一种用于定量检测BNP的试剂盒及其制备方法技术

本申请实施例属于生物医药技术领域，涉及一种用于定量检测BNP的试剂盒及其制备方法，包括将配制的荧光微球标记抗BNP标记抗体溶液和荧光微球标记羊抗鸡IgY标记抗体溶液混合均匀，得到荧光微球标记混合溶液；将荧光微球标记混合溶液喷至预处理的空白结合垫上，制得结合垫；将制备的检测线包被液和质控线包被液分别喷涂至反应板上相互间隔平行设置的划膜线，形成检测线和质控线；将预先制备的样品垫、结合垫、反应板以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；将检测试纸安装于试纸壳内，制得检测卡；将检测卡、样本稀释液以及BNP芯片组装，得到试剂盒。本申请提供的技术方案能够提高检测速度、缩短检测时间，检测灵敏度高、特异性强。特异性强。特异性强。

【技术实现步骤摘要】
一种用于定量检测BNP的试剂盒及其制备方法


[0001]本申请涉及生物医药
，更具体地，涉及一种用于定量检测BNP的试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]BNP(B
‑
type Natriuretic Peptide，B
‑
型利钠肽)是心肌细胞合成和分泌的一种肽类激素，是反映心功能的重要生物学标志物。BNP主要是依据患者心功能情况进行分泌的，在患者心功能异常时，BNP水平数值会显著的提升，它的含量与心室的压力、呼吸困难的程度、神经激素调节系统的状况成正比。
[0003]BNP是利钠肽家族成员之一，利钠肽最初是由de Bold等人发现的。二十一世纪中叶，美国心脏病学会及美国心脏学会采取重大举措，改进应用已久的临床检测标准，颁布心衰分组与治疗最新指南，明确地把BNP作为最重要的标志物之一。
[0004]目前测定BNP的方法有：酶免疫法(EIA)、放射免疫法(RIA)、电化学发光免疫分析法(CLIA)、高灵敏度的免疫放射法(IRMA)等。
[0005](1)酶免疫方法(EIA)是较为常用的一种技术，是通过固相的抗原或者抗体和酶标后的抗原和抗体结合，常见的结合方式有双抗夹心法和间接法。酶联免疫法主要原理是采用双抗夹心的方法进行检测，包被抗体吸附于固相的载体表面，用来和特异抗原结合，当待测物中含有特异抗原时，与其形成抗原
‑
抗体的复合物，再加入另一种用酶标记的抗体作为检测抗体。
[0006]这种方式可以保留酶的活性和抗体的免疫学活性，用来提高ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附剂测定)方法的灵敏度。酶标记后的抗体会和待测物中抗原的不同表位结合形成抗体
‑
抗原
‑
抗体的双抗夹心复合物，形成的复合物也被结合在固相载体上，加入酶反应的底物后，底物会被酶催化成有色产物，有色产物颜色的深浅则可以判断待测物中抗原的浓度，从而进行定性或者定量的实验。
[0007]但是，该方法检测时间较长、检测范围窄。
[0008](2)放射免疫法(RIA)是利用同位素标记的与未标记的抗原，同抗体发生竞争性抑制反应的方法。该方法会有交叉反应、操作时长较长、仪器价格高、并且有一定的辐射对操作员有一定的损伤。
[0009](3)化学发光免疫分析法(CLIA)是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。该方法检测精度不高，仪器设备的成本较高。
[0010](4)高灵敏度的免疫放射法(IRMA)灵敏度和特异性高，且不需要分离纯化血浆，比RIA法快捷实用，但仍需花费5～36小时，花费时间长，不适用于全自动分析系统。
[0011]综上，在提高BNP的检测速度、缩短BNP的检测时间的基础上，提高BNP的检测灵敏度和特异性是亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0012]本申请实施例所要解决的技术问题是相关技术中，BNP检测不能同时兼顾检测时间、检测速度以及检测灵敏度的技术问题。
[0013]为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种用于定量检测BNP的试剂盒的制备方法，采用了如下所述的技术方案：
[0014]配制荧光微球标记BNP抗体溶液和荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体溶液，将所述荧光微球标记抗BNP标记抗体溶液和所述荧光微球标记羊抗鸡IgY标记抗体溶液混合均匀，得到荧光微球标记混合溶液；
[0015]将所述荧光微球标记混合溶液喷至预处理的空白结合垫上，制得结合垫；
[0016]制备检测线包被液和质控线包被液，将所述检测线包被液和所述质控线包被液分别喷涂至一反应板上相互间隔平行设置的划膜线，形成检测线和质控线，其中，所述检测线包被BNP抗体，所述质控线包被鸡IgY抗体；
[0017]将预先制备的样品垫、所述结合垫、所述反应板以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；
[0018]将所述检测试纸安装于试纸壳内，制得检测卡；
[0019]将所述检测卡、样本稀释液以及BNP芯片进行组装，得到试剂盒。
[0020]进一步的，所述配制荧光微球标记BNP抗体溶液的步骤包括：
[0021]将荧光微球加入标记缓冲液中混匀，得到缓冲混合液；
[0022]将标记活化液加入所述缓冲混合液中，混匀，得到活化混合液；
[0023]对所述活化混合液依次进行旋转反应和离心反应，留取沉淀；
[0024]往沉淀中加入标记缓冲液，并进行超声反应，得到超声反应物；
[0025]将BNP标记抗体加入超声反应物中，混匀，进行旋转反应，得到第一标记抗体反应物；
