一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法技术

本发明专利技术涉及葡萄酒检测技术领域，具体而言，涉及一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法。先对处理后的干红葡萄酒进行固相萃取，得到缩合单宁提取液，再对缩合单宁提取液进行高效液相色谱检测；固相萃取的洗脱液为丙酮、水和乙酸的混合溶液；混合溶液中，丙酮、水、乙酸的体积比为60～90：9.5～39.5：0.5；缩合单宁提取液中包括多种聚合度的缩合单宁。该方法能够对多种聚合度的缩合单宁进行特异性识别检测，同时还能得到各聚合度的缩合单宁的含量，分析结果好，实现了对不同聚合度缩合单宁的富集与检测，操作简单，并且可重复性高。并且可重复性高。并且可重复性高。

【技术实现步骤摘要】
一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法


[0001]本专利技术涉及葡萄酒检测
，具体而言，涉及一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法。

技术介绍

[0002]涩感是干红葡萄酒重要的感官属性，其强度与质感影响干红葡萄酒的风味品质。缩合单宁是干红葡萄酒中重要的酚类物质，在发酵时从葡萄皮和葡萄籽中经浸渍进入酒液，是一种以黄烷
‑3‑
醇单体为基本单元进行连接的聚合物。
[0003]缩合单宁通过与口腔中唾液蛋白结合形成沉淀，从而引发口腔上皮细胞的收缩和起皱，其含量与组成对干红葡萄酒涩感品质至关重要。但由于缩合单宁结构多样，因此在具有复杂的基质组成的干红葡萄酒中难以充分解析其含量与结构，尤其是一些含量较低且分子量大的高聚单宁。
[0004]目前，一些化学方法可用于检测干红葡萄酒总酚含量，但此类方法无法实现对缩合单宁类物质的特异性识别，这些方法的具体缺陷如下：
[0005](一)传统总酚检测法(如福林肖卡法)
[0006]传统总酚检测法所检测的酚类物质包括缩合单宁、花色苷、酚酸等，相较于本专利技术而言：无法特异性区分缩合单宁，因此所得结果会高估酒样的真实缩合单宁含量。
[0007](二)凝胶色谱法
[0008]凝胶色谱法的填料通常为葡聚糖凝胶(Sephadex LH
‑
20)和大孔树脂(TSK HW
‑
50(F))，使用有机试剂，如甲醇，洗脱吸附在填料上的缩合单宁，相较于本专利技术而言：此方法所需干红葡萄酒样品的体积较大，操作繁琐且耗时较长，对与低聚缩合单宁(聚合度2～5)的分离较好，但难以洗脱高聚单宁(聚合度大于5)。
[0009](三)质谱法
[0010]质谱法可直接检测干红葡萄酒样品中的缩合单宁，所需样品量较少(3～5μL),相较于本专利技术而言：此方法仅能测定黄烷醇单体和缩合单宁二聚体的含量；高聚合度的缩合单宁含量相对较低且分子结构较多，因此在未经处理的干红葡萄酒复杂基质中难以定量分析。

