0001]本专利技术涉及工业微生物
，特别涉及一株广碳源利用的盐单胞菌及应用。

技术介绍

[0002]微生物发酵是生物合成产品的主要途径，由于传统工业生物技术存在灭菌成本高、高淡水消耗、不连续发酵易污染等缺点，导致其与化学工艺相比竞争力较低。
[0003]对于下一代工业生物技术，研究比较成熟的便是嗜盐微生物，它是一种在高盐、高pH环境下能够正常生长的极端微生物。随着合成生物学的发展，对于盐单胞菌在基因改造、代谢调控及形态学方面进行深入研究。
[0004]盐单胞菌是NGIB最突出的底盘细胞，具有天然合成聚羟基脂肪酸酯（PHA）的优点。然而，高产量的PHA生产过程中，传统的嗜盐单胞菌具有较窄的碳源利用能力。现有的盐单胞菌可利用底物谱窄，多以葡萄糖为底物，可合成单体单一，仅有3
‑
羟基丁酸聚合物以及3
‑
羟基丁酸和4
‑
羟基丁酸聚合物。因此，目前亟需一株既能够高效利用廉价碳源高产PHA，又可以聚合不同链长PHA单体的嗜盐单胞菌株。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的缺陷，本专利技术提出了一株广碳源利用的盐单胞菌及应用。
[0006]本专利技术提供一株盐单胞菌（）LY03，所述盐单胞菌的保藏编号为GDMCC No:63382。
[0007]本申请中使用的LY03菌株已于2023年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（简称GDMCC地址：广州市先列中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编510070）。保藏号为GDMCC NO. 63382。菌株名称为，分类命名为。
[0008]进一步的，所述盐单胞菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.3所示。
[0009]本专利技术还提供所述的盐单胞菌在制备聚羟基脂肪酸酯中的应用。
[0010]进一步的，所述聚羟基脂肪酸酯为聚β
‑
羟基丁酸酯。
[0011]本专利技术还提供所述的盐单胞菌在以中长链脂肪酸为碳源制备聚羟基脂肪酸酯中的应用。所述中长链脂肪酸为6个碳及以上的脂肪酸。
[0012]本专利技术还提供一种制备聚β
‑
羟基丁酸酯的方法，包括如下步骤：发酵所述的盐单胞菌，得到聚β
‑
羟基丁酸酯。
[0013]进一步的，所述盐单胞菌可利用的碳源为废豆油、C10饱和脂肪酸、C11饱和脂肪酸、C12饱和脂肪酸、C13饱和脂肪酸、C14饱和脂肪酸、C16饱和脂肪酸、C18饱和脂肪酸、油酸（18:1）、亚油酸（18:2）、亚麻酸（18:3）、甘油、糖蜜、果糖、葡萄糖、蔗糖中的任意一种或多种。
[0014]进一步的，包括如下步骤：将盐单胞菌（）LY03在平板固体培养基上单克隆培养，然后进行一级、二级种子培养，最后接入发酵培养基，持续发酵。
[0015]进一步的，发酵温度为30~42℃；发酵pH为6.5~11；发酵时间为36~50 h。
[0016]进一步的，所述发酵培养基包括以下组分：葡萄糖35 g/L；氯化钠50 g/L，酵母粉1.2 g/L，尿素0.2~3 g/L，无水硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钾1.5~5.5 g/L，Fe(III)
‑
NH4‑
Citrate 5 g/L、CaCl2·
2H2O 2 g/L、HCl 12 mol/L，ZnSO4·
7H2O 0.1 g/L，MnCl2·
4H2O 0.03 g/L，，CoCl2·
6H2O 0.2 g/L，CuSO4·
5H2O 0.01 g/L，NiCl2·
6H2O 0.02 g/L，NaMoO4·
2H2O 0.03 g/L。
[0017]综上，与现有技术相比，本专利技术达到了以下技术效果：（1）能够利用不同的中长链脂肪酸碳源高产PHA。
[0018]（2）本专利技术的除了能够以常用的葡萄糖为碳源外，还能够利用甘油、糖蜜、果糖、蔗糖、废豆油、C10
‑
C18饱和脂肪酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等多种廉价碳源。
[0019]（3）本专利技术的在高氮源下也能够正常生长。
[0020]（4）本专利技术探究了发酵合成PHA的优化条件。
[0021]（5）本专利技术的能够提高碳源转化率，碳源转化率大于36%。
[0022]（6）本专利技术的菌株还具备高耐受高盐和高碱的特点。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0024]图1为本专利技术实施例1中扫描电镜确定菌株的外部形态图和胞内PHA颗粒的形态图。
[0025]图2为本专利技术实施例1中共聚焦显微镜确定菌株的形状。
[0026]图3为本专利技术实施例1中菌株与其他菌株16s rDNA序列对比的进化树。
具体实施方式
[0027]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0028]本专利技术第一部分采用不同长链脂肪酸培养比较生长情况；
[0029]第二部分采用不同生长条件下（碳源、氮源、碱性）菌株的生长状态；第三部分探究菌株天然合成PHA的含量。
[0030]培养条件：
[0031]60LB固体培养基：酵母粉3~10 g/L；胰蛋白胨6~20 g/L；氯化钠36~120 g/L，琼脂
粉1~2%（w/v），pH 7~9；液体培养基：氯化钠40~60 g/L，酵母粉3~10 g/L，胰蛋白胨6~20 g/L，NaOH调节培养基pH至8.0~10.5，培养基体积为150 mL（500 mL锥形瓶）；发酵培养基（50MM培养基）：葡萄糖35 g/L；氯化钠50 g/L，酵母粉1.2 g/L，尿素0.2~3 g/L，无水硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钾1.5~5.5 g/L，Fe(III)
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NH4‑
Citrate 5 g/L、CaCl2·
2H2O 2 g/L、HCl 12 mol/L，ZnSO4·
7H2O 0.1 g/L，MnCl2·
4H2O 0.03 g/L，，CoCl2·
6H2O 0.2 g/L，CuSO4·
5H2O 0.01 g/L，NiCl2·
6H2O 0.02 g/L，NaMoO4·
2H2O 0.03 g/L，NaOH调节培养基pH至6.5~11；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一株盐单胞菌（）LY03，所述盐单胞菌的保藏编号为GDMCC No:63382。2. 根据权利要求1所述的盐单胞菌（）LY03，其特征在于，所述盐单胞菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.3所示。3.权利要求1或2所述的盐单胞菌在制备聚羟基脂肪酸酯中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述聚羟基脂肪酸酯为聚β
‑
羟基丁酸酯。5.权利要求1或2所述的盐单胞菌在以中长链脂肪酸为碳源制备聚羟基脂肪酸酯中的应用；所述中长链脂肪酸为6个碳及以上的脂肪酸。6.一种制备聚β
‑
羟基丁酸酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：发酵权利要求1或2所述的盐单胞菌，得到聚β
‑
羟基丁酸酯。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述盐单胞菌可利用的碳源为废豆油、C10饱和脂肪酸、C11饱和脂肪酸、C12饱和脂肪酸、C13饱和脂肪酸、C14饱和脂肪酸、C16饱和脂肪酸、C18饱和脂肪酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、甘油、糖蜜、果糖、葡萄糖、蔗糖中的任意一种或多种。8.根据权利要求6所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶健文，吕金艳，司徒卫，余柳松，林艺娜，
申请(专利权)人：珠海麦得发生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：