一种干酪乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种干酪乳杆菌及其应用，该干酪乳杆菌GS0605已于2023年5月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.27393。该菌株安全性好，在哥伦比亚血平板上不产生溶血现象，对多种常见类型的抗生素敏感，对人工胃、肠液有较好的耐受能力，对人结肠癌细胞黏附能力强，其发酵上清液与结肠癌细胞HCT

【技术实现步骤摘要】
一种干酪乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种具有结肠癌细胞生长抑制作用的干酪乳杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]微生物及其代谢物在药物开发和疾病的辅助治疗中扮演着越来越多的角色，其中，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)广泛存在于植物、发酵食品、人和动物类肠道等多种环境中，它以其将糖类发酵为乳酸的能力和健康益处而闻名。特别是干酪乳杆菌可以通过抑制有害细菌的生长和增加有益菌的数量，来调节肠道菌群平衡；可以通过减少肠道炎症、促进肠道黏膜健康和增强免疫功能等方式，改善肠道健康状况；可以降低人体中的胆固醇水平，有助于预防心血管疾病等疾病。
[0003]结直肠癌(Colorectal Cancer，CRC)是全球几大常见的恶性肿瘤之一，其发病率高、致死性强。随着饮食文化的多元化发展以及生活方式的改变，世界上多数国家结直肠癌的发病率都呈上升趋势，严重威胁着人类的健康。根据美国癌症协会的最新统计，新发结直肠癌的发病率和致死率仍居新发肿瘤的第三位，仅次于肺癌和乳腺癌。因此，开发具有结肠癌细胞生长抑制作用和促癌细胞凋亡作用的干酪乳杆菌具有很大应用价值。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种干酪乳杆菌及其应用，该菌株GS0605对结肠癌细胞具有抑制作用，对多种致病菌具有较强的抑制能力，抗氧化作用较强，且对胆固醇具有较高的降解作用，该菌益生作用明显，在人和动物功能性食品领域具有显著的应用价值。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种干酪乳杆菌GS0605，该菌株GS0605于2023年5月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.27393。
[0006]本专利技术还提供了一种由上述干酪乳杆菌GS0605制备的菌剂，该菌剂可用于大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌或痢疾志贺氏菌的防治。
[0007]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605可用于制备抗结肠癌药物或抗结肠癌辅助药物。
[0008]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605可用于与抗癌药物联用辅助抗结肠癌。
[0009]本专利技术还提供了一种抗结肠癌药物或抗结肠癌辅助药物，该药物包含上述干酪乳杆菌GS0605的发酵上清液。
[0010]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605或其发酵上清液可用于制备降胆固醇药物，还可用于制备抗氧化功能药物。
[0011]本专利技术还提供了一种抗氧化药物或降胆固醇药物，该药物包含上述干酪乳杆菌GS0605的发酵上清液。
[0012]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605可用于制备调节人或动物肠道菌群的功能性食
品。
[0013]本专利技术还提供了一种包含上述干酪乳杆菌GS0605的功能性食品，其中，该功能性包含对胆固醇的降解或/和抗氧化。
[0014]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605还可用于制备乙酸、乳酸或/和异戊酸。
[0015]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605分离自酸菜，具有以下优点：
[0016]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605在MRS琼脂培养基上生长良好，对酸和胆盐有较好的耐受能力。
[0017]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605对人结肠癌细胞黏附能力好，并具有较强的癌细胞活性抑制能力和促癌细胞凋亡能力。
[0018]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺氏菌等常见肠道病原细菌具有较强的抑菌效果。
[0019]本专利技术提供的干酪乳杆菌GS0605产乙酸和乳酸能力较强，对胆固醇降解能力强，抗氧化作用较强。
附图说明
[0020]图1为本专利技术中干酪乳杆菌GS0605的系统进化关系图。
[0021]图2为本专利技术中不同浓度的干酪乳杆菌GS0605发酵上清液对结肠癌细胞生长的抑制作用结果。
[0022]图3为本专利技术中GC
‑
MS检测干酪乳杆菌GS0605发酵上清液中短链脂肪酸的总离子流图谱。
具体实施方式
[0023]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1干酪乳杆菌GS0605的分离及鉴定
[0025]1、材料准备
[0026]贵州酸菜样品：采自贵州省黎平县果利寨；
[0027]16S rDNA通用引物：27F和1492R通用引物由生工生物工程(上海)有限公司合成，序列如下：
[0028]27F(SEQ ID No.1)：5
’‑
AGAGTTTGATCMTGGCTCAG
‑3’
；
[0029]1492R(SEQ ID No.2)：5
’‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
。
[0030]MRS肉汤培养基的配方(每升)：酪蛋白酶消化物10.0g、牛肉膏粉10.0g、酵母膏粉4.0g、柠檬酸三铵2.0g、乙酸钠5.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g、葡萄糖20.0g、吐温
‑
80，最终pH为5.7左右。
[0031]MRS琼脂培养基的配方(每升)：蛋白胨10.0g、牛肉膏粉5.0g、酵母膏粉4.0g、葡萄糖20.0g、吐温80 1.0mL、磷酸氢二钾2.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸三铵2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸
锰0.05g、琼脂15.0g，最终pH为6.2左右。
[0032]2、具体操作方式
[0033]取少许上述的酸菜样品于50mLMRS肉汤中，充分振荡混匀，置于37℃恒温摇床培养24h。采用10倍梯度稀释，涂布接种于MRS琼脂培养基，37℃培养24h后挑取单菌落，并连续纯化3次。将纯化后的菌株接种于600μL MRS肉汤培养基中，37℃摇床培养18h，加入400μL浓度50％(V/V)的无菌甘油，于
‑
80℃超低温冰箱中冻存备用。
[0034]冻存菌株活化培养后用MRS肉汤培养基进行扩培，用天根细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株DNA，16S rRNA扩增采用菌落PCR技术完成，通过采用通用引物27F/1492R对其基因组总DNA为模板进行PCR扩增，PCR产物测序由生工生物工程(上海)有限公司完成，经测序可知，其16S rRNA序列如SEQ ID No.3所示。将序列与NCBI中BLAST进行比对，其中一株与标准菌株Lactobacillus casei strain JGB29的相似率达98.45％，可初步鉴定该菌株为干酪乳杆菌(Lactobac本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干酪乳杆菌GS0605，其特征在于，该菌株GS0605于2023年5月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.27393。2.由权利要求1所述的干酪乳杆菌GS0605制备的菌剂，其特征在于，所述菌剂可用于大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌或痢疾志贺氏菌的防治。3.如权利要求1所述的干酪乳杆菌GS0605在制备抗结肠癌药物或抗结肠癌辅助药物中的应用。4.如权利要求1所述的干酪乳杆菌GS0605在与抗癌药物联用辅助抗结肠癌中的应用。5.一种抗结肠癌药...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳碧松，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：