技术实现思路

[0011]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法。
[0012]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0013]本专利技术提供一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，先对处理后的干红葡萄酒进行固相萃取，得到缩合单宁提取液，再对所述缩合单宁提取液进行高效液相色谱检测；
[0014]其中，所述固相萃取的洗脱液为丙酮、水和乙酸的混合溶液；所述混合溶液中，丙酮、水、乙酸的体积比为60～90：9.5～39.5：0.5；所述缩合单宁提取液中包括多种聚合度的缩合单宁。
[0015]进一步，所述处理后的干红葡萄酒与所述洗脱液的体积比为1：4。
[0016]进一步，所述缩合单宁包括黄烷醇单体、缩合单宁二聚体、缩合单宁三聚体、缩合单宁四聚体、缩合单宁五聚体、缩合单宁六聚体、缩合单宁七聚体和缩合单宁八聚体。
[0017]进一步，所述提取方法包括以下步骤：
[0018]S1
‑
1、将干红葡萄酒进行离心，离心后除去不溶的沉淀物，保留上清液；
[0019]S1
‑
2、依次采用甲醇和水活化固相萃取柱，活化后，吹干所述固相萃取柱中的填料；
[0020]S1
‑
3、在所述固相萃取柱中加入步骤S1中得到的所述上清液，待所述上清液完全吸附在所述填料上后，吹干所述填料；
[0021]S1
‑
4、采用蒸馏水淋洗所述固相萃取柱；
[0022]S1
‑
5、采用所述洗脱液洗脱所述固相萃取柱，并收集洗脱液；
[0023]S1
‑
6、去除所述洗脱液中的丙酮，将剩余的液体冻干后，复溶于模拟酒液中，得到所述缩合单宁提取液；所述模拟酒液为乙醇、酒石酸和氯化钠的水溶液，其中，乙醇的体积百分数为所述模拟酒液总提及的12％，酒石酸的质量与所述模拟酒液体积比为5g/L，氯化钠的浓度为0.2M的氯化钠。
[0024]进一步，所述步骤S1
‑
1中，离心的转速为8000r/min，离心时间为5min。
[0025]进一步，所述固相萃取柱为Oasis HLB小柱，规格为3cc/60mg；
[0026]所述步骤S1
‑
2中，甲醇和水的体积均为2mL；所述步骤S1
‑
3中，所述上清液的加入量为5mL，所述步骤S1
‑
6中，所述洗脱液的用量为20mL。
[0027]进一步，所述高效液相色谱检测包括以下步骤：
[0028]S2
‑
1、对所述缩合单宁提取液进行高效液相色谱检测，并根据每种所述缩合单宁的保留时间确定色谱图中各色谱峰对应的的所述缩合单宁；
[0029]S2
‑
2、对多个浓度梯度的表儿茶素标准品溶液进行与步骤S2
‑
1相同的所述高效液相色谱检测，得到表儿茶素的标准方程；所述标准方程为浓度与峰面积的线性方程；
[0030]S2
‑
3、将所述步骤S2
‑
1的色谱图中，每种所述缩合单宁的峰面积分别带入步骤S2
‑
2中所述标准方程中，计算得到每种所述缩合单宁的含量。
[0031]进一步，所述步骤S2
‑
1中，黄烷醇单体的保留时间为4.90min，缩合单宁二聚体的保留时间为10.91min、缩合单宁三聚体的保留时间为19.51min、缩合单宁四聚体的保留时间为27.00min、缩合单宁五聚体的保留时间为35.58min、缩合单宁六聚体的保留时间为40.61min、缩合单宁七聚体的保留时间为46.77min，缩合单宁八聚体的保留时间为51.24min。
[0032]进一步，所述高效液相色谱检测条件为：
[0033]色谱柱为Develosil Diol色谱柱，规格为250
×
4.6mm、5μm；柱温为40℃；
[0034]荧光激发波长为230nm，发射波长为321nm；
[0035]进样体积为5μL，流速为1mL/min；后运行时间为10min；
[0036]流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为乙腈乙酸溶液，乙腈与乙酸的体积比为98：2；所述流动相B为甲醇、水和乙酸的混合溶液，甲醇、水和乙酸的体积比为95：3：2；洗脱方式为梯度洗脱。
[0037]进一步，所述梯度洗脱的洗脱程序为：
[0038]0min，所述流动相A与所述流动相B的体积比为93：7；
[0039]3min，所述流动相A与所述流动相B的体积比为93：7；
[0040]60min，所述流动相A与所述流动相B的体积比为62.4：37.6；
[0041]63min，所述流动相A与所述流动相B的体积比为0:100；
[0042]70min，所述流动相A与所述流动相B的体积比为0:本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，其特征在于，先对处理后的干红葡萄酒进行固相萃取，得到缩合单宁提取液，再对所述缩合单宁提取液进行高效液相色谱检测；其中，所述固相萃取的洗脱液为丙酮、水和乙酸的混合溶液；所述混合溶液中，丙酮、水、乙酸的体积比为60～90：9.5～39.5：0.5；所述缩合单宁提取液中包括多种聚合度的缩合单宁。2.根据权利要求1所述一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，其特征在于，所述处理后的干红葡萄酒与所述洗脱液的体积比为1：4。3.根据权利要求2所述一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，其特征在于，所述缩合单宁包括黄烷醇单体、缩合单宁二聚体、缩合单宁三聚体、缩合单宁四聚体、缩合单宁五聚体、缩合单宁六聚体、缩合单宁七聚体和缩合单宁八聚体。4.根据权利要求1所述一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：S1
‑
1、将干红葡萄酒进行离心，离心后除去不溶的沉淀物，保留上清液；S1
‑
2、依次采用甲醇和水活化固相萃取柱，活化后，吹干所述固相萃取柱中的填料；S1
‑
3、在所述固相萃取柱中加入步骤S1中得到的所述上清液，待所述上清液完全吸附在所述填料上后，吹干所述填料；S1
‑
4、采用蒸馏水淋洗所述固相萃取柱；S1
‑
5、采用所述洗脱液洗脱所述固相萃取柱，并收集洗脱液；S1
‑
6、去除所述洗脱液中的丙酮，将剩余的液体冻干后，复溶于模拟酒液中，得到所述缩合单宁提取液；所述模拟酒液为乙醇、酒石酸和氯化钠的水溶液，其中，乙醇的体积百分数为所述模拟酒液总提及的12％，酒石酸的质量与所述模拟酒液体积比为5g/L，氯化钠的浓度为0.2M的氯化钠。5.根据权利要求4所述一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，其特征在于，所述步骤S1
‑
1中，离心的转速为8000r/min，离心时间为5min。6.根据权利要求4所述一种干红葡萄酒中缩合单宁的提取方法，其特征在于，所述固相萃取柱为Oasis HLB小柱，规格为3cc/60mg；所述步骤S1
‑
2中，甲醇和水的体积均为2mL；所述步骤S1
‑
3中，所述上清液的加入量为5mL，所述步骤S1
‑
6中，所述洗脱液的用量为20mL。7.根据权利要求1～6任意一项所述一种干...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰义宾，齐梦瑶，段长青，石英，李进，周鹏辉，
申请(专利权)人：中粮长城葡萄酒蓬莱有限公司，
类型：发明
国别省市：