[0026]对所述第一标记抗体反应物依次进行超声反应、封闭操作以及离心操作，往离心得到的沉淀中加入标记保存液，进行超声操作，得到第一沉淀混合液；
[0027]将所述第一沉淀混合液混匀，制得荧光微球标记BNP抗体溶液。
[0028]进一步的，所述配制荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体溶液的步骤包括：
[0029]将荧光微球加入标记缓冲液中混匀，得到缓冲混合液；
[0030]将标记活化液加入所述缓冲混合液中，混匀，得到活化混合液；
[0031]对所述活化混合液依次进行旋转反应和离心反应，留取沉淀；
[0032]往沉淀中加入标记缓冲液，并进行超声反应，得到超声反应物；
[0033]将羊抗鸡IgY标记抗体加入超声反应物中，混匀，进行旋转反应，得到第二标记抗体反应物；
[0034]对所述第二标记抗体反应物依次进行超声反应、封闭操作以及离心操作，往离心得到的沉淀中加入标记保存液，进行超声操作，得到第二沉淀混合液；
[0035]将所述第二沉淀混合液混匀，制得荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体溶液。
[0036]进一步的，所述将所述荧光微球标记抗BNP标记抗体溶液和所述荧光微球标记羊抗鸡IgY标记抗体溶液混合均匀，得到荧光微球标记混合溶液的步骤包括：
[0037]将所述荧光微球标记抗BNP标记抗体溶液和所述荧光微球标记羊抗鸡IgY标记抗
体溶液，按照体积比1：1混合均匀，并进行超声操作，制得荧光微球标记混合溶液。
[0038]进一步的，所述制备检测线包被液和质控线包被液，将所述检测线包被液和所述质控线包被液分别喷涂至反应板上，形成检测线和质控线的步骤包括：
[0039]使用预配制的抗体包被稀释液将BNP抗体进行稀释，得到检测线包被液；
[0040]使用所述抗体包被稀释液稀释鸡IgY抗体，得到质控线包被液；
[0041]将所述检测线包被液和所述质控线包被液，按照预设划膜条件在反应板上进行喷涂划膜，得到对应的检测线和质控线。
[0042]进一步的，所述检测线和所述质控线间隔平行设置，所述检测线和所述质控线之间的距离为5
±
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测BNP的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：配制荧光微球标记BNP抗体溶液和荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体溶液，将所述荧光微球标记抗BNP标记抗体溶液和所述荧光微球标记羊抗鸡IgY标记抗体溶液混合均匀，得到荧光微球标记混合溶液；将所述荧光微球标记混合溶液喷至预处理的空白结合垫上，制得结合垫；制备检测线包被液和质控线包被液，将所述检测线包被液和所述质控线包被液分别喷涂至一反应板上相互间隔平行设置的划膜线，形成检测线和质控线，其中，所述检测线包被BNP抗体，所述质控线包被鸡IgY抗体；将预先制备的样品垫、所述结合垫、所述反应板以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；将所述检测试纸安装于试纸壳内，制得检测卡；将所述检测卡、样本稀释液以及BNP芯片进行组装，得到试剂盒。2.根据权利要求1所述的用于定量检测BNP的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述配制荧光微球标记BNP抗体溶液的步骤包括：将荧光微球加入标记缓冲液中混匀，得到缓冲混合液；将标记活化液加入所述缓冲混合液中，混匀，得到活化混合液；对所述活化混合液依次进行旋转反应和离心反应，留取沉淀；往沉淀中加入标记缓冲液，并进行超声反应，得到超声反应物；将BNP标记抗体加入超声反应物中，混匀，进行旋转反应，得到第一标记抗体反应物；对所述第一标记抗体反应物依次进行超声反应、封闭操作以及离心操作，往离心得到的沉淀中加入标记保存液，进行超声操作，得到第一沉淀混合液；将所述第一沉淀混合液混匀，制得荧光微球标记BNP抗体溶液。3.根据权利要求1所述的用于定量检测BNP的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述配制荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体溶液的步骤包括：将荧光微球加入标记缓冲液中混匀，得到缓冲混合液；将标记活化液加入所述缓冲混合液中，混匀，得到活化混合液；对所述活化混合液依次进行旋转反应和离心反应，留取沉淀；往沉淀中加入标记缓冲液，并进行超声反应，得到超声反应物；将羊抗鸡IgY标记抗体加入超声反应物中，混匀，进行旋转反应，得到第二标记抗体反应物；对所述第二标记抗体反应物依次进行超声反应、封闭操作以及离心操作，往离心得到的沉淀中加入标记保存液，进行超声操作，得到第二沉淀混合液；将所述第二沉淀混合液混匀，制得荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体溶液。4.根据权利要求1所述的用于定量检测BNP的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述将所述荧光微球标记抗BNP标记抗体溶液和所述荧光微球标记羊抗鸡IgY标记抗体溶液混合均匀，得到荧光微球标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘秀华，蒋析文，齐文闯，刘双，文金强，苏松康，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：