一种基于点击化学的Mcl-1蛋白标记探针、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种基于点击化学的Mcl

【技术实现步骤摘要】
一种基于点击化学的Mcl
‑
1蛋白标记探针、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于合成与检测
，具体涉及一种基于点击化学的Mcl
‑
1蛋白标记探针、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]细胞凋亡是细胞受到某种信号刺激后进行的程序化死亡，可以清除动物体内无功能、有害、突变以及受损的细胞，在维持机体稳态和胚胎生长发育等方面发挥着重要作用。Bcl
‑
2蛋白家族是细胞凋亡信号通路中的重要调控因子。根据结构和功能的不同，该蛋白家族可分为促凋亡的Bcl
‑
2蛋白(如Bax、Bak和Bok)、BH3
‑
only蛋白(如Bad、Bid和Noxa)和抗凋亡Bcl
‑
2蛋白(如Bcl
‑
2、Bcl
‑
xL和Mcl/>‑
1)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于点击化学的Mcl
‑
1蛋白标记探针，其特征在于，包括Mcl
‑
1蛋白特异性靶向因子点击反应模块BCN
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ID以及荧光标记点击反应模块Tz
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BODIPY，两个模块可通过点击化学反应快速结合；BCN
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ID和Tz
‑
BODIPY的结构式如下：BCN
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ID和Tz
‑
BODIPY通过点击化学反应结合后的结构式如下：2.如权利要求1所述的一种基于点击化学的Mcl
‑
1蛋白标记探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将5
‑
氯吲哚
‑2‑
羧酸乙酯与N
‑
Boc
‑3‑
氨基丙基溴在碳酸铯的催化作用下进行取代反应，制备化合物1；(2)将化合物1溶于二氯甲烷和三氟乙酸进行脱Boc反应，制备化合物2；(3)将化合物2进行水解反应，制备化合物3；(4)将对硝基氯甲酸苯酯和exo
‑
双环[6.1.0]壬
‑4‑
炔
‑9‑
基甲醇在吡啶的催化作用下进行酯化反应，制备化合物4；(5)将化合物3和化合物4在保护气氛下进行胺解反应，制备Mcl
‑
1蛋白特异性靶向因子点击反应模块BCN
‑
ID；
(6)将甲基戊酰氯和吡咯类化合物在有机溶剂中进行缩合反应，制备化合物5；(7)将化合物5进行水解反应，制备化合物6；(8)将化合物6和草酰氯进行酰化反应，所得产物与(4
‑
(6
‑
甲基
‑
1,2,4,5
‑
四嗪环
‑3‑
基)苯基)甲胺盐酸盐反应制备荧光标记点击反应模块Tz
‑
BODIPY；3.如权利要求2所述的一种基于点击化学的Mcl
‑
1蛋白标记探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)包括如下步骤：将5
‑
氯吲哚
‑2‑
羧酸乙酯溶解在有机溶剂中，然后加入碳酸铯，搅拌；缓慢滴加含有N
‑
Boc
‑3‑
氨基丙基溴的有机溶剂，在室温下继续搅拌过夜；待反应完成后，过滤并洗涤，真空浓缩滤液；粗产物纯化，得到化合物1；优选的，所述有机溶剂包括乙腈；进一步优选的，5
‑
氯吲哚
‑2‑
羧酸乙酯、乙腈、碳酸铯、N
‑
Boc
‑3‑
氨基丙基溴的用量比为2～3：15～25：4～5：2～3，g：mL：g：g；优选的，将5
‑
氯吲哚
‑2‑
羧酸乙酯溶解在有机溶剂中，在室温下搅拌5～10分钟，进一步优选为5分钟；优选的，加入碳酸铯后，继续搅拌20～40分钟，进一步优选为30分钟；优选的，采用乙酸乙酯进行洗涤；优选的，粗产物通过硅胶柱层析纯化；或，步骤(2)包括如下步骤：将化合物1溶于二氯甲烷和三氟乙酸中，室温下搅拌；待反应完成后旋蒸，粗产物纯化，得到化合物2；优选的，二氯甲烷和三氟乙酸的体积比为1:1；化合物1、二氯甲烷、三氟乙酸的用量比为1～3：3～7：3～7，g：mL：mL；优选的，室温下搅拌2～4小时；进一步优选为3小时；优选的，粗产物通过硅胶柱层析纯化。4.如权利要求2所述的一种基于点击化学的Mcl
‑
1蛋白标记探针的制备方法，其特征在
于，步骤(3)包括如下步骤：将化合物2、碱溶液和乙醇的混合物加热回流2～4小时，冷却至室温后倒入冰水中，用酸调节pH至5，沉淀出化合物3；优选的，所述碱为4％NaOH溶液，质量百分数；化合物2、4％NaOH溶液、乙醇的用量比为1～3：8～12：8～12，g：mL：mL；优选的，所述酸为冰醋酸；或，步骤(4)包括如下步骤：将对硝基氯甲酸苯酯加入到exo
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双环[6.1.0]壬
‑4‑
炔
‑9‑
基甲醇的CH2Cl2和吡啶的溶液中，在室温下搅拌20～40分钟后，停止反应，并用CH2Cl2提取；有机层干燥，并浓缩；粗产物纯化，得到化合物4，固化过夜；优选的，加入饱和NH4Cl溶液停止反应；对硝基氯甲酸苯酯、exo
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双环[6.1.0]壬
‑4‑
炔
‑9‑
基甲醇、CH2Cl2、吡啶、饱和NH4Cl溶液的用量比为150～300：100～300：5～10：200～300：5～10，mg：mg：mL：μL：mL；优选的，有机层用无水硫酸镁干燥，并在真空中浓缩，粗产物通过硅胶柱层析纯化；优选的，所述硅胶柱层析的洗脱剂为石油醚和...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐波，王栩，李勇，张建功，解希雷，张建，焦晓云，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：